น้ำเปปโตน: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025

น้ำเปปโตนเป็นสื่อกลางในการเพิ่มปริมาณของเหลว nonselective ส่วนใหญ่ที่ใช้เป็นอาหารเจือจางหรือวัสดุอื่น ๆ สื่อจากมุมมองทางเคมีนี้ง่ายมากประกอบด้วยเปปโตนจากเนื้อสัตว์โซเดียมคลอไรด์และน้ำ

มีคุณค่าทางโภชนาการที่แน่นอนช่วยเพิ่มคุณค่าให้กับตัวอย่าง หากมีแบคทีเรียที่ถูกทำร้ายสื่อนี้จะมีพลังในการซ่อมแซมความมีชีวิต มีประโยชน์อย่างยิ่งในการฟื้นตัวของแบคทีเรียในตระกูล Enterobacteriaceae

น้ำเปปโตนในขวด ที่มา: MSc. Marielsa Gil

ในกรณีของการฟื้นตัวของเชื้อ Salmonellas แนะนำให้ใช้ตัวแปรน้ำเปปโตนแบบบุฟเฟ่ต์ ซึ่งทำหน้าที่เป็นสื่อก่อนการเพิ่มคุณค่าสำหรับตัวอย่างในกรณีนี้ประกอบด้วยองค์ประกอบอื่น ๆ เช่นไดโซเดียมฟอสเฟตและไดโปแทสเซียมฟอสเฟต

โดยปกติน้ำเปปโตนจะถูกเตรียมที่ pH เป็นกลางอย่างไรก็ตามมีตัวแปรอื่น ๆ ที่จำเป็นสำหรับค่า pH คือ 8.5 ± 0.2 (อัลคาไลน์) เนื่องจากแบคทีเรียที่จะแยกได้นั้นเป็นอัลคาลิฟิลิกเช่น เชื้อวิบริโออหิวาตกโรค.

นอกจากนี้ยังสามารถใช้เป็นสื่อพื้นฐานสำหรับการทดสอบการหมักคาร์โบไฮเดรต

รากฐาน

เปปโตนให้สารอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียโดยเฉพาะไนโตรเจนและกรดอะมิโนสายสั้นในขณะที่โซเดียมคลอไรด์รักษาสมดุลออสโมติก

นอกจากนี้ตัวกลางยังช่วยในการกระจายตัวทำให้เป็นเนื้อเดียวกันและซ่อมแซมเซลล์แบคทีเรียที่ได้รับความเสียหายจากกระบวนการทางอุตสาหกรรม

ในฐานะที่เป็นตัวเจือจางจึงเหมาะอย่างยิ่งการเปลี่ยนสารละลายทางสรีรวิทยา (SSF) หรือสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) อย่างมีประสิทธิภาพ

การเติบโตของแบคทีเรียเห็นได้ชัดจากการสังเกตความขุ่นของมัน

การจัดเตรียม

การเตรียมแบบโฮมเมด (ไม่ใช่เชิงพาณิชย์)

ชั่งเปปโตน 1 กรัมและโซเดียมคลอไรด์ 8.5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ควรปรับ pH เป็น 7.0 สำหรับสิ่งนี้สามารถใช้โซเดียมคลอไรด์ 1N

การเตรียมโดยใช้สื่อทางการค้า

หนัก 15 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำแล้วละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ทำให้ส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกัน หากจำเป็นให้ต้มส่วนผสมเป็นเวลา 1 นาทีเพื่อช่วยในการละลายทั้งหมด เสิร์ฟในขวดขนาด 100 มล. หรือหลอด 10 มล. ตามต้องการ นึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที

เย็นและใช้หรือเก็บในตู้เย็น pH สุดท้ายของตัวกลางคือ 7.2 ± 0.2

สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจอ่อนและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีเหลืองอ่อน

การเตรียมการทดสอบการหมัก

สำหรับการเตรียมก่อนหน้านี้ - ก่อนการฆ่าเชื้อ - ต้องเติมคาร์โบไฮเดรตลงในความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1% รวมทั้งตัวบ่งชี้ Andrade (กรดฟุคซิน) หรือฟีนอลเรด (0.018 กรัม / ลิตร) ท่อควรติดตั้งกระดิ่งเดอแรมเพื่อสังเกตการก่อตัวของก๊าซ

น้ำเปปโทนอื่น ๆ

น้ำเปปโตนบัฟเฟอร์หรือบัฟเฟอร์

ประกอบด้วยไฮโดรไลเซตของเอนไซม์เคซีนโซเดียมคลอไรด์ไดไฮโดรเจนโพแทสเซียมฟอสเฟตและโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟตโดเดคาไฮเดรต pH สุดท้ายคือ 7.0 ± 0.2

สำหรับการเตรียมอาหารให้ชั่งน้ำหนัก 20 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำแล้วละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร พักไว้ประมาณ 5 นาที อุ่นเป็นเวลา 1 นาทีจนละลายหมด

เทลงในขวดที่เหมาะสมตามต้องการ ฆ่าเชื้อโดยใช้หม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที

- น้ำเปปโตนอัลคาไลน์

หนัก 25 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำ 1 ลิตร ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น pH อยู่ในช่วง 8.3 ถึง 8.7

ใช้

หัวเชื้อทำได้โดยการวางตัวอย่างโดยตรง

ใช้เพื่อเจือจางตัวอย่างโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อสงสัยว่าอาจมีแบคทีเรียที่เสียหาย โดยปกติการเจือจางคือ 1:10 และ 1: 100

ฟักตัวเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิคที่อุณหภูมิ 35-37 องศาเซลเซียส

ตัวอย่างอุจจาระ

สำหรับตัวอย่างอุจจาระสำหรับเชื้อซัลโมเนลลาแนะนำให้ใช้น้ำบัฟเฟอร์หรือน้ำบัฟเฟอร์เป็นอาหารเสริม

โดยดำเนินการดังต่อไปนี้:

หากเกิดอุจจาระขึ้นให้ใช้ตัวอย่าง 1 กรัม หากเป็นของเหลวให้นำอุจจาระ 1 มล. และแขวนไว้ในหลอดที่มีน้ำเปปโตน 10 มล. ในกรณีของการดูดทางทวารหนักให้ปล่อยวัสดุที่มีอยู่ในไม้กวาดลงในท่อด้วยน้ำเปปโตนที่บัฟเฟอร์

ในทุกกรณีให้ผสมและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันตัวอย่างเป็นอย่างดี

บ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมง ต่อมาวัฒนธรรมย่อยในน้ำซุปที่เพิ่มคุณค่าเช่นน้ำซุปซีลีไนต์ซีสตีนหรือน้ำซุปเตตระไธโอเนตที่อุณหภูมิ 37 ° C นาน 18-24 ชั่วโมง สุดท้ายให้เพาะเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ Salmonella เช่น SS agar, XLD agar, Hektoen agar เป็นต้น

ตัวอย่างอาหาร

น้ำเปปโตนถูกใช้เป็นตัวกลางในการเพิ่มคุณค่าหรือเป็นสารเจือจางอย่างง่าย แต่หากต้องการหาชนิดของเชื้อซัลโมเนลลาก็จะใช้เป็นสื่อก่อนการเพิ่มคุณค่าตามที่อธิบายไว้แล้ว

ในอาหารดำเนินการดังนี้:

สำหรับอาหารแข็งน้ำหนัก 25 กรัมของตัวอย่างและสำหรับอาหารเหลวให้วัด 25 มิลลิลิตร ใส่ส่วนที่กล่าวไว้ในขวดที่มีน้ำเปปโตน 225 มล. ผสมและทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน

หากสงสัยว่าภาระของจุลินทรีย์มีค่าสูงสามารถทำการเจือจางแบบอนุกรมหรือทศนิยมเพื่ออำนวยความสะดวกในการนับจำนวนหน่วยสร้างอาณานิคม (CFU)

จำนวนการเจือจางจะขึ้นอยู่กับประเภทของตัวอย่างและประสบการณ์ของผู้วิเคราะห์

ในทางตรงกันข้ามหากสงสัยว่าปริมาณจุลินทรีย์ต่ำมากก็ไม่จำเป็นต้องทำการเจือจาง ต่อจากนั้นวัฒนธรรมย่อยบนสื่อที่เลือก

ในกรณีของอาหารจากทะเลเช่นหอยปลาเป็นต้นในการค้นหา Vibrio cholerae หรือ Vibrio สายพันธุ์อื่นควรใช้น้ำเปปโตนที่ปรับ pH 8.5 (น้ำอัลคาไลน์เปปโตน)

ระบบประกันคุณภาพ

จากแต่ละชุดที่เตรียมไว้ควรบ่มท่อ 1-2 หลอดโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิคที่อุณหภูมิ 37 ° C เมื่อสิ้นสุดเวลาไม่ควรสังเกตความขุ่นหรือการเปลี่ยนสี

นอกจากนี้ยังสามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักเพื่อประเมินประสิทธิภาพ:

สามารถใช้แบคทีเรียสายพันธุ์ต่อไปนี้: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076

ในทุกกรณีคาดว่าจะมีการพัฒนาจุลินทรีย์ที่น่าพอใจซึ่งสังเกตได้จากความขุ่นของตัวกลาง

ข้อ จำกัด

- ตัวกลางที่ขาดน้ำจะดูดความชื้นได้มากดังนั้นจึงต้องเก็บไว้ให้ห่างจากความชื้น

- ไม่ควรใช้ตัวกลางหากพบการเสื่อมสภาพทุกประเภท

- ควรเก็บอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำไว้ระหว่าง 10 - 35 ° C

- สื่อที่เตรียมไว้ต้องเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C)

อ้างอิง

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B และVelázquez O. เทคนิคการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหาร 2009, 2nd ed. คณะเคมี UNAM. เม็กซิโก เวอร์ชันสำหรับผู้ดูแลระบบ Manuals and Documents (AMyD) ของคณะเคมี UNAM 1. มีจำหน่ายที่: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories น้ำเปปโตนแบบบุฟเฟ่ต์ 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
3. ห้องปฏิบัติการนีโอเจน น้ำเปปโตน. มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories น้ำเปปโตน. 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
5. ห้องปฏิบัติการเมอร์ค น้ำเปปโตนบัฟเฟอร์ มีจำหน่ายที่: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. น้ำอัลคาไลน์เปปโตน. มีจำหน่ายที่: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina