- รากฐาน
- น้ำซุป EC
- Novobiocin Modified EC Broth
- การจัดเตรียม
- น้ำซุป EC
- Novobiocin Modified EC Broth
- ใช้
- การวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระ
- ระบบประกันคุณภาพ
- คำแนะนำ
- อ้างอิง
EC น้ำซุปหรือน้ำซุป Escherichia coli เป็นสื่อวัฒนธรรมเลือกของเหลว สื่อนี้แนะนำโดยวิธีมาตรฐานสำหรับการนับโคลิฟอร์มรวมและอุจจาระโดยเทคนิคจำนวนที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด (MPN) ในตัวอย่างน้ำและอาหารโดยที่ตัวแทนหลักที่เกี่ยวข้องคือ Escherichia coli
EC broth ประกอบด้วย triptein, lactose, bile salts, dipotassium phosphate, monopotassium phosphate, sodium chloride และ water สูตรของมันได้รับการออกแบบอย่างมีกลยุทธ์เพื่อรองรับการเจริญเติบโตของโคลิฟอร์มทั้งหมดและในอุจจาระและป้องกันการพัฒนาของจุลินทรีย์อื่น ๆ
การแสดงเป็นรูปเป็นร่างของการเตรียมน้ำซุป EC ที่มา: Pixabay.com
แบคทีเรีย Escherichia coli เป็นโคลิฟอร์มหลักในอุจจาระซึ่งเป็นสารปนเปื้อนในน้ำและแหล่งอาหารซึ่งเป็นสาเหตุของความผิดปกติของระบบทางเดินอาหารที่สำคัญ
ควรสังเกตว่ามีหลายซีโรไทป์ของ Escherchia coli เราสามารถพูดถึง enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) และ enteroaggregative (EAEC)
สื่อนี้มีความสามารถในการอนุญาตให้มีการพัฒนาทั้งหมด แต่ไม่สามารถแยกความแตกต่างออกจากกันได้ ต้องมีการทดสอบเพิ่มเติม
การศึกษาทางจุลชีววิทยาของน้ำและอาหารตามจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (MPN) เพื่อค้นหาโคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระเป็นโปรโตคอลที่ประกอบด้วยหลายขั้นตอน เฟสสันนิษฐานเฟสยืนยันและเฟสเสร็จสมบูรณ์ EC broth ใช้ในขั้นตอนการยืนยัน
รากฐาน
น้ำซุป EC
สื่อ EC ขึ้นอยู่กับการให้องค์ประกอบทางโภชนาการที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาโคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระที่เหมาะสมซึ่งรวมแบคทีเรีย Escherichia coli ไว้ด้วย
องค์ประกอบทางโภชนาการเหล่านี้จัดทำโดย triptein ซึ่งเป็นแหล่งของเปปไทด์และกรดอะมิโนที่ดีเยี่ยม นอกจากนี้ยังมีแลคโตสซึ่งเป็นคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ซึ่งให้พลังงานและช่วยให้สามารถแสดงได้ว่าแบคทีเรียผลิตก๊าซหรือไม่
ในทางกลับกันสื่อประกอบด้วยเกลือน้ำดีที่ให้ลักษณะเฉพาะเนื่องจากจะยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์แกรมบวกที่อาจมีอยู่ในตัวอย่าง
ในทำนองเดียวกันไดโปตัสเซียมฟอสเฟตและโมโนโปแตสเซียมฟอสเฟตทำหน้าที่เป็นระบบปรับสมดุล pH ระบบนี้มีความจำเป็นเนื่องจากแลคโตสที่อยู่ในน้ำซุปมีแนวโน้มที่จะทำให้กรดเป็นกรดเมื่อหมักโดยจุลินทรีย์ แต่จะได้รับการชดเชยด้วยเกลือฟอสเฟต
ดังนั้นองค์ประกอบเหล่านี้จึงมีความสำคัญเนื่องจากความเป็นกรดที่ไม่มีการควบคุมอาจส่งผลต่อการพัฒนาที่เหมาะสมของจุลินทรีย์ที่ต้องการ
ในส่วนของมันโซเดียมคลอไรด์จะทำให้ตัวกลางมีความเสถียรในออสโมติคในขณะที่น้ำเป็นตัวทำละลายสำหรับตัวถูกละลายที่มีอยู่และให้ความสอดคล้องของของเหลวกับตัวกลาง
Novobiocin Modified EC Broth
Okrend และ Rose ได้สร้างน้ำซุป EC ที่หลากหลายเรียกว่า novobiocin modified EC broth การปรับเปลี่ยนประกอบด้วยการลดความเข้มข้นของเกลือน้ำดีและเพิ่มโนโวบิโอซิน 20 มก. / ดล.
การปรับเปลี่ยนนี้ช่วยในการฟื้นตัวของสายพันธุ์ Enterohemorrhagic Escherichia coli (O157: H7)
ซีโรไทป์ของแบคทีเรียนี้ทำให้เกิดอาการลำไส้ใหญ่บวมอย่างรุนแรงซึ่งอาจนำไปสู่โรค hemolytic uremic syndrome (HUS) ซึ่งจะทำให้เกิดภาวะไตวายเฉียบพลันได้โดยมีอัตราการเสียชีวิตสูงถึง 50% ในผู้สูงอายุ
เนื่องจากการเจ็บป่วยและการเสียชีวิตประจำปีที่เกิดจากแบคทีเรียนี้เนื่องจากการบริโภคอาหารที่ปนเปื้อนกระทรวงเกษตรของสหรัฐอเมริกา (USDA) จึงแนะนำให้ใช้สื่อนี้เป็นอย่างยิ่ง
การจัดเตรียม
น้ำซุป EC
มีน้ำหนัก 37.4 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ควรปล่อยให้ส่วนผสมยืนเป็นเวลา 5 นาที ต่อจากนั้นในแหล่งความร้อนจะละลายได้โดยการกวนบ่อยๆ
เมื่อละลายแล้วจะถูกกระจายไปยังหลอดทดลองที่มีการปรับสภาพล่วงหน้าโดยมีท่อเดอแรมอยู่ ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
pH ของตัวกลางควรเป็น 6.9 ± 0.2 สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีเหลืองอำพัน
น้ำซุปจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ ในขณะที่ใช้น้ำซุปต้องอยู่ในอุณหภูมิห้อง
ในทางกลับกันน้ำซุป EC สามารถเตรียมที่ความเข้มข้นสองเท่าได้
Novobiocin Modified EC Broth
ชั่งของกลางที่ขาดน้ำ 36.7 กรัมแล้วละลายในน้ำ 1 ลิตร ส่วนที่เหลือของการเตรียมการจะเหมือนกับที่อธิบายไว้ข้างต้น
ใช้
การวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระ
EC broth เหมาะสำหรับขั้นตอนการยืนยันของการศึกษาโคลิฟอร์มโดยวิธี NMP ทั้งในตัวอย่างน้ำเช่นเดียวกับในผลิตภัณฑ์ยาและอาหาร
น้ำซุปแลคโตสที่ขุ่นและผลิตก๊าซที่ได้ในระยะสันนิษฐานควรนำกลับมาใส่ใหม่ในน้ำดีสีเขียวสดใส 2% และน้ำซุป EC
สำหรับโคลิฟอร์มทั้งหมดน้ำซุป EC จะถูกฟักแบบแอโรบิคเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 37 ° C และสำหรับโคลิฟอร์มในอุจจาระจะถูกฟักตัวแบบแอโรบิคเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 44 ° C
ในทั้งสองกรณีจะตีความได้ดังนี้: ท่อขุ่นที่มีการผลิตก๊าซถือว่าเป็นบวก หากไม่มีการผลิตก๊าซภายใน 24 ชั่วโมงการบ่มจะดำเนินต่อไปได้นานถึง 48 ชั่วโมง
น้ำซุปเชิงบวกของ EC จะเข้าสู่ขั้นตอนการยืนยันที่สมบูรณ์ซึ่งประกอบด้วยการทำซ้ำบนอาหารที่เลือกเช่นวุ้น Mac Conkey วุ้น EMB หรือ Endo agar
หากน้ำซุปที่ใช้เป็น EC ดัดแปลงโนโวบิโอซินแนะนำให้ใส่ท่อบวกซ้ำบนวุ้น Mac Conkey ที่มีซอร์บิทอล
ระบบประกันคุณภาพ
สื่อที่เตรียมแต่ละชุดต้องได้รับการควบคุมคุณภาพ ขั้นแรกต้องประเมินความเป็นหมันของตัวกลาง ในแง่นี้น้ำซุปหนึ่งหรือสองตัวจะถูกบ่มโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนในแอโรบิคเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือน้ำซุปใสไม่มีความขุ่นหรือเปลี่ยนสี
ประการที่สองต้องประเมินการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ที่ทราบเพื่อให้สามารถใช้แบคทีเรียต่อไปนี้: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028
ในทุกกรณีคาดว่าจะมีการพัฒนาจุลินทรีย์ที่น่าพอใจโดยสังเกตว่าน้ำซุปขุ่นที่มีการผลิตก๊าซสำหรับเชื้ออีโคไลและไม่มีก๊าซสำหรับเชื้อซัลโมเนลลา
สายพันธุ์อื่นที่สามารถรวมอยู่ในการควบคุม ได้แก่ Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212 สายพันธุ์เหล่านี้ต้องถูกยับยั้งโดยสิ้นเชิง
คำแนะนำ
- การวางท่อเดอแรมเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการศึกษาโคลิฟอร์ม
- แจกจ่ายสื่อในหลอดทดลองก่อนฆ่าเชื้อไม่เคยหลังจากนั้น
- ห้ามใช้หากสื่อมีอายุมากกว่า 3 เดือน
- ห้ามใช้หากสังเกตเห็นการเปลี่ยนแปลงในลักษณะปกติของสื่อ
อ้างอิง
- Britannia Laboratories EC ปานกลาง 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- Enterohemorrhagic E. coli ศูนย์ความมั่นคงทางอาหารและสาธารณสุข. 2553 มีจำหน่ายที่: cfsph.iastate.edu
- บริษัท นีโอเจน สื่อ EC มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
- Neogen Novobiocin ดัดแปลงสื่อ EC มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
- Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. การตรวจหาการแยกและการศึกษาลักษณะเฉพาะของ Escherichia coli ที่ผลิตสารพิษ Shiga จากเนื้อดินสดจากคนขายเนื้อในConcepciónจังหวัด จากTucumán Microbiol Rev Arg; 2553, 42 (4): 284-287. ดูได้ที่: www.scielo.org