SABOURAUD AGAR: รองพื้นการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

วุ้น Sabouraudยังเป็นที่รู้จัก Sabouraud Dextrose วุ้นเป็นสื่อที่เป็นของแข็งที่อุดมด้วยโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกและการพัฒนาของเชื้อราเช่นยีสต์เชื้อราและ dermatophytes

ดังนั้นจึงไม่สามารถขาดสื่อนี้ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาเพื่อตรวจสอบการปรากฏตัวของเชื้อราที่ทำให้เกิดโรคหรือฉวยโอกาสทั้งจากตัวอย่างทางคลินิกหรือที่ไม่ใช่ทางคลินิก นอกจากนี้ยังเหมาะสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่มีเส้นใยเช่น Streptomyces และ Nocardias การใช้งานนั้นกว้างมากเนื่องจากสามารถใช้ในมนุษย์สัตว์พืชและเนื้องอกวิทยาอุตสาหกรรม

A. วุ้น Sabouraud ที่ไม่ได้ใส่เมล็ด B. Sabouraud agar ที่เพาะเมล็ดด้วยยีสต์ ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil

สื่อนี้ถูกสร้างขึ้นในปี พ.ศ. 2439 โดยแพทย์ผิวหนังชื่อดัง Raimond Sabouraud ซึ่งกลายเป็นผู้เชี่ยวชาญด้านความผิดปกติของหนังศีรษะที่มีชื่อเสียงระดับโลกซึ่งส่วนใหญ่เกิดจากโรคผิวหนัง

การสร้างมันมีความสำคัญมากจนถูกนำมาใช้และยังคงอยู่จนถึงทุกวันนี้แม้ว่าจะมีการปรับเปลี่ยนบางอย่างก็ตาม

แม้ว่าจะมีความพิเศษสำหรับเชื้อรา แต่แบคทีเรียก็สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารชนิดนี้ดังนั้นสำหรับตัวอย่างที่มีพืชผสมกันการรวมยาปฏิชีวนะในการเตรียมสารจำเป็นเพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่อาจมีอยู่

การเลือกใช้ยาปฏิชีวนะต้องทำอย่างรอบคอบและคำนึงถึงชนิดของเชื้อราที่จะหายเนื่องจากบางชนิดถูกยับยั้งเมื่อมีสารบางชนิด

รากฐาน

Sabouraud dextrose agar เป็นสื่อที่ในสูตรดั้งเดิมมีการคัดเลือกอย่างอ่อนเนื่องจาก pH เป็นกรดที่ 5.6 ± 0.2 อย่างไรก็ตามแบคทีเรียยังสามารถพัฒนาได้โดยส่วนใหญ่อยู่ในการฟักตัวเป็นเวลานาน

ตัวกลางประกอบด้วยเคซีนเปปโตนและตับอ่อนที่ย่อยสลายของเนื้อเยื่อสัตว์ซึ่งเป็นแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์

นอกจากนี้ยังมีกลูโคสที่มีความเข้มข้นสูงซึ่งทำหน้าที่เป็นแหล่งพลังงานส่งเสริมการเติบโตของเชื้อรามากกว่าแบคทีเรีย ทั้งหมดนี้ผสมกับ agar-agar ซึ่งเป็นส่วนประกอบที่ให้ความสม่ำเสมอที่เหมาะสม

ในทางกลับกัน Sabouraud dextrose agar สามารถเลือกได้หากมีการเพิ่มยาปฏิชีวนะ

ด้วยยาปฏิชีวนะจะมีประโยชน์อย่างยิ่งในตัวอย่างบาดแผลแผลเปิดหรือตัวอย่างใด ๆ ที่สงสัยว่ามีการปนเปื้อนของแบคทีเรียมาก

ส่วนใหญ่นิยมใช้ผสมระหว่าง Sabouraud dextrose agar กับยาปฏิชีวนะ

-Saburaud agar with chloramphenicol: เหมาะสำหรับการฟื้นตัวของยีสต์และเชื้อราที่มีเส้นใย

- Sabouraud agar ที่มี gentamicin และ chloramphenicol: เชื้อราและยีสต์ที่มีเส้นใยเกือบทั้งหมดเติบโตในอาหารชนิดนี้และยับยั้งแบคทีเรียจำนวนมากรวมถึง Enterobacteriaceae, Pseudomonas และ Staphylococcus

- Sabouraud agar with cycloheximide: มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างจากผิวหนังหรือทางเดินหายใจตราบใดที่สงสัยว่าเป็นเชื้อรา dimorphic

ควรใช้ Cycloheximide ด้วยความระมัดระวัง แม้ว่ามันจะถูกใช้เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราและยีสต์ที่ไม่ก่อให้เกิดโรคหรือสิ่งแวดล้อมที่อาจมีอยู่เป็นสารปนเปื้อนในตัวอย่าง แต่ก็ยังยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราบางชนิดเช่น Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp และเชื้อราฉวยโอกาสอื่น ๆ

- Sabouraud agar with chloramphenicol plus cycloheximide: ส่วนใหญ่ใช้เพื่อแยกเชื้อรา dermatophytes และ dimorphic มีข้อเสียคือยับยั้งเชื้อราฉวยโอกาสบางชนิดเช่น Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes หรือ C. neoformans

- Sabouraud agar with chloramphenicol, streptomycin, penicillin G และ cycloheximide: เหมาะสำหรับตัวอย่างที่ปนเปื้อนแบคทีเรียและเชื้อรา saprophytic อย่างมาก แต่มีข้อเสียคือยับยั้งการเจริญเติบโตของ Actinomyces และ Nocardias นอกเหนือจากเชื้อราฉวยโอกาสที่กล่าวข้างต้น

การจัดเตรียม

หากคุณมีส่วนผสมแยกกันสามารถเตรียมได้ดังนี้:

Sabouraud dextrose agar

ในการชั่งน้ำหนัก:

- เดกซ์โทรส 40 กรัม

- เปปโตน 10 กรัม

- วุ้นวุ้น 15 กรัม

- ตวงน้ำกลั่น 1000 มล

ส่วนผสมทั้งหมดผสมกัน pH ปรับเป็น 5.6 ตัวถูกละลายจะละลายโดยการต้มโดยกระจายตัวกลาง 20 มล. ในท่อขนาด 25 x 150 มม. โดยไม่มีขอบและควรใช้ฝาฝ้าย

หลอดพร้อมฝาฝ้าย ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil

นอกจากนี้ยังสามารถใช้หลอดขนาดอื่น ๆ ได้ขึ้นอยู่กับความพร้อมใช้งาน

นึ่งเป็นเวลา 10 นาทีที่บรรยากาศความกดดัน (121 ° C) ไม่ควรเกินเวลาในการนึ่ง เมื่อออกจากหม้อนึ่งท่อจะเอียงด้วยความช่วยเหลือของตัวค้ำจนกว่าจะแข็งตัวในปากเป่าขลุ่ย

อีกวิธีหนึ่งคือการละลายส่วนผสมโดยให้ความร้อนจนเดือด นึ่งเป็นเวลา 10 นาทีในขวดเดียวกันจากนั้นแจกจ่าย 20 มล. ในจาน Petri

หากคุณมีอาหารวุ้น Sabouraud dextrose ที่มีส่วนผสมทั้งหมดอยู่แล้วให้ดำเนินการชั่งน้ำหนักตามที่ บริษัท การค้ากำหนดสำหรับน้ำหนึ่งลิตร ขั้นตอนที่เหลือจะเหมือนกับขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้น

Sabouraud dextrose agar (การปรับเปลี่ยน Emmons)

ในการชั่งน้ำหนัก:

- เดกซ์โทรส 20 กรัม

- เปปโตน 10 กรัม

- วุ้น - วุ้น 17 กรัม

- ตวงน้ำกลั่น 1000 มล

ส่วนผสมทั้งหมดผสมกัน pH ปรับเป็น 6.9 ดำเนินการในลักษณะเดียวกับกรณีก่อนหน้านี้

มีอาคารพาณิชย์ที่เสนอของกลางพร้อมส่วนผสมทั้งหมด ในกรณีนี้ให้ชั่งน้ำหนักและเตรียมตามที่อธิบายไว้บนเม็ดมีด

Sabouraud dextrose agar (การปรับเปลี่ยน Emmons) ด้วย chloramphenicol

สารละลายคลอแรมเฟนิคอล

- ชั่งน้ำหนักคลอแรมเฟนิคอล 500 มก

- ตวงเอทานอล 95% 100 มล

- ผสม

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้และสำหรับขนาดกลางแต่ละลิตรเติมสารละลายคลอแรมเฟนิคอล 10 มล. ก่อนที่จะนึ่ง

Sabouraud Emmons Dextrose Agar กับ Cycloheximide

โซลูชันหุ้นไซโคลเฮกซิไมด์

- ชั่งไซโคลเฮกซิไมด์หนัก 5 กรัม

- ตวงอะซิโตน 100 มล

- ผสม

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้แล้วและนอกจากนี้สำหรับแต่ละลิตรของสื่อเติมสารละลายสต็อกไซโคลเฮกซิไมด์ 10 มล. ก่อนที่จะนึ่ง

Sabouraud dextrose agar (Emmons) ที่มีคลอแรมเฟนิคอลและไซโคลเฮกซิไมด์

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้แล้วและนอกจากนี้สำหรับขนาดกลางแต่ละลิตรให้เติมสารละลายสต็อกคลอแรมเฟนิคอล 10 มล. และสารละลายสต็อกไซโคลเฮกซิไมด์ 10 มล. ก่อนจะนึ่ง

ยาปฏิชีวนะอื่น ๆ ที่สามารถเพิ่มได้

เพนิซิลิน 20,000 ถึง 60,000 หน่วยต่อลิตรของกลาง

Streptomycin 30 มก. ต่อลิตรของตัวกลาง

ต้องรวมทั้งสองอย่างไว้ด้วยกันหลังจากที่สื่อได้รับการนึ่งแล้วเย็นลงเล็กน้อย (50-55 ° C)

นีโอมัยซิน 0.04 กรัมต่อลิตรของตัวกลาง

gentamicin 0.04 กรัมต่อลิตรของตัวกลาง

ข้อควรพิจารณาพิเศษ

เพื่อความปลอดภัยควรหว่าน Sabouraud dextrose agar ในหลอดรูปลิ่ม (เอียงในปากฟลุต) แทนที่จะใส่ในจาน Petri เพื่อหลีกเลี่ยงการกระจายและการสูดดมสปอร์

เป็นสิ่งสำคัญที่ท่อวุ้นของ Sabouraud จะถูกหุ้มด้วยผ้าฝ้ายและไม่ใช่ด้วยฝาเกลียวเนื่องจากสภาวะกึ่งไม่ใช้ออกซิเจนได้แสดงให้เห็นว่าสามารถยับยั้งการสร้างสปอร์ในบางสายพันธุ์ได้เช่น Coccidioides immitis นอกจากนี้เชื้อราส่วนใหญ่ยังเป็นแบบแอโรบิค

ในกรณีที่ใช้ฝาเกลียวอย่าปิดให้สนิท

ระบบประกันคุณภาพ

สื่อที่เตรียมต้องได้รับการควบคุมคุณภาพเพื่อตรวจสอบการทำงานที่เหมาะสม ด้วยเหตุนี้จึงมีการหว่านสายพันธุ์ควบคุมบางชนิด

สำหรับ Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol สามารถใช้ Candida albicans สายพันธุ์ ATCC ซึ่งต้องมีการเจริญเติบโตที่ดีเยี่ยม อีกจานถูกฉีดวัคซีนด้วยเชื้อ Escherichia coli ซึ่งจะต้องถูกยับยั้งอย่างสมบูรณ์

นอกจากนี้ยังมีการบ่มแผ่นที่ไม่ได้ใส่ปุ๋ยซึ่งไม่ควรมีจุลินทรีย์เติบโต

สำหรับ Sabouraud dextrose agar ที่มี chloramphenicol และ cycloheximide สามารถใช้ Trichophyton mentagrophytes ได้และควรพัฒนาได้ดี อีกจานถูกฉีดวัคซีนด้วยสายพันธุ์ Aspergillus flavus ซึ่งจะต้องมีการเจริญเติบโตเพียงเล็กน้อยหรือไม่มีเลย นอกจากนี้ยังมีการบ่มแผ่นที่ไม่ได้ใส่ปุ๋ยเพื่อแสดงความเป็นหมัน

สำหรับ Sabouraud dextrose agar ที่มี cycloheximide จะใช้สายพันธุ์ Candida albicans, Trichophyton rubrum หรือ Microsporum canis ซึ่งต้องมีการเจริญเติบโตที่ดี

ในทำนองเดียวกันมีการรวมสายพันธุ์ของ Aspergillus flavus ซึ่งแสดงการเจริญเติบโตเพียงเล็กน้อยหรือไม่มีเลย ขั้นสุดท้ายให้บ่มแผ่นที่ไม่มีเชื้อเพื่อควบคุมความเป็นหมัน

การประยุกต์ใช้งาน

วัฒนธรรมหลัก

Classic Sabouraud dextrose agar มีเดกซ์โทรส 4 กรัมและยอดเยี่ยมในการเป็นตัวกลางในการแยกเชื้อหลักเนื่องจากแสดงถึงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเชื้อราแต่ละชนิด

นอกจากนี้ยังยอดเยี่ยมสำหรับการสาธิตการผลิตเม็ดสี อย่างไรก็ตามไม่ใช่วิธีที่ดีที่สุดในการสังเกตการสร้างสปอร์

ไม่แนะนำให้ปลูก Blastomyces dermatitidis ซึ่งถูกยับยั้งโดยกลูโคสที่มีความเข้มข้นสูง

ในทางกลับกันการเพาะปลูกต้องคำนึงถึงข้อควรพิจารณาบางประการด้วย

เชื้อราบางชนิดเติบโตได้ดีที่สุดที่อุณหภูมิห้องเช่นเชื้อราบางชนิดเติบโตได้ดีที่อุณหภูมิ 37 ° C เช่นยีสต์บางชนิดและเชื้อราอื่น ๆ สามารถเติบโตได้ทั้งสองอุณหภูมิ (เชื้อราไดมอร์ฟิก)

ด้วยเหตุนี้บางครั้งจึงจำเป็นต้องใช้แผ่นวุ้น Sabouraud หลายแผ่นสำหรับตัวอย่างเดียวกันเนื่องจากการเพาะเมล็ดที่ซ้ำกันมักจะทำเพื่อบ่มแผ่นหนึ่งที่อุณหภูมิห้องและอีกแผ่นหนึ่งที่อุณหภูมิ 37 ° C

ตัวอย่างเช่น Sporothrix schenckii หว่านในสองจาน หนึ่งถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเพื่อให้ได้ระยะของเชื้อราและอีกตัวหนึ่งถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เพื่อให้ได้ระยะของยีสต์ แต่ในตอนหลังจำเป็นต้องเติมเลือด 5% ลงในตัวกลาง

ในกรณีอื่น ๆ เช่นตัวอย่าง mycetoma จะมีการเพาะแผ่นวุ้น Sabouraud สองแผ่นแผ่นหนึ่งมีคลอแรมเฟนิคอลและอีกแผ่นหนึ่งมีไซโคลเฮกซิไมด์ สิ่งแรกจะช่วยให้การเจริญเติบโตของสาเหตุของเชื้อราที่ก่อให้เกิดเชื้อรา (Eumycetoma) และสาเหตุที่สองของ mycetoma จากแหล่งกำเนิดแบคทีเรียเช่น actinomycetomas

สร้างสปอร์

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar มีเดกซ์โทรส 2 กรัมและไม่เพียง แต่ใช้ในการแยกเชื้อ แต่ยังใช้สำหรับการสร้างสปอร์และการเก็บรักษาเชื้อราด้วย

ในสื่อนี้สามารถกู้คืนสายพันธุ์ของ Blastomyces dermatitidis ได้

การอนุรักษ์

เพื่อรักษาเชื้อเห็ดสามารถเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) เวลาในการอนุรักษ์อาจแตกต่างกันไประหว่าง 2 ถึง 8 สัปดาห์ หลังจากเวลานี้พวกเขาจะต้องได้รับวัฒนธรรมย่อยเพื่อทำซ้ำขั้นตอนนี้

เชื้อราบางชนิดเก็บได้ดีที่สุดที่อุณหภูมิห้องเช่น Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum และ Microsporum audounii

การบำรุงรักษาความเครียดสามารถทำให้ยาวขึ้นเพื่อหลีกเลี่ยงภาวะเยื่อหุ้มปอดได้หากเดกซ์โทรสถูกกำจัดออกจากวุ้นอย่างสมบูรณ์และหากปริมาณวุ้นในอาหารลดลงเพื่อหลีกเลี่ยงความแห้งกร้าน

Microcultures

สำหรับการระบุเชื้อราที่มีเส้นใยบางชนิดจำเป็นต้องทำการเพาะเลี้ยงขนาดเล็กโดยใช้วุ้น Sabouraud หรือวิธีพิเศษอื่น ๆ เพื่อสังเกตโครงสร้างของการสืบพันธุ์แบบอาศัยเพศและการสืบพันธุ์แบบไม่อาศัยเพศ

ในมนุษย์วิทยา

ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการวินิจฉัยโรคเชื้อราโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่มีผลต่อผิวหนังและสิ่งที่แนบมา (ผมและเล็บ)

ตัวอย่างอาจเป็นสารคัดหลั่งสารหลั่งผิวหนังผมเล็บเสมหะน้ำไขสันหลังหรือปัสสาวะ เชื้อโรคที่แยกได้โดยทั่วไป ได้แก่ dermatophytes เชื้อราที่ทำให้เกิด mycoses ใต้ผิวหนังและในระบบ

สัตว์วิทยา

สัตว์มักได้รับผลกระทบจากการติดเชื้อราดังนั้น Sabouraud agar จึงมีประโยชน์ในด้านเนื้องอกวิทยาของสัตว์เช่นเดียวกับในมนุษย์

ตัวอย่างเช่น dermatophytes มักมีผลต่อสัตว์ ดังกล่าวเป็นกรณีของ Microsporum canis var Distortion ซึ่งมักติดเชื้อในสุนัขแมวม้าหมูและลิง ในทำนองเดียวกัน Microsporum gypseum ติดเชื้อในสุนัขแมวและปศุสัตว์

นกเช่นไก่เจื้อยแจ้วและไก่ได้รับผลกระทบจาก Microsporum gallinae

เชื้อราอื่น ๆ เช่น Zymonema farciminosum ก็เป็นสาเหตุของโรคในสัตว์ส่วนใหญ่ม้าล่อและลาทำให้เกิดการอักเสบที่สำคัญในท่อน้ำเหลือง

Sporothrix schenkii และ Histoplasma capsulatum มีผลต่อสัตว์เลี้ยงและมนุษย์

เนื้องอกวิทยาสิ่งแวดล้อม

เชื้อราที่ทำให้เกิดโรคหรือฉวยโอกาสหลายชนิดสามารถรวมตัวกันได้ตลอดเวลาในสภาพแวดล้อมที่กำหนดโดยเฉพาะในห้องผ่าตัดและห้องผู้ป่วยหนัก (ICU) ของคลินิกและโรงพยาบาล ดังนั้นจึงจำเป็นต้องดำเนินการควบคุมพวกมัน

พื้นที่เสี่ยงอื่น ๆ ได้แก่ ห้องสมุดและอาคารเก่าซึ่งอาจได้รับผลกระทบจากความเข้มข้นของเชื้อราในสิ่งแวดล้อม

ในการศึกษาด้านสิ่งแวดล้อม Sabouraud dextrose agar ใช้สำหรับการแยกเชื้อรา

เนื้องอกวิทยาอุตสาหกรรม

ไม่สามารถขาด Sabouraud dextrose agar สำหรับการศึกษาการปนเปื้อนเชื้อราในการผลิตเครื่องสำอางอาหารเครื่องดื่มเครื่องหนังสิ่งทอและอื่น ๆ

พืชเชื้อรา

พืชยังต้องทนทุกข์ทรมานจากโรคที่เกิดจากเชื้อราส่งผลกระทบต่อส่วนต่าง ๆ ของพืชซึ่งอาจทำให้การเก็บเกี่ยวสิ้นสุดลงทำให้เกิดความสูญเสียในการเกษตร

อ้างอิง

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของเชื้อราและการศึกษาความไวต่อเชื้อรา คำแนะนำของสมาคมโรคติดเชื้อและจุลชีววิทยาคลินิกแห่งสเปน มีจำหน่ายที่: coesant-seimc.org
2. ห้องปฏิบัติการ ValteK (2009) Sabouraud dextrose agar ที่มีไซโคลเฮกซิไมด์ มีจำหน่ายที่: andinamedica.com
3. นาวาร์โรโอ. (2013). สัตววิทยาทางสัตวแพทย์. มหาวิทยาลัยเกษตรแห่งชาติ. นิการากัว
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Mycology ทั่วไป 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. เวเนซุเอลาการากัส