- รากฐาน
- การจัดเตรียม
- -Tetrathionate น้ำซุป
- สารละลายไอโอดีนไอโอดีน
- สื่อกลางสำหรับน้ำซุป tetrathionate
- -Tetrathionate น้ำซุปที่มีสีเขียวสดใส
- ส่องแสงสีเขียว
- ใช้
- ระบบประกันคุณภาพ
- คำแนะนำ
- อ้างอิง
tetrathionate น้ำซุปหรือน้ำซุป TT เป็นสื่อวัฒนธรรมของเหลวเลือกสำหรับการตกแต่งและการฟื้นตัวของพืชและสัตว์สายพันธุ์เชื้อ Salmonella มันถูกสร้างขึ้นโดยMüellerและต่อมาได้รับการแก้ไขโดย Kauffmann ซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมจึงมีผู้ที่เรียกมันว่าน้ำซุปMüeller-Kauffmann
สื่อดั้งเดิมประกอบด้วยโปรตีโอสเปปโตนแคลเซียมคาร์บอเนตและโซเดียมไธโอซัลเฟต Kauffmann ได้เติมเกลือน้ำดีลงไปและสร้างรูปแบบอื่นที่มีสีเขียวสดใส สารเหล่านี้ยับยั้งการเจริญเติบโตของโคลิฟอร์มโดยปล่อยให้ตัวกลางเป็นอิสระสำหรับการพัฒนาแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคในกรณีนี้ Salmonella
การเติมสารละลายไอโอดีนไอโอดีนลงในน้ำซุป tetrathionate ที่มา: Manuel Almagro Rivas
การปรับเปลี่ยนประสบความสำเร็จอย่างมากเนื่องจากเพิ่มความไวของสื่ออย่างมีนัยสำคัญ ด้วยเหตุนี้ปัจจุบันจึงมีประโยชน์สำหรับการค้นหา Salmonellas ในตัวอย่างทุกประเภท แต่โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับอุจจาระและอาหารที่เป็นของแข็งหรือของเหลว
การเตรียมการประกอบด้วยสองขั้นตอน ตัวกลางทางการค้าเป็นฐานในการเตรียมน้ำซุป tetrathionate และต่อมาเพื่อให้สามารถสร้าง tetrathionate ได้จึงมีการเติมสารละลายไอโอดีนเสริมไอโอดีนเพื่อให้ได้ตัวกลางที่สมบูรณ์
สมาคมสาธารณสุขแห่งสหรัฐอเมริกา (APHA) แนะนำให้ใช้ Tetrathionate Broth ที่เสริมด้วยสีเขียวสดใสเพื่อเพิ่มคุณค่าของตัวอย่าง Salmonella เนื่องจากมีการคัดเลือกมากกว่า Tetrathionate Broth และ Selenite Broth
โดยทั่วไปน้ำซุป tetrathionate เหมาะอย่างยิ่งเมื่อมีการสงสัยว่ามีแบคทีเรียในสกุล Salmonella ในปริมาณเล็กน้อยหรือเมื่อพวกเขาถูกทำร้ายโดยการสัมผัสกับสารยับยั้งหรือโดยกระบวนการทางอุตสาหกรรมที่ลดความมีชีวิต
รากฐาน
เปปโตนที่มีอยู่สอดคล้องกับการย่อยเคซีนในตับอ่อนและการย่อยเนื้อเยื่อสัตว์ในกระเพาะอาหาร สิ่งเหล่านี้เป็นแหล่งของคาร์บอนไนโตรเจนและสารอาหารทั่วไปสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย
ในส่วนของโซเดียมไธโอซัลเฟตจะทำปฏิกิริยากับสารละลายที่มีไอโอดีนเพื่อสร้าง tetrathionate สิ่งนี้ยับยั้งการเจริญเติบโตของโคลิฟอร์มและสนับสนุนการพัฒนาของแบคทีเรียที่มีเอนไซม์ tetrathionate reductase ในหมู่พวกมันคือ Salmonella สกุล แต่ยังมี Proteus
เกลือของน้ำดียังทำหน้าที่เป็นสารยับยั้งแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่และแบคทีเรียแกรมลบ (โคลิฟอร์ม) บางชนิด
แคลเซียมคาร์บอเนตดูดซับสารพิษที่เกิดจากการสลายตัวของ tetrathionate ซึ่งเป็นกรดซัลฟิวริก ในแง่นี้แคลเซียมคาร์บอเนตจะปรับสภาพความเป็นกรดให้เป็นกลางโดยรักษา pH ของตัวกลางให้คงที่
ในกรณีของกิริยาสีเขียวสดใสสารนี้จะเพิ่มพลังการคัดเลือกของน้ำซุป tetrathionate โดยการยับยั้งจุลินทรีย์อื่นที่ไม่ใช่สกุล Salmonella
การจัดเตรียม
-Tetrathionate น้ำซุป
สารละลายไอโอดีนไอโอดีน
ในการชั่งน้ำหนัก:
- ไอโอดีน 6 กรัม
- โพแทสเซียมไอโอไดด์ 5 กรัม
โพแทสเซียมไอโอไดด์ละลายในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อประมาณ 5 มิลลิลิตรจากนั้นจึงเติมไอโอดีนทีละน้อยในขณะที่ส่วนผสมได้รับความร้อน หลังจากละลายหมดแล้วให้ทำเครื่องหมายด้วยน้ำกลั่นที่ปราศจากเชื้อจนได้ปริมาตรสุดท้าย 20 มล.
สื่อกลางสำหรับน้ำซุป tetrathionate
หนัก 46 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและแขวนไว้ในน้ำกลั่นที่ปราศจากเชื้อ 1 ลิตร ผสมและให้ความร้อนจนละลายหมดสามารถนำไปต้มเพียงไม่กี่นาที อย่านึ่ง. ฐานของตัวกลางสามารถทำให้เย็นได้ที่ประมาณ 45 ° C และในขณะนั้นจะมีการเติมสารละลายไอโอดีน 20 มล.
หลังจากเติมสารละลายไอโอดีนลงในตัวกลางแล้วควรใช้ทันที หากคุณไม่ต้องการใช้ส่วนผสมทั้งหมดให้ดำเนินการดังนี้:
ของกลาง 10 มล. จะถูกแจกจ่ายลงในหลอดและจะเติมสารละลายไอโอดีนให้กับตัวอย่าง 0.2 มล.
สิ่งที่ไม่ได้ใช้แล้วยังสามารถเก็บไว้ในตู้เย็นได้อย่างไรก็ตามเนื่องจากสื่อไม่ได้ผ่านการฆ่าเชื้อจึงควรเตรียมในปริมาณที่แน่นอนที่จำเป็น
สีของตัวกลางก่อนเติมสารละลายไอโอดีนเป็นสีขาวขุ่นมีตะกอนสีขาวและหลังจากนั้นจะเป็นสีน้ำตาลและมีการตกตะกอนหนาแน่น การตกตะกอนที่สังเกตได้เป็นเรื่องปกติและสอดคล้องกับแคลเซียมคาร์บอเนตที่ไม่ละลาย pH สุดท้ายของตัวกลางคือ 8.4 ± 0.2
-Tetrathionate น้ำซุปที่มีสีเขียวสดใส
ในการเตรียมน้ำซุป tetrathionate สีเขียวสดใสให้ทำตามขั้นตอนทั้งหมดที่อธิบายไว้ข้างต้น แต่จะมีการเติมสารละลายสีเขียว 10 มล. ที่ 0.1% ลงในส่วนผสม
ส่องแสงสีเขียว
โซลูชันนี้เตรียมไว้ดังนี้:
ชั่งน้ำหนักสีเขียวสด 0.1 กรัมและแขวนไว้ในน้ำกลั่น 100 มล. ตั้งไฟให้เดือดเพื่อให้ได้การละลายทั้งหมด เก็บในขวดสีเหลืองอำพัน
ใช้
สำหรับตัวอย่างอุจจาระ (วัฒนธรรมอุจจาระ) โปรโตคอลมีดังนี้:
ฉีดอุจจาระแข็ง 1 กรัมหรืออุจจาระเหลว 1 มิลลิลิตรในหลอดที่มีน้ำซุปเตตระไธโอเนตพร้อมใช้ 10 มล. เขย่าแรง ๆ และฟักตัวแบบแอโรบิคที่อุณหภูมิ 43 ° C เป็นเวลา 6-24 ชั่วโมง
จากนั้นให้นำน้ำซุปและวัฒนธรรมย่อย 10 ถึง 20 µl มาใส่ในอาหารที่เลือกสำหรับเชื้อ Salmonella เช่น SS agar, XLD agar, วุ้นสีเขียวสดใส, Hektoen enteric agar เป็นต้น
ในแบบคู่ขนานควรฉีดวัคซีนเชื้อ Salmonella ร่วมกับตัวอย่างโดยตรง (อุจจาระ) โดยไม่ต้องเสริม สำหรับตัวอย่างไม้กวาดทางทวารหนักปล่อยวัสดุที่เก็บรวบรวมลงในท่อและดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
สำหรับตัวอย่างอาหารให้ชั่งอาหารแข็ง 10 กรัมหรืออาหารเหลว 10 มล. และใส่ขวดที่มีน้ำซุปเตตระไธโอเนตพร้อมใช้ 100 มล. ดำเนินการในลักษณะเดียวกับที่อธิบายไว้ข้างต้น แต่ฟักที่ 37 ° C
ดังจะเห็นได้ว่าความสัมพันธ์ระหว่างตัวอย่างกับน้ำซุปจะเป็น 1:10 เสมอ
ระบบประกันคุณภาพ
สายพันธุ์ควบคุมที่ทราบสามารถใช้เพื่อทดสอบอาหารเลี้ยงเชื้อ สายพันธุ์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายคือสายพันธุ์ที่ได้รับการรับรอง ATCC
สายพันธุ์ที่ใช้ ได้แก่ Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 และ Staphylococcus aureus ATCC 25923
คาดว่าจะมีการเจริญเติบโตที่ยอดเยี่ยมสำหรับสายพันธุ์ Salmonella ในขณะที่ Escherichia coli อาจมีการเจริญเติบโตที่อ่อนแอหรือสม่ำเสมอและสายพันธุ์ Gram positive (Enterococcus และ Staphylococcus) ถูกยับยั้งบางส่วนหรือทั้งหมด
คำแนะนำ
- เนื่องจากสารนี้ไม่ได้ยับยั้งการเจริญเติบโตของ Proteus ห้องปฏิบัติการบางแห่งจึงใช้โนโวบิโอซิน 40 มก. / ลิตรเพื่อป้องกันการพัฒนาสายพันธุ์จุลินทรีย์นี้ ต้องเติมยาปฏิชีวนะก่อนสารละลายไอโอดีน
- หลังจากเตรียมตัวกลางรวมทั้งสารละลายไอโอดีนไอโอดีนแล้วไม่ควรใช้เวลาเกิน 2 ชั่วโมงในการฉีดวัคซีน
- เมื่อกระจายตัวกลางในหลอดส่วนผสมจะต้องถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันอย่างต่อเนื่องเพื่อนำกลับมาตกตะกอนอีกครั้ง
- ในตัวอย่างที่ปนเปื้อนน้อยลงน้ำซุป tetrathionate จะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C และในตัวอย่างที่มีการปนเปื้อนสูงแนะนำให้บ่มที่อุณหภูมิ 43 ° C
อ้างอิง
- ห้องปฏิบัติการ Conda Pronadisa 2553. Tetrathionate broth base อ้างอิงจากMüeller-Kauffmann มีจำหน่ายใน:
- BD Laboratories 2546. Tetrathionate Broth Base. มีจำหน่ายใน:
- Britannia Laboratories 2558. น้ำซุปฐานเตตระเนต. มีจำหน่ายใน:
- BBL Media 2548. จัดทำในหลอดสำหรับการเพาะเลี้ยงเชื้อซัลโมเนลลา.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. การเปรียบเทียบระหว่างอาหารเลี้ยงเชื้อของโซเดียมซีลีไนต์และโซเดียมเตตระธีโอเนตซึ่งทั้งคู่บ่มที่ 37 ° C และ 42 ° C สำหรับ การแยกเชื้อ Salmonella spp จากอุจจาระของพาหะ Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220