- รากฐาน
- การจัดหาสารอาหาร
- พลังที่เลือก
- พลังที่แตกต่าง
- สมดุลออสโมติกและสารทำให้แข็งตัว
- การจัดเตรียม
- สารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรต์ 1% w / v
- Vogel-Johnson Agar Base Medium
- ใช้
- ระบบประกันคุณภาพ
- อ้างอิง
วุ้น Vogel จอห์นสันเป็นเลือกขนาดกลางและวัฒนธรรมค่าของแข็งสูตรพิเศษสำหรับการแยกเชื้อ Staphylococcus aureus สื่อนี้สร้างขึ้นโดย Vogel และ Johnson ในปี 1960 จากการดัดแปลงวุ้นเทลลูไรต์ไกลซีนที่คิดค้นขึ้นในปีพ. ศ. 2498 โดย Zebovitz, Evans และ Niven
การดัดแปลงประกอบด้วยการเพิ่มความเข้มข้นของแมนนิทอลที่มีอยู่ในตัวกลางและในการรวมตัวของตัวบ่งชี้ pH สูตรปัจจุบันประกอบด้วย triptein, สารสกัดจากยีสต์, แมนนิทอล, ไดโปตัสเซียมฟอสเฟต, ลิเธียมคลอไรด์, ไกลซีน, ฟีนอลเรด, วุ้น, สารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรต์ 1% และน้ำ
ที่มา: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec Flickr
ควรสังเกตว่ามีสื่ออื่น ๆ เช่น Vogel-Johnson agar ที่เลือกใช้สำหรับการแยก S. aureus เช่นวุ้น mannitol ที่มีรสเค็มและ Baird Parker agar ในแง่นี้อาจกล่าวได้ว่ารากฐานของวุ้น Vogel-Johnson เป็นส่วนผสมระหว่างวุ้น mannitol ที่มีรสเค็มและ Baird Parker agar
ประการแรกอาณานิคมของ S. aureus มีความโดดเด่นด้วยการหมักแมนนิทอลและเปลี่ยนตัวบ่งชี้ pH เป็นสีเหลือง ในทางกลับกันประการที่สอง S. aureus มีความโดดเด่นด้วยการลดเทลลูไรต์ให้เป็นเทลลูเรียมและสร้างโคโลนีสีเทาเป็นสีดำ คุณสมบัติทั้งสองอย่างพบได้ในวุ้นของ Vogel-Johnson
สารนี้เช่นเดียวกับสารคู่ขนานมีประโยชน์สำหรับการตรวจหาเชื้อ Staphylococcus aureus ในตัวอย่างอาหารการควบคุมสุขอนามัยของผลิตภัณฑ์อุตสาหกรรมและในตัวอย่างทางคลินิก
รากฐาน
การจัดหาสารอาหาร
สื่อของ Vogel-Johnson ประกอบด้วยสารสกัด triptein และยีสต์ สารทั้งสองให้กรดอะมิโนสายยาวซึ่งทำหน้าที่เป็นแหล่งของคาร์บอนและไนโตรเจนที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย แบคทีเรียที่สามารถเจริญเติบโตได้ในตัวกลางนี้จะแย่งสารอาหารจากสารเหล่านี้
พลังที่เลือก
วุ้นของ Vogel-Johnson สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมลบและแม้แต่แบคทีเรียแกรมบวกบางชนิดซึ่งสนับสนุนการพัฒนาของ staphylococci coagulase positive สารยับยั้ง ได้แก่ โพแทสเซียมเทลลูไรต์ลิเธียมคลอไรด์และไกลซีน
พลังที่แตกต่าง
สารที่สร้างตัวกลางที่แตกต่างนี้คือแมนนิทอลและโพแทสเซียมเทลลูไรต์ แมนนิทอลเป็นคาร์โบไฮเดรตและเมื่อมีการผลิตกรดหมักที่ทำให้ตัวกลางเปลี่ยนจากสีแดงเป็นสีเหลืองซึ่งเกิดขึ้นเนื่องจากมีตัวบ่งชี้ pH ฟีนอลสีแดง
ในขณะที่เทลลูไรต์ที่ไม่มีสีเมื่อลดลงเป็นเทลลูเรียมโลหะอิสระจะมีสีเทาเข้มถึงดำ
Staphylococcus aureus หมักแมนนิทอลและลดเทลลูไรต์ให้เป็นเทลลูเรียม ด้วยเหตุนี้อาณานิคมทั่วไปของ S. aureus ในตัวกลางนี้จึงมีสีเทาหรือดำล้อมรอบด้วยตัวกลางสีเหลือง
แบคทีเรียที่เติบโตในตัวกลางนี้และไม่ลดเทลลูไรต์หรือแมนนิทอลในการหมักจะสร้างอาณานิคมโปร่งใสล้อมรอบด้วยตัวกลางที่มีสีแดงซึ่งเข้มข้นกว่าสีเดิมเนื่องจากการทำให้เป็นด่างของตัวกลางโดยการใช้เปปโตน
ในทางกลับกันแบคทีเรียที่ลดการเกิดเทลลูไรต์ แต่ไม่ได้หมักแมนนิทอลจะเติบโตเป็นอาณานิคมสีเทาหรือดำที่ล้อมรอบด้วยตัวกลางสีแดงเข้ม
หากเตรียมตัวกลางโดยไม่เติมโพแทสเซียมเทลลูไรต์อาณานิคมของ S. aureus จะพัฒนาเป็นโคโลนีสีเหลืองล้อมรอบด้วยตัวกลางสีเหลืองเช่นเดียวกับในวุ้นแมนนิทอลที่มีรสเค็ม
สมดุลออสโมติกและสารทำให้แข็งตัว
Dipotassium phosphate รักษาสมดุลออสโมติกของตัวกลางและปรับ pH ให้เป็นกลาง 7.2 ในขณะที่วุ้นให้ความสม่ำเสมอที่มั่นคงกับอาหารเลี้ยงเชื้อ
การจัดเตรียม
สารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรต์ 1% w / v
สารละลายนี้ไม่รวมอยู่ในตัวกลางที่ขาดน้ำเนื่องจากไม่สามารถฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อได้ ด้วยเหตุนี้จึงมีการเตรียมแยกต่างหากและเพิ่มลงในอาหารที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว
อาคารพาณิชย์บางแห่งขายสารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรต์ 1% พร้อมใช้ หากคุณต้องการเตรียมในห้องปฏิบัติการให้ดำเนินการดังนี้:
ชั่งโพแทสเซียมเทลลูไรท์ 1.0 กรัมและตวงน้ำกลั่น 100 มล. ละลายโพแทสเซียมเทลลูไรท์ในน้ำส่วนหนึ่งจากนั้นเติมน้ำให้ครบ 100 มล. ฆ่าเชื้อสารละลายด้วยวิธีการกรอง
Vogel-Johnson Agar Base Medium
ชั่งน้ำหนักตัวกลางที่ขาดน้ำ 60 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ส่วนผสมถูกทำให้ร้อนจนเดือดเพื่อช่วยในการละลายที่สมบูรณ์ ในระหว่างกระบวนการละลายตัวกลางจะถูกกวนบ่อยๆ
ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน 15 ปอนด์และ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที นำออกจากหม้อนึ่งแล้วพักไว้จนอุณหภูมิประมาณ 45 ถึง 50 ° C เติมสารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรต์ 1% ที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้ 20 มล.
ผสมและเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ อนุญาตให้แข็งตัวและสั่งกลับด้านบนที่จับจานเพื่อเก็บในตู้เย็นในภายหลังจนกว่าจะใช้
pH สุดท้ายของตัวกลางที่เตรียมไว้ควรเป็น 7.2 ± 0.2
ก่อนที่จะหว่านตัวอย่างให้รอให้จานถึงอุณหภูมิห้อง
สีของสื่อที่เตรียมไว้เป็นสีแดง
ใช้
แม้ว่าจะสามารถใช้ในการแยก S. aureus ในตัวอย่างประเภทใดก็ได้ แต่ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของผลิตภัณฑ์ยาเครื่องสำอางและอาหาร
ขอแนะนำให้หัวเชื้อหนาแน่น การเพาะเมล็ดทำได้โดยการให้คะแนนด้วยด้ามแพลตตินั่มหรือใช้ไม้พาย Drigalski บนพื้นผิว
แผ่นจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง aerobiosis
ระบบประกันคุณภาพ
สามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมต่อไปนี้เพื่อทำการควบคุมคุณภาพบนสื่อของ Vogel-Johnson:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 หรือ Proteus mirabilis ATCC 43071
ผลที่คาดว่าจะได้รับมีดังนี้สำหรับสายพันธุ์ S. aureus เจริญเติบโตเป็นที่น่าพอใจโดยมีโคโลนีสีดำล้อมรอบด้วยตัวกลางสีเหลือง สำหรับ S. epidermidis การเจริญเติบโตอย่างสม่ำเสมอโดยมีอาณานิคมโปร่งแสงหรือสีดำล้อมรอบด้วยตัวกลางสีแดง
ในทำนองเดียวกันคาดว่าจะมีการยับยั้งทั้งหมดสำหรับ E. coli และการยับยั้งบางส่วนหรือทั้งหมดสำหรับ Proteus mirabilis ถ้ามันโตขึ้นมันจะทำเท่าที่จำเป็นและอาณานิคมจะเป็นสีดำล้อมรอบด้วยสีแดง
อ้างอิง
- BD Laboratories VJ (Vogel และ Johnson Agar) 2549 ดูได้ที่: bd.com
- Britannia Laboratories Vogel- จอห์นสันวุ้น 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- Britannia Laboratories โพแทสเซียมเทลลูไรต์ 2558 ดูได้ที่: britania.com
- ห้องปฏิบัติการ Himedia Vogel- Johnson Agar Medium 2018 มีจำหน่ายที่: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
- Vogel- ฐานวุ้นของจอห์นสัน คู่มือจุลชีววิทยาของเมอร์ค พิมพ์ครั้งที่ 12, หน้า 502-503 มีให้ที่: ผู้ใช้ / ทีม / ดาวน์โหลด
- ผู้ให้ข้อมูลWikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédiaเป็นสารานุกรมฟรีที่: wikipedia.org
- เวเนซุเอลามาตรฐาน Covenin 1292-89 (1989) ฟู้ดส์ การแยกและการแจกแจงของ Staphylococcus aureus มีจำหน่ายที่: sencamer.gob.ve