MALONATE BROTH: รากฐานการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

น้ำซุป malonateเป็นสื่อวัฒนธรรมของเหลวที่ใช้สำหรับการทดสอบการวินิจฉัย (malonate) ที่ใช้ในการแยกความแตกต่างจำพวกของครอบครัว Enterobacteriaceae บาง มันถูกสร้างขึ้นโดย Leifson ในปีพ. ศ. 2476 และต่อมาได้รับการแก้ไขโดย Ewing ซึ่งได้เพิ่มเดกซ์โทรสและสารสกัดจากยีสต์จำนวนเล็กน้อยลงในสูตรดั้งเดิม

สารนี้ประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์แอมโมเนียมซัลเฟตไดโปตัสเซียมฟอสเฟตโมโนโพแทสเซียมฟอสเฟตโซเดียมคลอไรด์โซเดียมมาโลเนตเดกซ์โทรสและโบรโมธีมอลบลู โดยทั่วไปการทดสอบนี้จะรวมอยู่ในแบตเตอรี่ระบุตัวตนทางชีวเคมีสำหรับ Enterobacteriaceae ซึ่งช่วยในการแยกแยะสกุลและสายพันธุ์บางชนิด

การแสดงกราฟิกของการทดสอบ malonate ก. การทดสอบเชิงลบข. (การทำให้เป็นกรด) การทดสอบเชิงลบค. (การทำให้เป็นด่างปานกลาง) การทดสอบเชิงบวก ที่มา: หลอดสี publicdomainpictures.net

การทดสอบ malonate ส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับความสามารถของจุลินทรีย์บางชนิดในการใช้โซเดียมมอลเนตเป็นแหล่งคาร์บอนและแอมโมเนียมซัลเฟตเป็นแหล่งไนโตรเจน

การทดสอบ malonate มักให้ผลบวกในบางชนิดของ Enterobacter, Klebsiella และ Citrobacter genera ในขณะที่สายพันธุ์ส่วนใหญ่ของสกุล Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus และ Providencia ให้ปฏิกิริยาเชิงลบ

รากฐาน

การทดสอบ malonate ประกอบด้วยการแสดงแบคทีเรียที่สามารถใช้โซเดียมมอลเนตเป็นแหล่งคาร์บอนและแอมโมเนียมซัลเฟตเป็นแหล่งไนโตรเจน

Enterobacteriaceae ส่วนใหญ่ที่ไม่ใช้ malonate สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารชนิดนี้โดยใช้ dextrose และสารสกัดจากยีสต์เป็นสารอาหาร

ในกรณีนี้ความพยายามใด ๆ ที่จะทำให้อัลคาไลน์โดยการใช้เปปโตนจะถูกต่อต้านโดยการผลิตกรดที่เกิดจากการหมักเดกซ์โทรส ในทำนองเดียวกันไดโปตัสเซียมและโมโนโปแตสเซียมฟอสเฟตทำหน้าที่เป็นบัฟเฟอร์โดยรักษา pH ที่ 6.7

นั่นคือเหตุผลที่เมื่อผลการทดสอบเป็นลบน้ำซุปจะยังคงเป็นสีเดิม (สีเขียว) ในบางครั้งตัวกลางอาจกลายเป็นกรดเนื่องจากการหมักเดกซ์โทรส หากไม่ใช้เปปโตนและตัวบ่งชี้ pH มันจะเปลี่ยนสีของตัวกลางเป็นสีเหลือง เพื่อให้สิ่งนี้เกิดขึ้น pH ต้องลดลงเหลือ 6

อย่างไรก็ตามเมื่อการทดสอบนี้เป็นผลบวกมีการกล่าวว่าจุลินทรีย์ใช้ malonate และ ammonium sulfate เป็นแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนตามลำดับโดยไม่ใช้ส่วนประกอบอื่น ๆ

ในกรณีนี้ตัวกลางจะกลายเป็นด่างเนื่องจากการปลดปล่อยโซเดียมและการก่อตัวของ NaOH ที่ตามมา ในแง่นี้ตัวบ่งชี้ pH (bromothymol blue) จะเปลี่ยนสีของตัวกลางจากสีเขียวเป็นสีน้ำเงินเมื่อ pH เท่ากับหรือมากกว่า 7.6 สีน้ำเงินอาจเป็นสีอ่อนหรือเข้ม (สีน้ำเงินปรัสเซียน)

ในที่สุดโซเดียมคลอไรด์จะรักษาความเป็นออสโมลาริตีของตัวกลางและน้ำเป็นตัวเจือจางของส่วนประกอบทั้งหมด

การตีความ

น้ำซุปสีเดียวกัน (สีเขียว) - การทดสอบเชิงลบ

น้ำซุปสีเหลือง: การทดสอบเชิงลบ

น้ำซุปสีอ่อนหรือสีน้ำเงินเข้ม: ทดสอบในเชิงบวก

มีตัวแปรที่เรียกว่า phenylalanine malonate broth หรือที่เรียกว่าสื่อของ Shaw และ Clarke ในกรณีนี้สามารถวิเคราะห์การทดสอบได้ 2 แบบคือการใช้ malonate เป็นแหล่งคาร์บอนและการผลิตกรดไพรูวิกจากฟีนิลอะลานีน

การจัดเตรียม

น้ำซุป Malonate

มีการชั่งน้ำหนักจำนวนกรัมที่ระบุโดยเม็ดมีดของ บริษัท การค้าที่เลือก (อาจแตกต่างกันไป) กรัมที่ชั่งน้ำหนักจะแขวนอยู่ในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ความร้อนเล็กน้อยจนละลายหมด กระจายของกลาง 3 มล. ลงในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาฝ้าย

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 ถึง 20 นาที

เย็นก่อนใช้ หากไม่ได้ใช้ทันทีให้เก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ นำน้ำซุปไปไว้ในอุณหภูมิห้องก่อนฉีดเชื้อ

pH ของตัวกลางควรเป็น 6.7 ± 0.2 สีของสื่อที่เตรียมไว้คือสีเขียวขวด

Phenylalanine Malonate Broth

ชั่งของกลางที่ขาดน้ำ 11 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ส่วนที่เหลือของการเตรียมการจะเหมือนกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้

นอกจากนี้ยังสามารถเตรียมได้โดยการเติมฟีนิลอะลานีน 2 กรัม / ลิตรลงในน้ำซุป malonate ก่อนที่จะฆ่าเชื้อ

ใช้

ใช้เป็นส่วนหนึ่งของแบตเตอรี่ของการทดสอบทางชีวเคมีที่ประกอบขึ้นเพื่อระบุแบคทีเรียในตระกูล Enterobacteriaceae

ช่วยแยกแยะระหว่าง:

- สกุล Klebsiella และ Enterobacter (+) ของสกุล Escherichia และ Serratia (-)

- สายพันธุ์ของ Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame และ Salmonella enterica ssp diarizonae (+) ของสายพันธุ์ Salmonella enterica ssp enterica (-)

- จากสกุล Klebsiella โดยทั่วไป (+) จากสกุล Actinobacillus (-)

- ในบางครั้งมันสามารถช่วยสร้างความแตกต่างของสกุลและชนิดของแบคทีเรียที่ไม่ได้อยู่ในวงศ์ Enterobacteriaceae เช่นแบคทีเรียแกรมลบ Alcaligenes faecalis (+) และ Acinetobacter sp (-) ที่ไม่ผ่านการหมัก

ที่มา: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina

กระบวนการ

ภายใต้ไฟแช็กส่วนหนึ่งของโคโลญจน์บริสุทธิ์จะถูกนำมาใช้โดยใช้ที่จับแพลทินัมที่ผ่านการฆ่าเชื้อและระบายความร้อนอย่างเหมาะสม ตัวอย่างที่นำมา (หัวเชื้อเบา) ละลายในน้ำซุป malonate บ่มโดยให้ฝาหลวมในแอโรบิคที่อุณหภูมิ 35 ° C ± 0.2 เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง

น้ำซุป Malonate สามารถฉีดเชื้อได้จากการเพาะเลี้ยง 18-24 ชั่วโมงในน้ำซุปถั่วเหลืองทริปซิเคส ในกรณีนี้จะใช้ปิเปตที่ผ่านการฆ่าเชื้อ 0.01 มล. และเติมน้ำซุป malonate บ่มโดยให้ฝาหลวมในแอโรบิคที่อุณหภูมิ 35 ° C ± 0.2 เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง

เมื่อสิ้นสุดเวลาผลลัพธ์จะถูกตีความ ร่องรอยของสีน้ำเงินใด ๆ หลังจากการฟักตัว 48 ชั่วโมงควรได้รับการพิจารณาในเชิงบวก ไม่ควรตีความการทดสอบเป็นลบจนกว่าจะหมดเวลาฟักตัว 48 ชั่วโมง

ในกรณีของการใช้ตัวแปรน้ำซุปฟีนิลอะลานีน malonate malonate จะถูกตีความก่อนจากนั้นจึงเติม 1N HCl 5 หยดและเฟอร์ริกคลอไรด์ 8% 3-5 หยด สีเขียวเข้มถูกตีความว่าเป็นการทดสอบฟีนิลอะลานีนในเชิงบวก ในทางกลับกันถ้าตัวกลางเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินซีดการทดสอบจะเป็นลบสำหรับฟีนิลอะลานีน

ระบบประกันคุณภาพ

ในการควบคุมการทำให้เป็นหมันควรบ่มน้ำซุปหนึ่งหรือสองอย่างที่อุณหภูมิ 35 ° C ± 0.2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในการบ่ม หลังจากเวลานี้ไม่ควรมีเมฆมากหรือเปลี่ยนสี

สำหรับการควบคุมคุณภาพสามารถใช้สายพันธุ์ที่รู้จักหรือได้รับการรับรองเช่น Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 และ Escherichia coli ATCC 25922

ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือ:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae และ Salmonella enterica ssp arizonae ให้ปฏิกิริยาเชิงบวก (สีฟ้าปานกลาง)
• สำหรับเชื้อ Escherichia coli ผลที่ได้ควรเป็นลบกล่าวคือคาดว่าจะไม่มีการเปลี่ยนสี (สีเขียว) หรือจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองเนื่องจากการหมักกลูโคส

ข้อ จำกัด

อย่าใช้น้ำซุปที่มีความขุ่นตกตะกอนการเปลี่ยนสีหรือสัญญาณของการเสื่อมสภาพ

อ้างอิง

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. การแยกเชื้อทางจุลชีววิทยาของเชื้อ Salmonella spp. และเครื่องมือระดับโมเลกุลสำหรับการตรวจจับ สุขภาพ Uninorte Barranquilla (พ.อ. ) 2014; 30 (1): 73-94. ดูได้ที่: scielo.org.co
2. BBL Malonate Broth แก้ไข Ewing 2550. มีจำหน่ายที่: bd.com
3. Senna Laboratories. น้ำซุป Malonato มีจำหน่ายที่: cientificasenna.com
4. RenyLab น้ำซุป Malonato 2013 มีจำหน่ายที่: es.renylab.ind.br
5. การวินิจฉัย Mbiolog น้ำซุป Malonato มีจำหน่ายที่: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
7. Conda Pronadisa Laboratories. น้ำซุป Phenylalanine malonate มีจำหน่ายที่: condalab.com