TRYPTICASEIN SOY BROTH: รากฐานการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

ทริปโทนน้ำซุปถั่วเหลืองเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวมีคุณค่าทางโภชนาการสูงและไม่เลือกใช้ เนื่องจากความสามารถรอบด้านจึงเป็นหนึ่งในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา

เป็นที่รู้จักกันในชื่อของน้ำซุปถั่วเหลืองทริปติกหรือเคซีน - ถั่วเหลืองย่อยซึ่งมีตัวย่อ TSB สำหรับตัวย่อในภาษาอังกฤษ Tryptic Soy Broth หรือ CST สำหรับคำย่อในภาษาสเปน การใช้งานมีความหลากหลายเนื่องจากองค์ประกอบ ประกอบด้วย triptein เปปโตนถั่วเหลืองโซเดียมคลอไรด์ไดโปตัสเซียมฟอสเฟตและกลูโคส

น้ำซุปถั่วเหลืองทริปทิเคซินที่เพาะด้วยสายพันธุ์ Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ซึ่งสังเกตเห็นการผลิตเม็ดสี ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil.

สามารถทำซ้ำแบคทีเรียก่อโรคที่สำคัญทางการแพทย์รวมทั้งแบคทีเรียที่ต้องการสารอาหารและแบคทีเรียที่ไม่ใช้ออกซิเจน เชื้อราที่ฉวยโอกาสและการปนเปื้อนบางชนิดสามารถพัฒนาได้ในสภาพแวดล้อมนี้

เนื่องจากมีคุณค่าทางโภชนาการสูงจึงมีความไวสูงในการตรวจจับการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ด้วยเหตุนี้จึงได้รับเลือกจากบริการตรวจสอบสุขภาพสัตว์และพืชของ USDA สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของวัคซีน

ในทำนองเดียวกันน้ำซุปถั่วเหลืองทริปซิเคซินเป็นไปตามข้อกำหนดของเภสัชตำรับต่างๆ (European EP, Japanese JP และ North American USP) สำหรับการศึกษาทางจุลชีววิทยาของผลิตภัณฑ์ในระดับอุตสาหกรรมเช่นเครื่องสำอางและอาหาร

ในทางกลับกันมันก็คุ้มค่าที่จะกล่าวถึงว่าแม้จะมีประโยชน์ใช้สอยที่ดี แต่สื่อนี้ก็มีราคาไม่แพงนักทำให้ราคาไม่แพงสำหรับห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาส่วนใหญ่ นอกจากนี้ยังง่ายมากในการเตรียม

รากฐาน

Triptein เปปโตนและกลูโคสมีคุณสมบัติทางโภชนาการที่จำเป็นเพื่อให้เป็นสื่อที่เหมาะสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์อย่างรวดเร็ว

ในระยะฟักตัวประมาณ 6 ถึง 8 ชั่วโมงการเจริญเติบโตสามารถเห็นได้ในจุลินทรีย์ส่วนใหญ่ อย่างไรก็ตามมีสายพันธุ์ที่เติบโตช้าซึ่งอาจใช้เวลาหลายวันในการเติบโต

โซเดียมคลอไรด์และไดโปแตสเซียมฟอสเฟตทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมสมดุลออสโมติกและ pH ตามลำดับ การปรากฏตัวของการเจริญเติบโตนั้นเห็นได้จากการปรากฏตัวของความขุ่นในตัวกลาง หากไม่มีการเติบโตสื่อจะยังคงโปร่งแสง

เนื่องจากสีอ่อนจึงสามารถสังเกตการผลิตเม็ดสีได้เช่นสีที่แสดงในภาพที่อยู่ตอนต้นของบทความซึ่งสอดคล้องกับเม็ดสีที่ผลิตโดย Pseudomonas aeruginosa

การจัดเตรียม

-Triptysein น้ำซุปถั่วเหลือง

ในการเตรียมน้ำซุปถั่วเหลืองทริปติกจะต้องชั่งน้ำหนักสื่อทางการค้าที่ขาดน้ำ 30 กรัมในเครื่องชั่งดิจิตอล จากนั้นจะละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรที่บรรจุอยู่ในขวด

พักส่วนผสมไว้ 5 นาทีจากนั้นจึงนำไปยังแหล่งความร้อนเพื่อช่วยละลายตัวกลาง ควรกวนบ่อยๆในขณะที่เดือดเป็นเวลา 1 นาที

เมื่อละลายแล้วจะกระจายเป็นหลอดขนาดพอเหมาะตามต้องการ สามารถใช้ท่อที่มีปลั๊กฝ้ายหรือฝา Bakelite ได้ จากนั้นหลอดจะถูกฆ่าเชื้อด้วยตัวกลางในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที

pH ของตัวกลางต้องอยู่ที่ 7.3 ± 0.2

ควรสังเกตว่าสีของอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำเป็นสีเบจอ่อนและควรเก็บไว้ระหว่าง 10 ถึง 35 ° C ในที่แห้ง ในขณะที่น้ำซุปที่เตรียมไว้จะมีสีเหลืองอำพันและควรเก็บไว้ในตู้เย็น (2 ถึง 8 ° C)

- ความหลากหลายของน้ำซุปถั่วเหลืองทริปซิเคซิน

สามารถเตรียมน้ำซุปถั่วเหลืองทริปทิเคซินที่ดัดแปลงได้โดยการเติมเกลือน้ำดีและโนโวบิโอซินเพื่อให้สามารถคัดแยกเชื้ออีโคไลได้ อีกทางเลือกหนึ่งสำหรับจุดประสงค์เดียวกันคือการเตรียมน้ำซุปถั่วเหลืองทริปซิเคสเสริมด้วย vancomycin, cefixime และ Tellurite (2.5 µg / ml)

ในทางกลับกันสามารถเพิ่มน้ำตาลกลูโคส (0.25%) ลงในน้ำซุปถั่วเหลืองทริปติกได้เมื่อมีวัตถุประสงค์เพื่อกระตุ้นการสร้างฟิล์มไบโอฟิล์ม

ใช้

มีคุณค่าทางโภชนาการเพียงพอที่จะทำให้แบคทีเรียที่กินจุกจิกหรือจุกจิกเจริญเติบโตเช่น Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp และ Brucella sp โดยไม่จำเป็นต้องเสริมด้วยเลือดหรือซีรั่ม

ในทำนองเดียวกันเชื้อราบางชนิดสามารถพัฒนาได้ในน้ำซุปนี้เช่น Candida albicans Complex, Aspergillus sp และ Histoplasma capsulatum

นอกจากนี้ตัวกลางนี้ภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนยังเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการกู้คืนแบคทีเรียที่อยู่ในสกุล Clostridium เช่นเดียวกับแบคทีเรียที่ไม่ใช้ออกซิเจนที่ไม่ได้สร้างสปอร์ที่มีความสำคัญทางคลินิก

หากเติมโซเดียมคลอไรด์ 6.5% สามารถใช้เพื่อการเจริญเติบโตของ Enterococcus และ Streptococcus Group D อื่น ๆ

ในระดับการวิจัยมีประโยชน์อย่างมากในโปรโตคอลต่างๆโดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาไบโอฟิล์มหรือแบคทีเรียที่สร้างฟิล์มชีวภาพ นอกจากนี้ยังใช้ในการเตรียมสารแขวนลอยแบคทีเรีย 0.5% Mac Farland ที่จำเป็นในการดำเนินการให้ยาปฏิชีวนะโดยวิธี Kirby and Bauer

ในกรณีนี้จะนำโคโลนีที่มีลักษณะคล้ายกัน 3 ถึง 5 โคโลนีมาผสมในน้ำซุปถั่วเหลืองทริปซิเคซิน 4-5 มล. จากนั้นนำไปบ่มเป็นเวลา 2 ถึง 6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 35-37 ° C จากนั้นปรับให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการโดยใช้น้ำเกลือปราศจากเชื้อ ไม่ควรใช้น้ำซุปถั่วเหลือง Trypticasein ตั้งแต่ 18 ถึง 24 ชั่วโมงในการฟักตัว

หว่าน

ตัวอย่างสามารถเพาะโดยตรงหรือโคโลนีบริสุทธิ์ที่นำมาจากสื่อคัดสรรสามารถเพาะเลี้ยงย่อยได้ หัวเชื้อควรมีขนาดเล็กเพื่อไม่ให้ฟุ้งกระจายก่อนการฟักตัว

โดยปกติจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ในแอโรบิคเป็นเวลา 24 ชั่วโมง แต่เงื่อนไขเหล่านี้อาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่ต้องการ นอกจากนี้ยังสามารถบ่มภายใต้สภาวะไร้ออกซิเจนที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลาหลายวันหากจำเป็น ตัวอย่างเช่นจุลินทรีย์ที่เติบโตเร็วหรือจุกจิกสามารถฟักตัวได้นานถึง 7 วัน

ในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของสารเภสัชกรรมเช่นวัคซีนโปรโตคอลจะเข้มงวดกว่า ในกรณีเหล่านี้น้ำซุปที่ไม่มีการเจริญเติบโตจะไม่ถูกทิ้งจนกว่าจะถึง 14 วันของการฟักตัวอย่างต่อเนื่อง

ระบบประกันคุณภาพ

จากการเตรียมแต่ละชุดควรบ่มท่อที่ไม่ได้ใส่ปุ๋ย 1 หรือ 2 หลอดเพื่อแสดงความเป็นหมัน มันจะต้องไม่เปลี่ยนแปลง

นอกจากนี้ยังสามารถปลูกสายพันธุ์ที่รู้จักเพื่อประเมินพฤติกรรมของพวกมันได้ ในบรรดาสายพันธุ์ที่สามารถใช้ได้ ได้แก่ :

เชื้อรา Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 หรือ 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC528CC Pneumoniae 30,528

ในทุกกรณีการเจริญเติบโตจะต้องเป็นที่น่าพอใจภายใต้บรรยากาศและอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับจุลินทรีย์แต่ละชนิด

ข้อ จำกัด

- การหมักกลูโคสทำให้ pH ของตัวกลางลดลงเนื่องจากการผลิตกรด สิ่งนี้อาจไม่เอื้ออำนวยต่อการอยู่รอดของจุลินทรีย์บางชนิดที่ไวต่อความเป็นกรด

- ไม่แนะนำให้บำรุงรักษาสายพันธุ์เพราะนอกจากความเป็นกรดแล้วแบคทีเรียจะทำให้สารอาหารหมดไปหลังจากนั้นไม่กี่วันด้วยการสะสมของสารพิษที่เป็นผลมาจากการที่ทำให้สภาพแวดล้อมไม่เอื้ออำนวย

- คุณต้องดูแลกระบวนการฆ่าเชื้อทั้งหมดเนื่องจากน้ำซุปปนเปื้อนได้ง่าย

- หลังจากเตรียมน้ำซุปถั่วเหลืองทริปทิเคซินแล้วคุณไม่ควรพยายามถ่ายโอนน้ำซุปไปยังท่อที่ปราศจากเชื้ออื่นเนื่องจากการซ้อมรบประเภทนี้เสี่ยงต่อการปนเปื้อน

อ้างอิง

1. Cona E. เงื่อนไขสำหรับการศึกษาความไวที่ดีโดยการทดสอบการแพร่กระจายของวุ้น รายได้ chil. infectol ปี 2002 19 (2): 77-81. มีจำหน่ายที่: scielo.org
2. ห้องปฏิบัติการ Britannia Triptein น้ำซุปถั่วเหลือง 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
3. ห้องปฏิบัติการ MCD Trypticasein น้ำซุปถั่วเหลือง มีจำหน่ายที่: electronic-systems.com
4. ห้องปฏิบัติการนีโอเจน Triptych Soy Broth. มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. อลัน 2006 56 (3): 257-264 ดูได้ที่: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. การสร้างฟิล์มไบโอฟิล์มใน Staphylococcus aureus แยกได้ตามความไวต่อยาต้านจุลชีพและที่มาทางคลินิก ใบสมัครงาน 2015; 62 (1): 1-8. มีจำหน่ายที่: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. การแยกเชื้อ Escherichia coli O157: H7 ในตัวอย่างสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมแบบ Double Purpose จากเทศบาล Miranda รัฐ Zulia ประเทศเวเนซุเอลา รายได้ Cient. (มาราไกโบ), 2550; 17 (3): 239-245 มีจำหน่ายที่: scielo.org