THIOGLYCOLLATE BROTH: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา

น้ำซุป Thioglycollateเป็นสื่อที่อุดมสอดคล้องของเหลว เป็นที่รู้จักกันในชื่อย่อ FTM สำหรับคำย่อในภาษาอังกฤษ Fluid Thioglycollate Medium มันถูกสร้างขึ้นโดย Brewer และแก้ไขในปี 1944 โดย Vera ซึ่งได้เพิ่มเคซีนเปปโตนเข้าไป

ตัวกลางนี้มีศักยภาพในการลดการเกิดออกซิเดชั่นต่ำดังนั้นจึงไม่แนะนำให้มีการพัฒนาแบคทีเรียแอโรบิคที่เข้มงวด แต่เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการฟื้นฟูแบคทีเรียแอโรบิคแบบไร้ออกซิเจนที่เข้มงวดและไม่ต้องการมาก

น้ำซุป Thioglycollate โดยไม่มีตัวบ่งชี้ แสดงอาการตกขาว ที่มา: Bobjgalindo

ประสิทธิภาพสูงที่สังเกตได้จากสื่อนี้ในการแยกและการกู้คืนของจุลินทรีย์หลากหลายชนิดทำให้ได้รับการยอมรับจาก United States Pharmacopeia (USP) โดย Official Association of Agricultural Chemists (AOAC) และโดย European Pharmacopoeia ( EP)

องค์กรเหล่านี้แนะนำให้ใช้สำหรับการทดสอบการควบคุมความเป็นหมันของผลิตภัณฑ์ยาและสำหรับการเพิ่มคุณค่าของตัวอย่างประเภทต่างๆ

cado thioglycolate ประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์การย่อยเคซีนของตับอ่อน, แอนไฮไดรด์เดกซ์โทรส, แอล - ซีสตีน, โซเดียมคลอไรด์, โซเดียมไทโอไกลคอลเลต, เรซาซูรินและวุ้นในปริมาณเล็กน้อย

มีสื่อหลายรุ่น ได้แก่ : thioglycollate broth with indicator, thioglycollate broth ที่ไม่มีตัวบ่งชี้, thioglycollate broth พร้อมอินดิเคเตอร์ที่อุดมด้วย hemin และวิตามิน K ₁และ thioglycollate broth ที่มีแคลเซียมคาร์บอเนต

โดยเฉพาะอย่างยิ่งน้ำซุป thioglycollate ที่อุดมไปด้วย hemin และวิตามิน K ทำหน้าที่ช่วยเพิ่มการเจริญเติบโตของภาวะไม่ใช้ออกซิเจนที่จุกจิกและน้ำซุป thioglycollate ที่มีแคลเซียมคาร์บอเนตมีประโยชน์ในการต่อต้านกรดที่ผลิตในระหว่างการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์

รากฐาน

Thioglycollate broth ถือเป็นสื่อเสริมคุณค่าที่ไม่ได้รับการคัดเลือกเนื่องจากช่วยให้แบคทีเรียที่ไม่จุกจิกเจริญเติบโตส่วนใหญ่ ความต้องการทางโภชนาการมาจากสารสกัดจากยีสต์การย่อยของตับอ่อนและกลูโคส

ในทางกลับกันอาหารชนิดนี้แม้จะเป็นน้ำซุป แต่ก็มีวุ้นอยู่เล็กน้อย ซึ่งหมายความว่ามีศักยภาพในการลดออกซิเดชั่นต่ำเนื่องจากการเข้าสู่ออกซิเจนช้าลงในลักษณะที่ออกซิเจนลดลงเมื่อเข้าไปในท่อลึกลงไป

นั่นคือเหตุผลว่าทำไมสื่อนี้จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการพัฒนาแบคทีเรียแอโรบิกแบบ facultative, microaerophilic และแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนที่เข้มงวดซึ่ง 2 ตัวหลังโดยไม่จำเป็นต้องฟักตัวภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ ตัวกลางเดียวกันควบคุมปริมาณออกซิเจนภายในตัวกลางโดยไม่อยู่ที่ด้านล่างของท่อและในปริมาณที่เพียงพอบนพื้นผิว

ในทำนองเดียวกัน thioglycollate และ L-cystine ทำหน้าที่เป็นตัวรีดิวซ์ช่วยป้องกันการสะสมของสารที่เป็นอันตรายต่อการพัฒนาของแบคทีเรียเช่นเปอร์ออกไซด์ นอกจากนี้สารประกอบเหล่านี้ยังมีกลุ่มซัลไฮดริล (-SH-) ซึ่งทำให้เป็นกลางต่อผลการยับยั้งของอนุพันธ์ของปรอทสารหนูและโลหะหนักอื่น ๆ

ในส่วนของมัน resazurin เป็นตัวบ่งชี้การลดออกไซด์ สารนี้ไม่มีสีเมื่อลดลงและเป็นสีชมพูเมื่อถูกออกซิไดซ์ มีตัวบ่งชี้และตัวบ่งชี้ที่ไม่ใช่ตัวบ่งชี้ความหลากหลายของน้ำซุป thioglycollate การใช้งานจะขึ้นอยู่กับประเภทของตัวอย่างและความชอบของห้องปฏิบัติการ

ในขณะเดียวกันโซเดียมคลอไรด์จะรักษาสมดุลออสโมติกของน้ำซุป thioglycollate และการใช้กลูโคสในรูปที่ปราศจากน้ำจะช่วยป้องกันความชื้นส่วนเกินในตัวกลางที่ขาดน้ำ

การจัดเตรียม

Thioglycollate Broth พร้อมไฟแสดงสถานะ

ชั่งของกลางที่ขาดน้ำ 29.75 กรัมและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ส่วนผสมจะได้รับอนุญาตให้ยืนประมาณ 5 นาที นำไปยังแหล่งความร้อนและคนบ่อยๆจนละลายหมด

เทสารลงในหลอดทดลองและนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ปล่อยให้เย็นก่อนใช้ ตรวจสอบส่วนแทรกของอาคารพาณิชย์เพื่อการอนุรักษ์ บางคนแนะนำให้เก็บที่อุณหภูมิห้องในที่มืดและอื่น ๆ ในตู้เย็นที่มีการป้องกันแสง

pH ของตัวกลางที่เตรียมไว้คือ 7.1 ± 0.2

สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจอ่อนและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีเหลืองอำพันอ่อนและมีสีเหลือบ

น้ำซุป Thioglycollate พร้อมตัวบ่งชี้ที่อุดมด้วยเฮมินและวิตามินเค

มีสื่อทางการค้าที่มีเฮมินและวิตามินเค_{1 อยู่}แล้วโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการเพาะปลูกแบบไม่ใช้ออกซิเจน

หากคุณไม่มีอาหารเสริมสำหรับไม่ใช้ออกซิเจนคุณสามารถเตรียมน้ำซุป thioglycollate พื้นฐานได้ สำหรับสิ่งนี้_{จะมีการเติมเฮมิน}ไฮโดรคลอไรด์ 10 มก. และวิตามินเค₁ 1 มก. สำหรับอาหารแต่ละลิตร อย่างไรก็ตามหากมีการเติมเลือดหรือซีรั่มลงในน้ำซุป thioglycollate ก็ไม่จำเป็นต้องเติมเฮมินหรือวิตามินเค

Thioglycollate broth กับแคลเซียมคาร์บอเนต

มีจำหน่ายทั่วไปและจัดทำขึ้นตามคำแนะนำบนเม็ดมีด

น้ำซุป Thioglycollate โดยไม่มีตัวบ่งชี้

มีส่วนประกอบของ thioglycollate พื้นฐานเหมือนกัน แต่ไม่มี resazurin

หนัก 30 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ส่วนที่เหลือของการเตรียมจะเหมือนกับที่อธิบายไว้ในน้ำซุป thioglycollate พร้อมตัวบ่งชี้

ใช้

น้ำซุป Thioglycollate มีประโยชน์สำหรับการเพิ่มคุณค่าของตัวอย่างทางคลินิกโดยเฉพาะจากสถานที่ปลอดเชื้อ นอกจากนี้ยังมีประโยชน์สำหรับตัวอย่างที่ไม่ใช่ทางคลินิกเช่นเครื่องสำอางยา ฯลฯ

สำหรับการฉีดวัคซีนตัวอย่างของเหลว (เช่น CSF, น้ำไขข้อและอื่น ๆ ) ตัวอย่างจะถูกปั่นเหวี่ยงก่อนจากนั้นจึงนำตะกอน 2 หยดไปใส่ในน้ำซุป thioglycollate บ่มที่อุณหภูมิ 35 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หากในเวลานี้ไม่มีการเจริญเติบโต (ความขุ่น) มันจะฟักตัวได้สูงสุด 7 วัน

หากนำตัวอย่างด้วยผ้าเช็ดล้างอาหารเลี้ยงเชื้อจะถูกฉีดวัคซีนในจานก่อนและในที่สุดก็นำผ้าเช็ดล้างลงในน้ำซุปส่วนที่ยื่นออกมาจะถูกแยกออกและท่อจะถูกหุ้มโดยปล่อยให้ไม้กวาดอยู่ด้านใน บ่มที่อุณหภูมิ 35 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงสูงสุด 7 วัน

สำหรับตัวอย่างที่เป็นของแข็งให้ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในน้ำเกลือทางสรีรวิทยา (SSF) จากนั้นฉีดน้ำซุป thioglycollate ด้วยสารแขวนลอย 2 หยด

บางครั้งอาจใช้เป็นสื่อในการขนส่งสำหรับตัวอย่างที่สงสัยว่าไม่มีออกซิเจนอย่างเข้มงวดหรือเป็นน้ำซุปเสริมคุณค่าสำรอง

น้ำซุป thioglycollate ที่มีแคลเซียมคาร์บอเนตใช้สำหรับการบำรุงรักษาสายพันธุ์ควบคุมเป็นเวลานานขึ้นเนื่องจากมีความสามารถในการทำให้กรดเป็นกลางที่เกิดจากการใช้กลูโคส กรดเหล่านี้เป็นพิษต่อแบคทีเรียบางชนิด

การเจริญเติบโตของน้ำซุป thioglycollate จะสังเกตได้จากความขุ่นของตัวกลาง ขอแนะนำให้ทำการย้อมแกรมและเพาะเลี้ยงย่อยในภายหลังในอาหารที่ไม่ได้คัดเลือกและเลือกขึ้นอยู่กับชนิดของตัวอย่างและจุลินทรีย์ที่สงสัย

ระบบประกันคุณภาพ

สำหรับการควบคุมความเป็นหมันขอแนะนำให้บ่มน้ำซุปหนึ่งหรือสองครั้งโดยไม่ต้องฉีดวัคซีน ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือน้ำซุปใสไม่มีการเปลี่ยนสีแม้ว่าจะเป็นเรื่องปกติที่จะเห็นสีชมพูเล็กน้อยบนพื้นผิวของหลอด

สำหรับการควบคุมคุณภาพควรฉีดวัคซีนระหว่าง 10 - 100 CFU ของสายพันธุ์ควบคุมที่ผ่านการรับรองเช่น Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCCrides 19404, Clostridium sporogenes ATCCrides 19404 Bacteroides vulgatus ATCC 8482

บ่มที่อุณหภูมิ 30-35 ° C ในแอโรบิคเป็นเวลา 24 ชั่วโมงสูงสุด 3 วันเนื่องจากจุลินทรีย์เหล่านี้เติบโตอย่างรวดเร็ว

คาดว่าจะมีพัฒนาการที่ดีในทุกกรณียกเว้น Micrococcus luteus และ Bacillus subtilis ซึ่งอาจมีพัฒนาการในระดับปานกลาง

สำหรับการควบคุมคุณภาพของน้ำซุป thioglycollate ที่อุดมด้วย hemin และวิตามิน K ₁สามารถใช้สายพันธุ์ควบคุม Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 และ Bacteroides fragilis ATCC 25285 ผลที่คาดว่าจะได้รับคือการเติบโตที่น่าพอใจ

คำแนะนำ

- บางครั้งจะสังเกตได้ว่าพื้นผิวของน้ำซุป thioglycollate ที่มีไฟแสดงสถานะเปลี่ยนเป็นสีชมพู เนื่องจากการเกิดออกซิเดชันของตัวกลาง หากสีชมพูครอบคลุมน้ำซุปทั้งหมด 30% ขึ้นไปสามารถอุ่นในอ่างน้ำเป็นเวลา 5 นาทีระบายความร้อนอีกครั้งและนำไปใช้

สิ่งนี้จะกำจัดออกซิเจนที่ดูดซึมออกไปและทำให้ตัวกลางกลับมาเป็นสีเดิม ขั้นตอนนี้สามารถทำได้เพียงครั้งเดียว

- เพื่อปรับปรุงการเจริญเติบโตของแบคทีเรียประเภทแอโรบิคให้บ่มโดยให้ฝาหลวมเล็กน้อย อย่างไรก็ตามควรใช้เพื่อจุดประสงค์นี้คือน้ำซุปแช่หัวใจหรือน้ำซุปถั่วเหลืองทริปซิเคสเพื่อการพัฒนาแอโรบิกที่เข้มงวด

- ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งของตัวกลางหรือความร้อนสูงเกินไปเนื่องจากทั้งสองสภาวะทำให้ตัวกลางเสียหาย

- แสงโดยตรงสร้างความเสียหายต่ออาหารเลี้ยงเชื้อต้องจัดเก็บไว้ไม่ให้ถูกแสง

อ้างอิง

Britannia Laboratories Thioglycollate USP พร้อมตัวบ่งชี้ 2558 มีจำหน่ายที่: labBritania.com
ห้องปฏิบัติการ Chios Sas 2019. น้ำซุป Thioglycollate. มีจำหน่ายที่: quios.com.co
ห้องปฏิบัติการ BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM) พ.ศ. 2546 มีจำหน่ายที่: bd.com/Europe
สื่อ BBL ที่เตรียมไว้ในหลอดสำหรับการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจน สื่อ Thioglycollate 2556 ดูได้ที่: bd.com
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina

THIOGLYCOLLATE BROTH: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026