ซิมกลาง: รองพื้นการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา

กลางซิมเป็นกึ่งแข็งและความแตกต่างวุ้นออกแบบมาเป็นพิเศษเพื่อช่วยระบุแบคทีเรียบางชนิดโดยเฉพาะอย่างยิ่ง Enterobacteriaceae ประกอบด้วย triptein, peptone, iron sulfate, ammonium sulfate, sodium thiosulfate และ agar

สื่อนี้ช่วยให้สามารถดำเนินการทดสอบที่สำคัญสามประการ ได้แก่ การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H ₂ S) การก่อตัวของอินโดลและการเคลื่อนที่ดังนั้นจึงใช้ตัวย่อ SIM เนื่องจากประโยชน์ใช้สอยที่ยอดเยี่ยมจึงไม่สามารถขาดได้ในห้องปฏิบัติการแบคทีเรียวิทยา

A. สื่อซิมทางการค้า B. SIM H2S (-), Indole (-) และ Motility (+) Test และ SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+) Test ที่มา: A. ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil B.Mfloayza

แตกต่างจากสื่ออื่น ๆ คือต้องเป็นกึ่งของแข็งเพื่อให้สามารถตรวจจับการเคลื่อนไหวของแบคทีเรียบางชนิดได้ ในแง่นี้การทดสอบนี้ใช้ได้ผลดีกับ Enterobacteriaceae แต่ไม่ใช่ในแท่งแกรมลบที่ไม่ผ่านการหมักซึ่งแนะนำให้ใช้วิธีอื่นเช่นการวางแบบแขวน

สื่อซิมช่วยให้สามารถแยกแยะคุณสมบัติเฉพาะบางอย่างที่บ่งบอกลักษณะของแบคทีเรียบางชนิดที่สัมพันธ์กับแบคทีเรีย ตัวอย่างเช่น Escherichia coli มีความโดดเด่นด้วยการเป็น H ₂ S (-) อินโดล (+) และการเคลื่อนที่ (+) ในขณะที่ Proteus mirabilis คือ H ₂ S (+) อินโดล (-) การเคลื่อนที่ (+)

รากฐาน

เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ถือว่าแตกต่างกันเนื่องจากการใช้งานแยกความแตกต่างระหว่างจุลินทรีย์ที่สามารถผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์จากสิ่งที่ไม่มี นอกจากนี้ยังเน้นถึงสิ่งที่สร้างอินโดลจากทริปโตเฟนจากสิ่งที่ไม่ได้และในที่สุดก็แยกแบคทีเรียที่เคลื่อนที่ออกจากแบคทีเรียที่เคลื่อนที่ไม่ได้

แหล่งพลังงาน

เช่นเดียวกับอาหารเลี้ยงเชื้อทุกชนิดมีองค์ประกอบที่ให้สารอาหารที่จำเป็นเพื่อให้จุลินทรีย์ที่ไม่ต้องการน้ำสามารถพัฒนาได้ องค์ประกอบเหล่านี้แสดงโดย peptones และ triptein

การพัฒนาจุลินทรีย์ในตัวกลางจำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องสามารถสังเกตว่ามีหรือไม่มีลักษณะที่ตัวกลางนี้ประเมินได้

การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์

ตัวอักษร S ของตัวย่อ SIM หมายถึงการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H ₂ S) แบคทีเรียที่สามารถสร้างไฮโดรเจนซัลไฟด์จะดูดซับกำมะถันจากโซเดียมไธโอซัลเฟต

เมื่อเกิดก๊าซH ₂ S -colourless แล้วจะทำปฏิกิริยากับเกลือของเหล็กที่มีอยู่ในตัวกลางทำให้เกิดเฟอร์รัสซัลไฟด์มองเห็นได้ชัดเจน (ตกตะกอนสีดำ) แบคทีเรียที่ไม่ก่อตัวเป็น H ₂ S ให้เหลือสีกลาง (สีเบจ)

การปรากฏตัวของตะกอนสีดำสามารถขัดขวางการตีความการเคลื่อนที่ได้ อย่างไรก็ตามเชื้อ Enterobacteriaceae ที่ผลิต H ₂ S ส่วนใหญ่เป็นที่ทราบกันดีว่ามีการเคลื่อนไหวในเชิงบวกเช่น Salmonella, Proteus และ Citrobacter นอกจากนี้การตกตะกอนสีดำที่ปกคลุมเกือบทั้งตัวกลางยังบ่งบอกถึงการเคลื่อนไหวในเชิงบวก

การก่อตัวของอินโดล

ตัวอักษรตัวที่สองของซิมตัวย่อคือ "I" ซึ่งแสดงถึงการก่อตัวของอินโดล

ในแง่นี้ทริปไทน์นอกเหนือจากการเป็นแหล่งของสารอาหารแล้วยังช่วยเติมเต็มหน้าที่พื้นฐานอีกประการหนึ่ง เปปโตนนี้อุดมไปด้วยกรดอะมิโนที่เรียกว่าทริปโตเฟนดังนั้นจึงสามารถแสดงแบคทีเรียที่สร้างทริปโตฟาเนสได้

เอนไซม์นี้มีหน้าที่ในการแยกกรดอะมิโนทริปโตเฟนโดยมีการก่อตัวของอินโดล (สารไม่มีสี) กรดไพรูวิกและแอมโมเนียม

นั่นคือเหตุผลที่ในการแสดงปฏิกิริยานี้จำเป็นต้องเพิ่มสารที่เปิดเผย (น้ำยาของ Ehrlich หรือน้ำยาของ Kovac) ทั้งสองทำปฏิกิริยากับอินโดลทำให้เกิดสารรูปวงแหวนสีแดงบานเย็นบนพื้นผิวของวุ้น หากวงแหวนสีแดงม่วงปรากฏขึ้นการทดสอบอินโดลจะถูกตีความว่าเป็นบวก

แบคทีเรียที่ไม่มีเอนไซม์นี้จะไม่สร้างวงแหวนและถูกตีความว่าเป็นการทดสอบอินโดลเชิงลบ

สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าการทดสอบอินโดลควรเป็นครั้งสุดท้ายที่จะตีความเนื่องจากเมื่อเติมรีเอเจนต์แล้วตัวกลางจะขุ่นมัวทำให้มองเห็นภาพการเคลื่อนไหวได้ยาก

การเคลื่อนไหว

ในที่สุดตัวอักษร "M" ของคำว่า SIM หมายถึงการเคลื่อนไหว ในการประเมินความสามารถในการเคลื่อนที่ตัวกลางนี้เป็นกึ่งของแข็งเชิงกลยุทธ์เนื่องจากลักษณะนี้จำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องสังเกตว่ามีการเคลื่อนไหวของแบคทีเรียหรือไม่ แบคทีเรียที่มีแฟลกเจลลาเป็นแบคทีเรียที่ให้การทดสอบในเชิงบวกนี้

การทดสอบในเชิงบวกจะเห็นได้ชัดเมื่อสังเกตเห็นความขุ่นทั้งในหัวเชื้อเริ่มต้นและรอบ ๆ ในขณะที่แบคทีเรียที่ไม่เคลื่อนไหวจะพัฒนาในเส้นทางของหัวเชื้อเริ่มต้นเท่านั้น

การจัดเตรียม

ซิมขนาดกลาง

หนัก 30 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ส่วนผสมทิ้งไว้ 5 นาทีแล้วนำไปอุ่นให้เดือดคนบ่อยๆจนละลายหมด

แจกจ่ายส่วนผสมในหลอดทดลองพร้อมฝาฝ้ายและหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ถอดชั้นวางท่อออกจากหม้อนึ่งและปล่อยให้แข็งตัวในแนวตั้งเพื่อให้ตัวกลางอยู่ในรูปของบล็อก

เพื่อการอนุรักษ์จะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้งานได้ สื่อที่เตรียมต้องมี pH สุดท้ายที่ 7.3 ± 0.2

ในช่วงเวลาของการฉีดเชื้อตัวกลางจะต้องอยู่ในอุณหภูมิห้อง สีกลางเป็นสีเบจ

น้ำยาของ Kovac

วัดอะมิลหรือไอโซอะมิลหรือบิวทิลแอลกอฮอล์ 150 มล. (ใช้หนึ่งในสามที่กล่าวถึง)

ละลาย p-dimethylaminobenzaldehyde 10 กรัม จากนั้นค่อยๆเติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 50 มล.

น้ำยาที่พร้อมใช้ไม่มีสีหรือเหลืองอ่อน ควรเก็บไว้ในขวดสีเหลืองอำพันและเก็บไว้ในตู้เย็น อย่าใช้ถ้ามันเปลี่ยนเป็นสีน้ำตาลเข้ม นั่นแสดงว่าเกิดความเสียหาย น้ำยานี้เป็นที่ต้องการเมื่อพูดถึง Enterobacteriaceae

น้ำยาของ Erlich

ชั่ง p-dimethylaminobenzaldehyde 2 กรัมแล้วละลายในเอทิลแอลกอฮอล์ 190 มล. ผสมช้าๆกับกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 40 มล. จัดเก็บในลักษณะเดียวกับน้ำยาของ Kovac น้ำยาของ Ehrlich ใช้มากที่สุดสำหรับแบคทีเรียที่ไม่หมักและไม่ใช้ออกซิเจน

การประยุกต์ใช้งาน

สื่อซิมถูกใช้อย่างมากในห้องปฏิบัติการแบคทีเรียวิทยา ข้อดีของมันคือสามารถสังเกตเห็นลักษณะสำคัญสามประการในหลอดเดียวกันในการระบุ Enterobacteriaceae

หว่าน

วิธีที่ถูกต้องในการหว่านสื่อนี้คือการใช้เข็มซึ่งจะนำส่วนของอาณานิคมบริสุทธิ์ที่จะศึกษาและสอดเข้าไปในแนวตั้งตรงกลางของตัวกลาง ควรทำการแทงครั้งเดียว การเจาะไม่ควรไปถึงด้านล่างของท่อสิ่งที่ถูกต้องคือครอบคลุมเพียงสองในสามของความลึก

ไม่แนะนำให้ใส่หัวเชื้อซ้ำเพราะอาจนำไปสู่การตีความการเคลื่อนที่เชิงบวกที่ผิดพลาด ตัวกลางที่ฉีดวัคซีนจะถูกบ่มแบบแอโรบิคที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง

เมื่อสรุปเวลาได้แล้วจะสังเกตว่ามีการผลิต H ₂ S หรือไม่และมีการอ่านค่าการเคลื่อนที่หรือไม่ ในที่สุดอินโดลก็ถูกเปิดเผยโดยเติมน้ำยาของ Ehrlich หรือ Kovac 3 ถึง 4 หยดผสมเบา ๆ และตีความ

ที่มา: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina

ระบบประกันคุณภาพ

ในการควบคุมการฆ่าเชื้อหลอดหนึ่งหรือสองหลอดจะถูกบ่มโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนในเตาอบที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง คาดว่าหลังจากนี้จะไม่มีการเติบโตหรือเปลี่ยนสี

ในการควบคุมคุณภาพสามารถใช้สายพันธุ์ที่ได้รับการรับรองที่รู้จักกันดีเช่น Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315

ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือ Escherichia coli H ₂ S การเคลื่อนที่เชิงลบอินโดลและการเคลื่อนที่เชิงบวก Enterobacter aerogenes เฉพาะการเคลื่อนที่ในเชิงบวก Salmonella typhimurium H ₂ S และการเคลื่อนที่เชิงบวกกับอินโดลเชิงลบ Proteus vulgaris เป็นบวกทั้งหมดในขณะที่ Klebsiella pneumoniae และ Shigella เป็นผลลบทั้งหมด

ข้อ จำกัด

- Morganella morganii บางสายพันธุ์ในบรรดาสายพันธุ์อื่น ๆ สามารถสร้างเม็ดสีน้ำตาลในตัวกลางนี้ได้เนื่องจากการผลิตเมลานินจึงไม่ควรสับสนกับการตกตะกอนของเฟอร์รัสซัลไฟด์ ในผู้เชี่ยวชาญที่ไม่มีประสบการณ์สถานการณ์นี้สามารถสร้างผลบวกปลอมในการตีความการทดสอบ H ₂ S

- แบคทีเรียประเภทแอโรบิคที่เข้มงวดจะเติบโตที่ผิวของท่อทำให้ยากต่อการตีความการเคลื่อนไหว

อ้างอิง

BD Laboratories BBL SIM ขนาดกลาง 2551. มีจำหน่ายที่: bd.com
ห้องปฏิบัติการนีโอเจน ซิมกลาง มีจำหน่ายที่: foodsafety
Difco Francisco Soria Melguizo ซิมกลาง 2552 ดูได้ที่: http://f-soria.es
ห้องปฏิบัติการ Brizuela-Lab ซิมกลาง มีจำหน่ายที่: .brizuela-lab.com
Britannia Laboratories ซิมกลาง 2558 ดูได้ที่: studyres.es/doc
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina

ซิมกลาง: รองพื้นการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025