- รากฐาน
- การจัดเตรียม
- สารละลาย Aceto-orcein 1%
- Lacto-proponic solution orcein 1%
- Orcein A และ Orcein B
- ความคิดสุดท้าย
- อ้างอิง
orceínaเป็นธรรมชาติสีม่วงสกัดจากไลเคนต่างๆ Orchilla หรือ archill, fruticose ตะไคร่ Rocella tinctoria และ Lecanora parella ส่วนใหญ่ Rocella tinctoria พบในทวีปแอฟริกันและอเมริกาแม้ว่ามันจะถูกแทนที่ด้วยสายพันธุ์อื่นที่อยู่ในยุโรป
คราบนี้ถูกใช้กันอย่างแพร่หลายในการศึกษาทางเซลล์พันธุศาสตร์มาตั้งแต่สมัยโบราณ ในแง่นี้การเตรียม orcein ที่มีกรดอะซิติกถูกนำมาใช้โดย LaCourt ในปีพ. ศ. 2484 ซึ่งเป็นสาเหตุที่เรียกว่าเทคนิค LaCourt ในตอนแรก
โครงสร้างทางเคมีของสารละลาย orcein และ orcein ที่มา: Wikipedia.org/ Oguenther ที่ de.wikipedia (Dr. Guenther)
ในทำนองเดียวกันเนื่องจากความเรียบง่ายและต้นทุนต่ำจึงถูกนำมาใช้ในการผลิตกระดาษลิตมัส (คราบที่สกัดจากไลเคน) และในการศึกษาทางเนื้อเยื่อ (การย้อมสีของเซลล์และเนื้อเยื่อ)
งานวิจัยหลายชิ้นได้ใช้การย้อมสีนี้ร่วมกับสารเคมีอื่น ๆ เช่นแอมโมเนียพิโครคาร์มิเนตและกรดอะซิติกเพื่อย้อมเส้นใยยืดหยุ่นและโครโมโซมตามลำดับ ในปัจจุบันยังคงใช้ orcein ในการศึกษาเซลล์สืบพันธุ์ของสัตว์และพืช
เมื่อเร็ว ๆ นี้ Silva et al. 2017 ประสบความสำเร็จในการใช้คราบนี้เพื่อสังเกตการเปลี่ยนแปลงต่างๆที่เกิดขึ้นในเส้นใยยืดหยุ่นของผิวหนังของนิ้วหัวแม่มือในผู้สูงอายุชาวชิลี การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเส้นใยของนิ้วหัวแม่มือเปลี่ยนแปลงไปอย่างไรตามอายุ
ในแง่นี้เส้นใยยืดหยุ่นถูกสังเกตว่ามีสีน้ำตาล - ดำในผู้ที่มีอายุมากกว่า 80 ปี ในขณะที่อายุน้อยที่สุด (จาก 60 ปี) จะเห็นเป็นสีน้ำตาลแดง ไซโทพลาสซึมและโครงสร้างเซลล์อื่น ๆ เปลี่ยนเป็นสีเหลืองอมเขียว
สิ่งนี้อนุญาตให้ยืนยันการมีอยู่และสภาพของเส้นใยยืดหยุ่นในแง่ของการจำหน่ายปริมาณและความสมบูรณ์ ในทางกลับกันมีการระบุด้วยว่า orcein มีส่วนช่วยอย่างมากในการระบุหลอดเลือดโป่งพองและวินิจฉัยภาวะหลอดเลือดแดงอักเสบรวมถึงภาวะอื่น ๆ
รากฐาน
Orcein เป็นส่วนหนึ่งของกลุ่มสีย้อมออกซาซีนและการย้อมสีจะขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์กับดีเอ็นเอ สีย้อมจับกับประจุลบของโมเลกุลนี้ซึ่งแสดงโดยหมู่ฟอสเฟต นั่นคือสาเหตุที่โครโมโซมเปื้อนสีม่วง
อย่างไรก็ตามโครงสร้างของเซลล์ที่เหลือมีสีที่แตกต่างกัน โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของเส้นใยยืดหยุ่นจะมีสีน้ำตาลแดงนิวเคลียสของเซลล์จากสีน้ำเงินเป็นสีม่วงเข้มในขณะที่คอลลาเจนไม่เปื้อน
ด้วยเหตุนี้ orcein จึงถูกใช้เพื่อย้อมสีโครมาตินและแยกเพศในแมลงวันบางชนิด ในทำนองเดียวกันนิวเคลียสและการรวมกันของตับบางส่วนที่ผลิตโดยแอนติเจนของไวรัสตับอักเสบบีสามารถย้อมสีได้
สารละลาย Orcein มีหน้าที่เฉพาะในการย้อมสี Orcein A มีหน้าที่ทำให้เยื่อหุ้มเซลล์อ่อนตัวลงทำให้เกิดการตายและทำให้กระบวนการแบ่งตัวเป็นอัมพาต ในขณะเดียวกัน orcein B มีหน้าที่ในการย้อมสีให้เสร็จสิ้นโดยการยึดติดกับโครโมโซม
การจัดเตรียม
สารละลาย Aceto-orcein 1%
ในการเตรียมสารละลาย aceto-orcein 1% orcein 2 กรัมจะถูกละลายในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 45 มล. ควรให้ร้อนจัดและเติมน้ำกลั่น 55 มล. ที่อุณหภูมิห้อง
จากนั้นผสมอย่างต่อเนื่องเพื่อทำให้สารละลายเป็นเนื้อเดียวกันปล่อยทิ้งไว้จนเย็นในภายหลัง สุดท้ายจะถูกเก็บไว้ที่4ºCในขวดโหลสีเข้ม Flores 2012 ใช้การเตรียมการนี้เพื่อสังเกตระยะการเจริญเติบโตของไข่วัว
ตัวอย่างเช่นในกรณีนี้สารละลาย aceto-orcein จะถูกวางลงบนเนื้อเยื่อที่ได้รับการแก้ไขก่อนหน้านี้ในกรดอะซิติก - เอทานอลเป็นเวลา 24 ชั่วโมง กระบวนการย้อมสีนี้ดำเนินการเป็นเวลา 30 นาทีและเนื้อเยื่อจะเปลี่ยนสีในภายหลัง
ในทำนองเดียวกันสามารถใช้ในการระบุออร์แกเนลล์ในเนื้อเยื่อหลายเซลล์ ในกรณีนี้รอยเปื้อนของเยื่อบุกระพุ้งแก้มจะถูกย้อมด้วยสารละลายอะซิโต - ออร์ซินหยดหนึ่งฝาปิดจะถูกวางไว้บนสไลด์และสามารถสังเกตเห็นนิวเคลียสของเซลล์ที่มีโครงสร้างย่อยได้ทันที
Lacto-proponic solution orcein 1%
นอกจากนี้ยังสามารถเตรียม orcein ร่วมกับสารเคมีอื่น ๆ เช่นกรดแลคติกและกรดโพรพิโอนิก ในการทำเช่นนี้ orcein หนึ่งกรัมจะละลายในสารละลายผสมที่อุณหภูมิห้อง 23 มล. ของกรดแลคติกและกรดโพรพิโอนิก 23 มล. สร้างปริมาตรด้วยน้ำกลั่นสูงถึง 100 มล.
ด้วยสารละลายแลคโต - โพรพิโอนิกออร์ซีนนี้สามารถสังเกตเห็นขั้นตอนต่างๆของการแบ่งเซลล์พืชแบบไมโอติก ในกรณีนี้ตัวอย่างที่ติดตั้งไว้ล่วงหน้าและไฮโดรไลซ์จะถูกวางไว้เป็นเวลา 15 นาทีในสารละลายแลคโต - โพรพิโอนิกออร์ซีนจากนั้นเนื้อเยื่อจะถูกแพร่กระจายบนสไลด์ด้วยกล้องจุลทรรศน์
ในการศึกษาโครโมโซมโพลีเจนิกในปี 2559 ของ Duque เขาใช้การเตรียม orcein 2 กรัมเจือจางในกรดอะซิติกและกรดแลคติก 85% เจือจางด้วยสารละลายกรดอะซิติก 65% สุดท้ายเขาดูโครโมโซมในต่อมน้ำลายของแมลงหวี่เมลาโนแคสเตอร์
Orcein A และ Orcein B
สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าขึ้นอยู่กับตัวอย่างและสิ่งที่จะต้องประเมินสารละลาย orcein ที่เหมาะสมถูกเตรียมไว้ ดังนั้นตัวอย่างเช่นกรดไฮโดรคลอริก 1N จะถูกเติมลงในสารละลาย orcein A เพื่อสังเกตการแบ่งเซลล์
ในขณะที่สารละลาย orcein B ละลายในกรดอะซิติก 45% เทคนิคนี้เป็นวิธีการย้อมสีแบบย่อและโดยทั่วไปใช้เป็นส่วนเสริมในการย้อมสีของโครงสร้างโครโมโซม
ความคิดสุดท้าย
ตั้งแต่หลายศตวรรษที่ผ่านมาไลเคนเช่น Lecanora, Parmelia และ Umbilicaria สามารถพบได้ในประเทศต่างๆในทวีปอเมริกาเช่นอาร์เจนตินาซึ่งเป็นแหล่งที่ดีของ orcein นอกจากนี้พื้นที่ในยุโรปเช่นหมู่เกาะคะเนรียังเป็นช่วงเวลาที่ผู้ผลิตกล้วยไม้รายใหญ่
สิ่งนี้ถูกส่งออกไปยังเมืองอื่น ๆ ในทวีปเดียวกันนี้เช่นเจนัวและประเทศต่างๆเช่นอังกฤษในขณะที่ฮอลแลนด์ผูกขาดการผลิตกระดาษลิตมัสจากกล้วยไม้ ดังนั้นในเวลาต่อมาตะไคร่นี้จึงลดจำนวนลงจนใกล้จะสูญพันธุ์
สิ่งนี้ทำให้กล้วยไม้ถูกแทนที่ด้วยพืชชนิดอื่นที่มีคุณสมบัติในการย้อม อย่างไรก็ตามการเกิดขึ้นของสีย้อมสังเคราะห์มีส่วนทำให้การค้าไลเคนแหล่งออร์ซินยุติลง
สิ่งนี้เป็นไปได้เนื่องจาก Cocq ซึ่งในปีพ. ศ. 2355 ได้อธิบายการสังเคราะห์ของ orcein เมื่อทราบว่าสังเคราะห์โดยสารประกอบฟีนอลิกที่เรียกว่า orcinol อย่างไรก็ตามถึงอย่างไร orcein ธรรมชาติก็ยังคงเป็นที่ต้องการในปัจจุบัน
อาจเป็นเพราะออร์ซินอลเป็นสารประกอบที่มีกลิ่นแรงมากและการได้รับสารเป็นเวลานานอาจมีความเสี่ยงต่อสุขภาพเช่นการสูญเสียความสามารถในการตรวจจับกลิ่น ความเสียหายเหล่านี้ต่อต่อมใต้สมองอาจไปจากชั่วคราวไปเป็นถาวรเมื่อได้รับสารมากขึ้น
อ้างอิง
- Ortega L, García R, Morales C. «การประยุกต์ใช้แลคเกอร์ที่ผลิตโดยเชื้อราเพื่อย่อยสลายสีย้อมจุลินทรีย์ (orcein และ crystal violet) » ยุวชนวิทยา 2. 2558; 633-637 มีจำหน่ายที่: jovenesenlaciencia.ugto.mx
- Barcat J. Orceínaและ Elastic Fibers แพทยศาสตร์ (บัวโนสไอเรส) 2546; 63: 453-456 มีจำหน่ายที่: Medicinabuenosaires.com
- Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. ลักษณะทางจุลพยาธิวิทยาของผิวหน้าที่บินของนิ้วหัวแม่มือในบุคคลชาวชิลีที่มี Dactylogram Fading ญ. หมอผล. 2560; 35 (3): 1107-1113 มีจำหน่ายที่: scielo.conicyt
- Orrillo M, Merideth B. "ชีววิทยาการสืบพันธุ์ของมันฝรั่งและเซลล์พันธุศาสตร์" International Potato Center (CIP) คู่มือทางเทคนิค. ดูได้ที่: research.cip.cgiar.org/
- Flores F. «การเก็บรวบรวมการเพาะเลี้ยงและการเจริญเติบโตในหลอดทดลองของวัววัว (bos taurus) ในที่ราบสูงโบลิเวีย " . มหาวิทยาลัยแห่งชาติ Altiplano, Puno-Peru; 2555 มีจำหน่ายที่: repositorio.unap.edu.pe
- Duque C. Polytenic chromosomes: ดูปรากฏการณ์ endoreduplication มหาวิทยาลัยแห่งชาติโคลอมเบียMedellín; 2559. มีจำหน่ายที่: edu.
- Camarena F. เซลล์และอณูชีววิทยา. คู่มือการปฏิบัติ. มหาวิทยาลัยอิสระแห่งบาฮาแคลิฟอร์เนีย 2560 มีจำหน่ายที่: pez.ens.uabc.mx.
- FAO / IAEA 2018 คู่มือเพื่อแยกความแตกต่างของ Anastrepha ludens (Loew) ที่เป็นสัตว์ป่าและสายพันธุ์จากสายพันธุ์ปกติ ("bi-sexual") และสายพันธุ์ทางพันธุกรรม (Tapachula-7) โดยฉายรังสีและไม่ได้รับการฉายรังสี Guillen Aguilar JC, LópezMuñoz L, López Villalobos EF และ Soto García DN Food and Agriculture Organization of the United Nations โรมอิตาลี 95 หน้า
- Orcein (2018, 30 พฤศจิกายน). Wikipedia สารานุกรมเสรี วันที่ให้คำปรึกษา: 03:38, 31 กรกฎาคม 2019 es.wikipedia.org.
- เมอร์คมิลลิโปร์ (2561 16 กรกฎาคม). Orcein microscopy สำหรับกล้องจุลทรรศน์ Certistain มีจำหน่ายที่: merckmillipore.com