- รากฐาน
- การจัดเตรียม
- การประยุกต์ใช้งาน
- การเพิ่มปริมาณ
- การวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระ
- การควบคุมคุณภาพของสื่อ
- อ้างอิง
น้ำซุปแลคโตสเป็นวิธีการที่ไม่ใช่ - กลางวัฒนธรรมของเหลวที่เลือกใช้เป็นหลักเป็น ก่อนการเพิ่มคุณค่าในการแยกสายพันธุ์เชื้อ Salmonella จากการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาการอาหารแปรรูป, ผลิตภัณฑ์นมหรือน้ำ คำแนะนำนี้แนะนำโดย International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMPF)
ตัวกลางประกอบด้วยเอนไซม์ย่อยเจลาตินสารสกัดจากเนื้อสัตว์และแลคโตสซึ่งเป็นสารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย นอกจากนี้แลคโตสยังเป็นคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ดังนั้นโคลิฟอร์มบางชนิดจึงสามารถทำลายมันได้ด้วยการผลิตก๊าซ
น้ำซุปที่ให้น้ำนมมีความขุ่น ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil
ด้วยเหตุนี้น้ำซุปแลคโตสจึงได้รับการแนะนำโดย American Public Health Association (APHA) สำหรับการศึกษาเชิงสันนิษฐานของแบคทีเรียโคลิฟอร์มทั้งหมดและในอุจจาระซึ่งมีคุณสมบัติเป็นทางเลือกที่ดีเยี่ยมในการแทนที่น้ำซุปทริปโตสลอริลซัลเฟตในเทคนิคมาตรฐานของ Most Probable Number (MPN) ) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหารนมและน้ำผิวดินตัวอย่างของเสียจากใต้ดินสันทนาการในประเทศและอุตสาหกรรม
รากฐาน
สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของตัวอย่างบางตัวอย่างขั้นตอนก่อนการเพิ่มคุณค่าเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้สามารถกู้คืนจุลินทรีย์เฉพาะที่อาจมีปริมาณต่ำมากหรืออยู่ในสภาวะที่ไม่เอื้ออำนวยซึ่งละเมิดหรือลดความมีชีวิตของมัน
นั่นคือกรณีของอาหารแห้งและอาหารแปรรูปซึ่งอาจปนเปื้อนเชื้อ Salmonellas sp ในกรณีเหล่านี้หากมีแบคทีเรียอยู่แสดงว่าพวกมันได้รับความเสียหายทั้งทางกายภาพและทางเคมีในระหว่างกระบวนการผลิตผลิตภัณฑ์
ในลักษณะที่จุลินทรีย์ต้องเผชิญกับปัจจัยที่ไม่พึงประสงค์เช่นการคายน้ำการสัมผัสกับสารยับยั้งหรือผลิตภัณฑ์ที่เป็นพิษและการทับซ้อนที่เกิดจากการมีแบคทีเรียอื่น ๆ ในปริมาณที่มากขึ้น
ในแง่นี้น้ำซุปแลคโตสมีผลในการซ่อมแซมโครงสร้างที่เสียหายของจุลินทรีย์ทำให้สามารถฟื้นตัวและแพร่พันธุ์ได้ในลักษณะที่สามารถตรวจพบได้
ในทำนองเดียวกันน้ำซุปแลคโตสมีความสามารถในการเจือจางสารยับยั้งที่อาจส่งผลต่อความมีชีวิตของมันทำให้สามารถพัฒนาได้ นอกจากนี้องค์ประกอบทางโภชนาการของน้ำซุปแลคโตสยังเป็นกลยุทธ์ในการสนับสนุนการเจริญเติบโตของเชื้อ Salmonella sp เหนือจุลินทรีย์อื่น ๆ
สำหรับการระบุขั้นสุดท้ายจะต้องมีวัฒนธรรมย่อยกับอาหารเลี้ยงเชื้ออื่น ๆ
ในทางกลับกันองค์ประกอบของตัวกลางยังทำให้สามารถตรวจจับจุลินทรีย์ที่หมักแลคโตสที่ผลิตก๊าซได้
การจัดเตรียม
ในการเตรียมน้ำซุปแลคโตสหนึ่งลิตรต้องชั่งน้ำหนักตัวกลางที่ขาดน้ำ 13 กรัมและละลายในน้ำกลั่น 1,000 มล.
เพื่อช่วยละลายตัวกลางในน้ำให้อุ่นสารละลายเล็กน้อย แต่ไม่มากเกินไป
เมื่อเป็นเนื้อเดียวกันแล้วจะมีการเตรียมสารละลายดังต่อไปนี้: หากจะใช้น้ำซุปเพื่อค้นหาโคลิฟอร์มจะมีการเตรียมชั้นวางของหลอดทดลองซึ่งใส่ท่อหมักเดอแรมโดยคว่ำลง
ท่อเดอแรมเป็นรายละเอียดที่สำคัญมากเนื่องจากจะช่วยให้สามารถตรวจจับการก่อตัวของก๊าซซึ่งเป็นข้อมูลที่มีค่ามากในการค้นหาโคลิฟอร์ม
เมื่อหลอดพร้อมแล้วน้ำซุปแลคโตส 10 มล. จะถูกจ่ายเข้าไปในปริมาณที่เพียงพอที่จะครอบคลุมทั้งหลอดเดอแรม
หากต้องใช้น้ำซุปแลคโตสเป็นน้ำซุปก่อนการเสริมคุณค่าก็ไม่จำเป็นต้องวางท่อหมักเดอแรม ในกรณีนี้จำเป็นต้องใช้สื่อในปริมาณที่มากขึ้น (225 มล.) ซึ่งจะให้บริการในขวดขนาด 500 มล. ปากกว้างและฝาเกลียวทนความร้อน
จากนั้นหลอดหรือขวดจะถูกนึ่งในอุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
ตัวกลางจะต้องอยู่ที่ pH สุดท้ายที่ 6.9 ± 0.2 ที่ 25 ° C
น้ำซุปจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้
ก่อนใช้ต้องนำน้ำซุปไปไว้ในอุณหภูมิห้อง
ในทางกลับกันน้ำซุปแลคโตสสามารถเตรียมแบบเข้มข้นสองเท่าได้
ห้องปฏิบัติการบางแห่งเติมโบรโมเครซอลม่วงลงในน้ำซุปแลคโตสเป็นตัวบ่งชี้ค่า pH เพื่อแสดงหลอดที่มีการหมักแลคโตสเนื่องจากการเปลี่ยนสี ในกรณีนี้น้ำซุปจะมีสีม่วงและหากมีการหมักจะเปลี่ยนเป็นสีเหลือง
การประยุกต์ใช้งาน
ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยามีการใช้น้ำซุปแลคโตสอย่างกว้างขวางเนื่องจากเป็นสื่อราคาไม่แพงที่ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้และรวดเร็ว (24-48 ชั่วโมง)
สามารถใช้ในการวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระในอาหารและน้ำหรือใช้เป็นน้ำซุปก่อนเสริมเชื้อซัลโมเนลลา
การเพิ่มปริมาณ
การเพิ่มคุณค่าล่วงหน้าเป็นขั้นตอนก่อนการเพิ่มคุณค่าของตัวอย่างซึ่งช่วยเพิ่มการฟื้นตัวของแบคทีเรียในสกุล Salmonella ในอาหารแปรรูปได้อย่างมาก
ในการทำเช่นนี้ตัวอย่างอาหารแข็ง (25 กรัม) หรือของเหลว (25 มล.) จะถูกเพาะในน้ำซุปแลคโตส 225 มล. โดยบ่มเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง ต่อจากนั้นจะนำไปเพาะเลี้ยงย่อยในอาหารเสริมเช่นน้ำซุปซีลีไนต์ซีสตีนหรือน้ำซุปเตตระไธโอเนต จากนั้นไปยังสื่อเลือก XLD และ SS
การวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระ
เป็นสื่อที่ดีเยี่ยมในการบ่งชี้การปนเปื้อนของอุจจาระ
ด้วยเหตุนี้น้ำซุปแลคโตสจึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับระยะสันนิษฐานของการศึกษาโคลิฟอร์มโดยวิธี Most Probable Number
สำหรับตัวอย่างที่สงสัยว่ามีโคลิฟอร์มในปริมาณมากจะมีการฉีดวัคซีนในปริมาณที่น้อยกว่า (1 มล.) ในขณะที่ตัวอย่างที่สงสัยว่ามีโคลิฟอร์มในปริมาณน้อยกว่าจะทำการฉีดวัคซีนในปริมาณที่มากกว่า (10 มล.)
สำหรับการวิเคราะห์จะทำการเจือจาง 10 -1 , 10-2 , 10 -3โดยสร้างแบตเตอรี่ 3-5 หลอดสำหรับแต่ละความเข้มข้นที่ใช้
จากการเจือจางแต่ละครั้งปริมาตรเดียวกันจะถูกเพาะลงในน้ำซุปแลคโตส
หลอดจะถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง น้ำซุปเชิงลบจะถูกบ่มต่อไปอีก 24 ชั่วโมง
การตีความผลลัพธ์เกิดจากการสังเกตลักษณะสองประการประการแรกคือการมีหรือไม่มีความขุ่นและเนื่องจากสื่อนี้ไม่มีตัวบ่งชี้ pH จึงไม่มีการเปลี่ยนสี
ประการที่สองคือการผลิตหรือไม่ของก๊าซ ก๊าซเป็นสิ่งที่เห็นได้ง่ายในท่อเดอแรมโดยการปรากฏตัวของฟองอากาศอย่างน้อยหนึ่งฟองภายในนั้น
ถือว่าเป็นบวกหากสังเกตทั้งสองลักษณะนั่นคือความขุ่นจากการผลิตก๊าซ ท่อที่เป็นบวกควรได้รับการเพาะเมล็ดใหม่ในสื่อยืนยัน (น้ำซุป Brilliant Green Bile 2% และน้ำซุป EC)
การควบคุมคุณภาพของสื่อ
- เมื่อเตรียมสื่อสิ่งสำคัญคืออย่าลืมวางท่อ Durhams หากจุดประสงค์เดียวกันคือเพื่อศึกษาโคลิฟอร์ม
- อย่าให้ความร้อนสูงเกินไปก่อนที่จะฆ่าเชื้อ
- แจกจ่ายในหลอดทดลองก่อนฆ่าเชื้อไม่เคยหลังจากนั้น
- ห้ามใช้หากสื่อมีอายุมากกว่า 3 เดือน
- อย่าใช้หากคุณสังเกตเห็นการเปลี่ยนแปลงในลักษณะปกติของสื่อ
- เมื่อเตรียมน้ำซุปแลคโตสชุดหนึ่งให้ทดสอบคุณภาพโดยการหว่านสายพันธุ์ที่รู้จักเช่น Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii และ Klebsiella pneumoniae พวกมันเติบโตได้ดีด้วยการผลิตก๊าซ (การควบคุมเชิงบวก)
- นอกจากนี้ยังสามารถรวมถึง Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium หรือ Enterococcus faecalis ซึ่งเจริญเติบโตได้ดี แต่ไม่มีการผลิตก๊าซ (Negative Control)
- ควรสังเกตว่าสีดั้งเดิมของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจและของตัวกลางที่เตรียมไว้นั้นมีสีเหลืองอ่อนและใสมาก หากสังเกตเห็นการเปลี่ยนแปลงสีหรือลักษณะที่ปรากฏอาจทำให้เสื่อมสภาพได้
อ้างอิง
- Acevedo R, Severiche C, Castillo M. ชีววิทยาสิ่งแวดล้อมและจุลชีววิทยา. (2556) พิมพ์ครั้งที่ 1. มหาวิทยาลัย Cartagenas ประเทศโคลอมเบีย
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B และVelázquez O. (2009) เทคนิคการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหาร 2nd ed. คณะเคมี UNAM. เม็กซิโก
- Conda Pronadisa Laboratories. 2017 ความเข้มข้นของน้ำซุปแลคโตสสองเท่า (European Pharm.)
- Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. การเปรียบเทียบเทคนิคการสกัดโคลิฟอร์มแบคทีเรียจากตะกอนของทะเลสาบ Xochimilco ประเทศเม็กซิโก รายได้เงิน Microbiol 2013; 45 (3): 180-184. มีจำหน่ายที่: scielo.org
- Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. การกำหนดคุณภาพทางจุลชีววิทยาของน้ำบาดาลในเขตของหน่วยงาน Central, Cordillera และ Capital Municipality Mem Inst. สืบสวน วิทยาศาสตร์. สุขภาพ 2013; 11 (1): 5-14. มีให้จาก: scielo.iics