- รากฐาน
- ลักษณะเฉพาะ
- ส่วนประกอบ
- ใช้
- กระบวนการ
- การย้อมโครงสร้างเชื้อราของวัฒนธรรม
- การย้อมสีตัวอย่างทางชีววิทยาโดยตรง
- หลอดเชื้อโรคย้อมสีในการระบุ
- เอกสารข้อมูลความปลอดภัยของแลคโตฟีนอล
- สุขภาพ
- การลุกไหม้ได้
- ความไม่แน่นอน
- อันตรายพิเศษ
- อ้างอิง
สีฟ้า lactophenolหรือผ้าฝ้ายสีฟ้าพร้อมกับคุณสมบัติการย้อมสีเดียว ใช้ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกเพื่อสร้างสีโครงสร้างของเชื้อราเป็นหลักเช่น hyphae ท่อจมูกและสปอร์
ช่วยในการวินิจฉัยเชื้อราบางชนิดโดยสันนิษฐานหรือเบื้องต้น แต่ขอแนะนำให้เสริมการวินิจฉัยด้วยการทดสอบที่เฉพาะเจาะจงมากขึ้นเช่นการทดสอบทางชีวเคมีหรือเซรุ่มวิทยา
การแสดงภาพกราฟิกของคราบสีน้ำเงินของแลคโตฟีนอลซึ่งเปื้อนด้วยแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินการเตรียมด้วยกล้องจุลทรรศน์ ที่มา: public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8
Lactophenol blue ประกอบด้วยกรดแลคติกอนิลีนบลูกลีเซอรีนฟีนอลและน้ำปราศจากไอออน สามารถเตรียมในห้องปฏิบัติการหรือซื้อพร้อมใช้งานได้ เมื่อเตรียมแล้วก็พร้อมใช้งานไม่ควรเจือจางไม่ว่าในกรณีใดเนื่องจากการกระทำนี้จะให้ผลลัพธ์ที่น่ากลัว
ความเข้มข้นของส่วนประกอบทำให้เหมาะสำหรับการย้อมสีโครงสร้างของเชื้อราเนื่องจากฟีนอลกำจัดจุลินทรีย์ที่มากับแบคทีเรียในขณะที่กรดแลคติกจะสร้างฟิล์มป้องกันรอบ ๆ โครงสร้างของเชื้อรา ในที่สุดอะนิลีนบลูมีความสัมพันธ์ที่จะยึดติดกับโครงสร้างของเชื้อรา
รากฐาน
ด้วยแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินการย้อมสีโครงสร้างเชื้อราอย่างง่ายของวัฒนธรรมเชื้อราบางชนิดจะดำเนินการ เรียกว่าเรียบง่ายเพราะใช้เพียงสีเดียว
แลคโตฟีนอลบลูนอกเหนือจากการย้อมสีแล้วยังทำหน้าที่เป็นตัวทำให้เกิดความกระจ่างของตัวอย่างด้วยการทำงานร่วมกันของกรดแลคติกและฟีนอลนอกจากนี้ฟีนอลยังทำหน้าที่เป็นสารช่วยในการย่อยสลายและในขณะเดียวกันก็ป้องกันการแตกตัวของจุลินทรีย์โดยการยับยั้งเอ็นไซม์ไฮโดรไลติกที่ อาจมีอยู่
ในขณะที่กรดแลคติกรักษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของโครงสร้างของเชื้อรา
ในทางกลับกันอะนิลีนบลูมีคุณสมบัติในการยึดติดหรือผูกมัดกับโครงสร้างที่มีไคติน โครงสร้างมีสีฟ้าอ่อน
ควรสังเกตว่าผนังเซลล์ของจุลินทรีย์เชื้อราโดยเฉพาะเชื้อรามีไคตินซึ่งเป็นสาเหตุที่สีย้อมนี้เหมาะสำหรับการย้อมสีจุลินทรีย์เหล่านี้
ลักษณะเฉพาะ
สารละลายสีน้ำเงินแลคโตฟีนอลเป็นสีย้อมที่เป็นกรดอย่างมากมีเมฆมากเล็กน้อยซึ่งมีสีฟ้าอ่อน มันยังคงมีเสถียรภาพหากเก็บไว้ระหว่าง 15 ° C ถึง 25 ° C ต้องปิดขวดให้เหมาะสม ระคายเคืองและกัดกร่อนผิวหนังและเยื่อเมือก
ส่วนประกอบ
สูตรในการเตรียมแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินหนึ่งลิตรมีดังนี้:
-250 g / L กรดแลคติก
-1.0 g / L อะนิลีนบลูหรือเมทิลบลู
-500 กรัม / ลิตรของกลีเซอรีน
-250 g / L ฟีนอล
-250 มล. น้ำกลั่นปราศจากไอออนหรือน้ำกลั่น
ฟีนอลละลายในน้ำอุ่นก่อนหน้านี้ กรดแลคติกและกลีเซอรีนจะถูกเพิ่มและผสมกันมาก ในที่สุดอะนิลีนสีน้ำเงินก็สลายไป ผสมอีกครั้งและพร้อมใช้งาน
ส่วนที่ต้องเตรียมสารละลายสีน้ำเงินแลคโตฟีนอล 80 มล. ได้แก่
ผลึกฟีนอล -20 กรัม
กรดแลคติก -20 มล
กลีเซอรีนหรือกลีเซอรอล -40 มล
น้ำกลั่น -20 มล.
ใช้
ใช้สำหรับย้อมโครงสร้างของเชื้อราและโดยอาศัยลักษณะทางสัณฐานวิทยาที่สังเกตได้ในระดับกล้องจุลทรรศน์เพื่อให้สามารถวินิจฉัยเชื้อราได้โดยสันนิษฐาน
กระบวนการ
การย้อมโครงสร้างเชื้อราของวัฒนธรรม
- รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของเชื้อราที่มีโครงสร้างที่ต้องสังเกต
- ควรทำงานในเครื่องดูดควันแบบไหลแบบลามิเนตหรือใต้ไฟแช็กโดยใช้หน้ากากและถุงมือเนื่องจากจำเป็นต้องปฏิบัติตามมาตรฐานความปลอดภัยทางชีวภาพเนื่องจากแม่พิมพ์ส่วนใหญ่แพร่กระจายได้ง่ายในสิ่งแวดล้อมดังนั้นจึงแสดงถึงอันตราย สำหรับผู้ปฏิบัติงาน
- หยดแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินวางบนสไลด์
- ตัดเทปกาวคุณภาพดีสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ และติดไว้ที่ปลายด้ามจับแพลทินัมที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยความเย็นอย่างระมัดระวัง
- ที่จับแพลตตินั่มถูกนำมาใกล้กับส่วนที่ผิวเผินที่สุดของกลุ่มเชื้อราและสัมผัสวัฒนธรรมอย่างระมัดระวังตรงตำแหน่งที่ติดเทปกาว
- จากนั้นนำไปที่สไลด์และวางลงบนหยดแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินโดยดูแลให้เทปยืดออกอย่างสมบูรณ์และหล่อลื่นด้วยสีย้อม ที่จับแพลตตินั่มถูกถอดออกอย่างประณีต
- วางแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินอีกหยดลงบนเทปและมีฝาปิดด้านบน อย่าใช้แรงกดมากเกินไปเพื่อไม่ให้ทำลายโครงสร้างของเชื้อราเนื่องจากมีความเปราะบางมาก ควรปล่อยให้สีทำหน้าที่ประมาณ 3 ถึง 4 นาที
- หลังจากเวลานี้การเตรียมการพร้อมที่จะสังเกตเห็นภายใต้กล้องจุลทรรศน์ด้วยกำลังขยาย 10X หรือ 40X หากต้องการการสังเกต 100X ควรใช้น้ำมันแช่
- โดยทั่วไปโครงสร้างของเชื้อราจะย้อมสีฟ้ายกเว้นเชื้อราที่ไม่สามารถทำลายได้ซึ่งจะคงลักษณะสีน้ำตาลของเชื้อราประเภทนี้ไว้
การย้อมสีตัวอย่างทางชีววิทยาโดยตรง
หากจำเป็นต้องศึกษาตัวอย่างทางชีววิทยาโดยตรงเช่นเสมหะหนองสารคัดหลั่งสารคัดหลั่งและอื่น ๆ สิ่งเหล่านี้จำเป็นต้องมีขั้นตอนก่อนหน้าสำหรับการปนเปื้อนของตัวอย่าง สารละลาย NaOH ใช้สำหรับสิ่งนี้
ในกรณีของตัวอย่างผมสามารถย้อมได้โดยตรง
เส้นขนที่ได้รับผลกระทบหลายเส้น (ทั้งหมด 10 เส้น) ถูกนำมาจากรอยโรคเกลื้อน capitis (บริเวณที่มีผมร่วง) และวางไว้บนสไลด์ (3 ถึง 4 เส้นต่อสไลด์) หยดแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินสองสามหยดวางไว้ด้านบนและปิดด้วยผ้าคลุมทันที
จับสไลด์ด้วยคีมและความร้อนเบา ๆ บนเตา ในการทำเช่นนี้ให้เดินผ่านเปลวไฟอย่างรวดเร็ว 3 ถึง 4 ครั้ง สังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่ 40X และมองหาสปอร์ภายนอกหรือภายในเส้นผม (ectothrix หรือ endothrix ตามลำดับ) หากจำเป็นให้เติมน้ำมันแช่และสังเกตที่ 100X
หลอดเชื้อโรคย้อมสีในการระบุ
หลังจากบ่มเพาะเชื้อ Candida albicans ในซีรั่มของมนุษย์เป็นเวลา 2 ถึง 4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C ส่วนหนึ่งของสารละลายจะถูกนำมาและย้อมด้วย lactophenol blue การเตรียมจะสังเกตเห็นภายใต้กล้องจุลทรรศน์ที่ 40X มีท่อเชื้อโรคอยู่และบลาสโตสปอร์มีสีฟ้าสดใส
เอกสารข้อมูลความปลอดภัยของแลคโตฟีนอล
สมาคมป้องกันอัคคีภัยแห่งชาติ (NFPA) จัดทำเอกสารข้อมูลความปลอดภัยสำหรับสารเคมีในแง่ของความเสี่ยงที่แสดงถึงตามแง่มุมต่างๆซึ่งมีสัญลักษณ์เป็นรูปสี่เหลี่ยมขนมเปียกปูนสีและตัวเลขตั้งแต่ 0- สี่
อันตรายต่อสุขภาพระบุเป็นสีน้ำเงินความสามารถในการติดไฟเป็นสีแดงความไม่เสถียรหรือการเกิดปฏิกิริยาเป็นสีเหลืองและอันตรายพิเศษใด ๆ เป็นสีขาว
สุขภาพ
ความเสี่ยงต่อสุขภาพที่เกิดจากแลคโตฟีนอลสีน้ำเงินตาม NFPA คือระดับ 3 ซึ่งหมายความว่าสารนี้มีอันตรายอย่างมากเมื่อกินเข้าไปหรือสัมผัสโดยตรงกับผิวหนังหรือเยื่อบุ
เป็นสารที่มีฤทธิ์กัดกร่อนและระคายเคืองสูง
เมื่อสัมผัสกับผิวหนังและเยื่อเมือกจะทำให้เกิดแผลไหม้อย่างรุนแรง
หากรับประทานเข้าไปอาจทำให้เกิดอาการปวดศีรษะสับสนซึมหมดสติหยุดหายใจและอาจเสียชีวิตได้
การลุกไหม้ได้
ตาม NFPA แลคโตฟีนอลบลูได้รับการจัดระดับ 1 สำหรับความไวไฟ ซึ่งหมายความว่ามันจะไหม้เฉพาะเมื่อได้รับความร้อนสูงกว่า 94 ° C
ความไม่แน่นอน
แสดงรายการตาม NFPA ที่ระดับ 0 (ศูนย์) ในแง่ของการเกิดปฏิกิริยา ซึ่งหมายความว่ามันไม่มีความเสี่ยงต่อการเกิดปฏิกิริยานั่นคือเป็นสารที่มีความเสถียรทางเคมี
อันตรายพิเศษ
ไม่มีอันตรายพิเศษเพิ่มเติม
อ้างอิง
- ห้องปฏิบัติการ SAR แลคโตฟีนอลบลู. 2553. มีจำหน่ายที่: labsar.com.
- ห้องปฏิบัติการเคมีคลินิกประยุกต์. แลคโตฟีนอลสีน้ำเงิน 2558 มีจำหน่ายที่: cromakit.es
- ห้องปฏิบัติการเมอร์ค กล้องจุลทรรศน์สีน้ำเงินแลคโตฟีนอลในสารละลาย 2017 มีจำหน่ายที่: Users / Equipo / Downloads
- บัตรฉุกเฉิน. Lactophenol blue solution สำหรับการย้อมเชื้อรา Universidad Pontificia Javeriana, Bogotáโคลอมเบีย 2014 ดูได้ที่: javeriana.edu.co
- González M, Diamont D, Gutiérrez B. เทคนิคการย้อมโครงสร้างเชื้อราด้วยสีย้อมผักเป็นทางเลือกที่ไม่ก่อให้เกิดมลพิษ ไบโออาโกร 2554; 23 (1): 65-68. มีจำหน่ายที่: Redalyc
- ห้องปฏิบัติการ Himedia แลคโตฟีนอลคอตตอนบลู 2017 ได้จาก: himedialabs.com
- Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, นักแสดง J, Dasgupta A. การทดสอบทางชีวเคมีและเทคนิคการย้อมสีสำหรับการระบุจุลินทรีย์ วิทยาศาสตร์โดยตรง, 2017; 61-73 มีให้จาก: Elsevier