การย้อมสีของ HEMATOXYLIN-EOSIN: ลักษณะการใช้งานเทคนิค - เคมี - 2026

hematoxylin - Eosinเป็นเทคนิคการย้อมสีที่ใช้เป็นส่วนผสมของ hematoxylin สีและ Eosin สีย้อมคู่นี้สร้างคู่ที่สมบูรณ์แบบเนื่องจากเฮมาทอกซิลินทำหน้าที่เป็นสีย้อมพื้นฐานและอีโอซินเป็นสีย้อมกรด

การกำหนดสีย้อมพื้นฐานหรือกรดไม่ได้หมายถึง pH ที่ได้รับในสารละลาย แต่พูดถึงสัดส่วนที่มีอยู่ในแง่ของประจุประจุลบหรือประจุบวกที่พวกเขามีอยู่หรือตามตำแหน่งของกลุ่มโครโมโซม

Hematoxylin - eosin (HE) ย้อมสีเยื่อบุผิวคอลัมน์ ciliated ที่มา: Todd Straus และ Vladimir Osipov

ในแง่นี้ hematoxylin ถือเป็นสีย้อมพื้นฐาน (ประจุบวก) ดังนั้นจึงมีความสัมพันธ์กับโครงสร้างของกรดเช่นนิวเคลียสของเซลล์ ในขณะที่อีโอซินเป็นสีย้อมที่เป็นกรด (ประจุลบ) มีความสัมพันธ์กับโครงสร้างอัลคาไลน์หรือโครงสร้างพื้นฐานเช่นไซโทพลาซึมของเซลล์

ด้วยเหตุนี้การผสมของสีย้อมนี้จึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการย้อมสีเนื้อเยื่อเนื่องจากทำให้นิวเคลียสและไซโทพลาสแตกต่างกันอย่างชัดเจน นิวเคลียสมีสีน้ำเงินเข้มหรือสีม่วงและไซโทพลาซึมเป็นสีชมพู

การย้อมสีด้วยฮีมาทอกซิลิน - อีโอซินเป็นหนึ่งในเทคนิคการย้อมสีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านเนื้อเยื่อวิทยาและเซลล์วิทยาเนื่องจากใช้งานง่ายและต้นทุนต่ำ ใช้เพื่อแสดงภาพเซลล์เส้นใยประสาทที่หนาและการปรากฏตัวของจุลินทรีย์บางชนิดในเนื้อเยื่อเช่นปรสิตเชื้อราและแบคทีเรียเป็นต้น

ลักษณะเฉพาะ

เฮมาทอกซิลิน

Hematoxylin เป็นสีย้อมที่เป็นกลาง อย่างไรก็ตามส่วนประกอบที่ให้สี (โครโมฟอร์) จะอยู่ในศูนย์กลางประจุบวกหรือพื้นฐานของโมเลกุล ดังนั้นความสัมพันธ์ของโครงสร้างกรด สูตรทางเคมีคือ C ₁₆ H ₁₄ O ₆และมีชื่อวิทยาศาสตร์คือ 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol

โดยส่วนใหญ่จะย้อมนิวเคลียสของเซลล์เนื่องจากอุดมไปด้วยกรดนิวคลีอิก นอกจากนี้ยังสามารถเปื้อนการรวมไซโตพลาสซึมของแหล่งกำเนิดไวรัส

เพื่อให้ฮีมาทอกซิลินเปื้อนต้องอยู่ในสถานะออกซิไดซ์และผูกติดกับโลหะ หลังจะทำหน้าที่ยึดติดกับเนื้อเยื่อนั่นคือมันจะทำหน้าที่เป็นคนเยาะเย้ย

เมื่อ hematoxylin ถูกออกซิไดซ์เรียกว่า hematein การออกซิเดชั่นทำได้โดยการสัมผัสกับออกซิเจน (อายุ) ของรีเอเจนต์หรือสารที่ช่วยออกซิเดชั่น (การออกซิเดชั่นทางเคมี)

Eosin

Eosin เป็นสีย้อมที่มีสีแดงหรือชมพู ไม่ละลายในน้ำแม้ว่าจะมีรุ่นที่ละลายน้ำได้ โดยทั่วไป eosin เตรียมโดยการละลายในแอลกอฮอล์ (95 ° ethanol)

มันเปื้อนไซโทพลาสซึมเส้นใยกล้ามเนื้อออร์แกเนลล์ไซโตพลาสซึมและคอลลาเจน แต่ไม่เปื้อนนิวเคลียสของเซลล์ เนื่องจากมีประจุลบดังนั้นจึงมีความสัมพันธ์กับโครงสร้างที่มีประจุบวก

eosin "Y" และ "B" มีสองประเภท Eosin "Y" เรียกว่า eosin สีเหลือง ชื่อวิทยาศาสตร์ของมันคือ tetrabromo ชั้น uorescein และสูตรทางเคมีของมันคือ C ₂₀ H ₈ Br ₄ O 5

ในทางกลับกัน eosin "B" บางครั้งเรียกว่า blue erythrosine B ชื่อวิทยาศาสตร์ของมันคือ dibromodynitro ชั้น uorescein และสูตรคือ C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O 9 ทั้งสองมีความคล้ายคลึงกันมากและความแตกต่างระหว่างการใช้อย่างใดอย่างหนึ่งไม่สามารถสังเกตเห็นได้จริง อย่างไรก็ตามที่นิยมมากที่สุดคือ eosin "Y"

Eosin มีคุณสมบัติในการแยกแยะระหว่างเซลล์ที่มีชีวิตและเซลล์ที่ตายแล้วเนื่องจากสามารถข้ามเมมเบรนเพื่อย้อมไซโทพลาสซึมของมันได้เมื่อเซลล์ตายโดยปล่อยให้ไซโทพลาสซึมของเซลล์ไม่มีสีหากยังมีชีวิตอยู่

การประยุกต์ใช้งาน

การย้อมสีเส้นใยประสาท

เส้นใยประสาทที่หนาสามารถย้อมสีและระบุด้วย hematoxylin-eosin อย่างไรก็ตามไม่มีประโยชน์สำหรับการย้อมเส้นใยประสาทบาง ๆ เนื่องจากจำเป็นต้องมีการย้อมสีเงินเพื่อให้เห็นภาพหลัง

คราบผิวหนังส่วนเนื้อเยื่อ

ในการย้อมชั้นที่มีเขาของผิวหนังสีย้อมที่ทำหน้าที่คือ eosin เนื่องจากในระดับนี้เซลล์ไม่มีนิวเคลียส

ในชั้นแกรนูลของผิวหนังฮีมาทอกซิลินจะมีคราบเคราโตไฮยาลินอยู่ภายในเซลล์แกรนูลอย่างมาก ในทางตรงกันข้ามชั้นที่เป็นสปินของผิวหนังจะถูกย้อมด้วยฮีมาทอกซิลินอย่างอ่อน ๆ ในขณะที่ชั้นฐานหรือชั้นเชื้อโรคนั้นค่อนข้างเปื้อน

อีโอซินเปื้อนไซโทพลาซึมของเซลล์ทั้งหมดและความเข้มของสีอาจแตกต่างกันไปในแต่ละชั้น

Hematoxylin-eosin การย้อมตัวอย่างอุจจาระ

Gómez et al. ในปี 2548 แสดงให้เห็นว่าการย้อมสี hematoxylin-eosin มีประสิทธิภาพมากกว่าในการระบุกรณีของโรคอะมีบาเนื่องจาก Entamoeba histolytica และ Entamoeba dispar มากกว่าวิธีการแสดงภาพสด (น้ำเกลือและลูโกล) ในผู้ป่วยโรคอุจจาระร่วงเฉียบพลัน

นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่ามีความไวสูงในการตรวจจับ erythrophagocytosis (อะมีบาที่มีเม็ดเลือดแดงกลืน)

การย้อมสีของเนื้อเยื่อเพื่อวินิจฉัยการติดเชื้อ

Walwyn et al. ในปี 2547 เสนอให้ใช้คราบเนื้อเยื่อเพื่อตรวจหาจุลินทรีย์ที่ก่อให้เกิดการติดเชื้อ

การใช้การย้อมสี hematoxylin-eosin ทำให้สามารถเห็นภาพการติดเชื้อที่เกิดจาก Clostridium, Actinomyces, spirillae หรือ Candida พวกเขายังสามารถสังเกตเห็นการปรากฏตัวของ Sarcoptes escabiei ปรสิตในส่วนผิวหนังและการรวมตัวของไวรัสโดย cytomegalovirus และเริมในส่วนของเนื้อเยื่อต่างๆ

เทคนิค

สำหรับตัวอย่างทางเนื้อเยื่อ

การย้อมสีส่วนทางจุลพยาธิจะต้องผ่านขั้นตอนต่างๆ สิ่งแรกคือการได้รับส่วนเนื้อเยื่อ ต้องแว็กซ์เพื่อให้ได้รอยตัด (แบบละเอียดพิเศษ) ในภายหลังด้วย microtome เทคนิคประกอบด้วยขั้นตอนต่อไปนี้:

1- การกำจัดพาราฟินส่วนเกิน : สำหรับสิ่งนี้คุณสามารถใช้ไซลอลหรือเฮเม - ดีแช่ประมาณ 3-5 นาที

2-Rehydration ของตัวอย่าง:ทำได้โดยการแช่ตัวอย่างด้วยแอลกอฮอล์ (เอทานอล) ที่มีความเข้มข้นต่างกันตามลำดับจากมากไปหาน้อย (100 °, 90 °, 70 °) ในทุกกรณีเป็นเวลา 7 นาที

3- การขจัดแอลกอฮอล์ส่วนเกิน:แช่ในน้ำเป็นเวลา 7 นาที

4- การย้อมสีด้วยฮีมาทอกซิลิน:ตัวอย่างถูกแช่ไว้ 6-10 นาทีในถาดที่มีเฮมาทอกซิลิน เวลาในการเปิดรับแสงขึ้นอยู่กับขนาดและความหนาของตัวอย่าง

5- การกำจัดฮีมาทอกซิลินส่วนเกิน:ล้างด้วยน้ำเป็นเวลา 5 นาทีจากนั้นจะผ่านไปอย่างรวดเร็ว (10-20 วินาที) ผ่านกรดแอลกอฮอล์ หลังจากนั้นล้างด้วยน้ำอีกครั้งเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นแช่ในเอทานอลที่ 96 °เป็นเวลา 1 นาที

6- การย้อมสีด้วย eosin:สำหรับสิ่งนี้ตัวอย่างจะถูกแช่ในถาด eosin เป็นเวลา 5 นาที

7- การคายน้ำของตัวอย่าง : ในการทำเช่นนี้จะต้องผ่านถาดแอลกอฮอล์ (เอทานอล) แต่คราวนี้เรียงลำดับจากน้อยไปมาก (70 °, 90 °, 100 °) (เป็นเวลา 5 วินาที 5 วินาที 1 นาทีตามลำดับ)

8- การชี้แจงตัวอย่าง : สำหรับสิ่งนี้จะสัมผัสกับไซลอลเป็นเวลา 5-10 นาทีและทำให้แห้งเพื่อปิดผนึกอย่างถาวรด้วยยาหม่องแคนาดาหรือวัสดุอื่นที่คล้ายคลึงกัน

สำหรับตัวอย่างอุจจาระที่กำลังมองหา

มีการทำสเมียร์บนสไลด์ด้วยอุจจาระของผู้ป่วยและแก้ไขด้วยแอลกอฮอล์ 80% เป็นเวลา 5 นาที แผ่นนี้แช่อยู่ใน hematoxylin เป็นเวลา 5 นาทีแล้วล้างออกด้วยน้ำทันที

จากนั้นนำไปแช่ในแอลกอฮอล์ที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วจากนั้นจึงนำไปแช่ในน้ำแอมโมเนีย ล้างด้วยน้ำเปล่า มันเป็นสีเป็นเวลา 5 นาทีใน eosin ตัวอย่างจะถูกทำให้แห้งตามที่อธิบายไว้ในงานศิลปะก่อนหน้านี้และสุดท้ายล้างด้วยไซลีน

การเตรียมน้ำยา

- เฮมาทอกซิลิน

ในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรละลายโพแทสเซียมหรือแอมโมเนียมอะลูมิเนียมซัลเฟต 50 กรัม เมื่อละลายหมดแล้วให้เติมเฮมาทอกซิลินที่ตกผลึก 1 กรัม เมื่อละลายหมดแล้วจะมีการเติมกรดซิตริก 1 กรัมพร้อมกับคลอราลไฮเดรต 50 กรัมและโซเดียมไอโอเดต 0.2 กรัม

ต้มส่วนผสมเป็นเวลา 5 นาทีจากนั้นทิ้งไว้ให้เย็นและกรองเพื่อขจัดเศษของแข็งที่ยังคงอยู่ น้ำยาที่เตรียมไว้จึงสามารถใช้งานได้ทันที

- อีโอซิน

สามารถเตรียมด้วยฐานแอลกอฮอล์หรือฐานน้ำ

eosin แอลกอฮอล์

ในเอทานอล 100 มล. ที่ 95 °ละลาย eosin "Y" 0.5 กรัม จากนั้นเติมกรดอะซิติกน้ำแข็งสักสองสามหยด

2% eosin ในน้ำ

ในน้ำกลั่น 1250 มล. ละลาย eosin "Y" ที่ละลายน้ำได้ 25 กรัม จากนั้นเติมกรดอะซิติกน้ำแข็งสักสองสามหยด

กรดแอลกอฮอล์

วัดกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 0.5 มล. และเติมแอลกอฮอล์ได้ถึง 100 มล.

น้ำแอมโมเนีย

วัดแอมโมเนียเข้มข้น 0.5 มล. และทำน้ำกลั่นได้ถึง 100 มล.

อ้างอิง

1. Navarrete, G. Histology ของผิวหนัง. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133 มีจำหน่ายที่: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. การระบุ Entamoeba histolytica / E. Dispar โดยเทคนิคอะมีบาสดเทียบกับการย้อมสีด้วย hematoxylin-eosin ในอาการท้องเสียเฉียบพลัน Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. มีจำหน่ายที่: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. ประโยชน์ของเทคนิคทางจุลพยาธิวิทยาในการวินิจฉัยการติดเชื้อในตัวอย่างทางกายวิภาค Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). มีจำหน่ายที่: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW รีเอเจนต์ คราบ Hematoxylin-eosin 2017, สเปน มีจำหน่ายที่: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia สารานุกรมเสรี 7 พ.ย. 2018, 08:18 UTC. 4 ส.ค. 2019, 22:13 น. en.wikipedia.org
7. “ เฮมาทอกซิลิน” Wikipedia สารานุกรมเสรี 3 พ.ค. 2019 11:23 UTC 4 ส.ค. 2019, 22:48 น. wikipedia.org