TCBS วุ้นเป็นวิธีของวัฒนธรรมที่มั่นคงสูงและเลือกค่าที่ใช้สำหรับการแยกและการเพาะปลูกของเชื้อแบคทีเรียของสกุล Vibrio โดยเฉพาะอย่างยิ่งเชื้อ Vibrio cholerae, parahaemolyticus โวลต์โวลต์และ vulnificus เป็นเชื้อโรคที่สำคัญชนิดนี้
คำย่อ TCBS ย่อมาจาก Thiosulfate Citrate Bile Sucrose วุ้นนี้เรียกอีกอย่างหนึ่งว่าเป็นสื่อเลือกสำหรับไวบริออส สูตรดั้งเดิมถูกสร้างขึ้นโดย Nakanishi และดัดแปลงโดย Kobayashi ในภายหลัง
TCBS medium เชิงพาณิชย์และแผ่นวุ้น TCBS ที่เพาะด้วยเชื้อ Vibrio cholerae ที่มา: รูปภาพ 1: ถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil / ภาพที่ 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
ประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์เปปโตนจากเนื้อสัตว์ไตรปไทน์โซเดียมซิเตรตโซเดียมไธโอซัลเฟตน้ำดีวัวซูโครสโซเดียมคลอไรด์เฟอริกซิเตรตโบรโมไทมอลบลูไทมอลบลูและวุ้น
องค์ประกอบนี้ช่วยให้สามารถพัฒนาสายพันธุ์วิบริโอได้อย่างเพียงพอจากตัวอย่างน้ำอาหารและอุจจาระ ยกเว้นเชื้อ Vibrio hollisae ซึ่งไม่เติบโตบนตัวกลางนี้ นอกจากนี้สาร TCBS ยังสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียอื่น ๆ ที่มาพร้อมกันโดยเฉพาะโคลิฟอร์ม
เนื่องจากปัญหาระบบทางเดินอาหารและลำไส้ที่ร้ายแรงซึ่งเกิดจากเชื้อวิบริโอบางชนิดการวินิจฉัยโรคจึงมีความสำคัญมาก มนุษย์ส่วนใหญ่ติดเชื้อจากการกินอาหารดิบหรือไม่สุกจากทะเลหรือน้ำเน่าเสีย แต่ยังเกิดจากการติดเชื้อจากบาดแผลด้วย
ด้วยเหตุนี้ห้องปฏิบัติการทางคลินิกจึงควรรวมวุ้น TCBS ไว้ในการศึกษาการเพาะเลี้ยงอุจจาระของตัวอย่างอุจจาระเหลวโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับลักษณะของน้ำข้าว โดยเฉพาะอย่างยิ่งหากผู้ป่วยรายงานว่าสัมผัสกับน้ำทะเลหรือบริโภคหอยหรือปลา
รากฐาน
สารสกัดจากยีสต์เปปโตนจากเนื้อสัตว์และไตรปไทน์เป็นแหล่งโภชนาการของอาหารชนิดนี้ อย่างไรก็ตาม TCBS agar เป็นสื่อที่ไม่เอื้ออำนวยต่อแบคทีเรียส่วนใหญ่
การเลือกที่สูงนั้นได้มาจากการเติมโซเดียมซิเตรตและน้ำดีออกจากวัว ทั้งสองเป็นสารยับยั้งที่ให้ pH อัลคาไลน์ไปยังตัวกลาง จำกัด การเจริญเติบโตของพืชที่มาพร้อมกับการเจริญเติบโตของ V. cholerae ท่ามกลางสายพันธุ์อื่น ๆ ควรสังเกตว่า Vibrio cholerae มีความไวต่อความเป็นกรดมาก
ในส่วนของมันโซเดียมคลอไรด์ออสโมติกจะปรับสมดุลของตัวกลาง นอกจากนี้เนื่องจากความเข้มข้นสูงมันยังทำหน้าที่เป็นสารยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียฮาโลฟิลิก
ซูโครสเป็นน้ำตาลที่สามารถหมักได้ซึ่งร่วมกับตัวบ่งชี้ pH bromothymol blue และ thymol blue ทำให้ตัวกลางมีลักษณะที่แตกต่างกัน ด้วยเหตุนี้ด้วยสื่อนี้จึงเป็นไปได้ที่จะแยกความแตกต่างของสายพันธุ์การหมักซูโครสจากสายพันธุ์ที่ไม่ผ่านการหมัก
อาณานิคมของสายพันธุ์หมักซูโครสจะมีสีเหลืองและจะเปลี่ยนตัวกลางจากสีเขียวเป็นสีเหลืองเนื่องจากการผลิตกรด สารที่ไม่ได้หมักจะมีสีโปร่งแสงและตัวกลางยังคงเป็นสีเดิม (สีเขียว)
ในทำนองเดียวกันสารนี้มีโซเดียมไธโอซัลเฟตเป็นแหล่งของกำมะถันและเฟอริกซิเตรตเป็นตัวแทนในการพัฒนา ทั้งสองแสดงแบคทีเรียที่สามารถผลิตก๊าซไข่เน่า (ก๊าซไม่มีสี) H 2 S เกิดจากไธโอซัลเฟตและต่อมาเมื่อทำปฏิกิริยากับเฟอริกซิเตรตจะมีรูปแบบการตกตะกอนสีดำที่มองเห็นได้
สุดท้ายวุ้นคือสิ่งที่ให้ความสม่ำเสมอที่มั่นคงกับตัวกลาง
การจัดเตรียม
หนัก 89 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ช่วยการละลายโดยการให้ความร้อนและการกวนบ่อยๆ สามารถต้มส่วนผสมได้นานถึง 2 นาที
สื่อนี้ไม่ได้ผ่านการนึ่งฆ่าเชื้อ หลังจากละลายแล้วจะเสิร์ฟโดยตรงบนจานที่ปราศจากเชื้อ เมื่อแข็งตัวพวกมันจะถูกจัดเรียงแบบกลับด้านบนเกล็ดเลือดและเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) จนกว่าจะใช้
ตัวกลางหลังการเตรียมจะต้องอยู่ที่ pH 8.6 ± 0.2
สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจอ่อนหรือสีเบจอมเขียวและสีของตัวกลางคือสีเขียวป่าหรือเขียวอมฟ้า
เป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องปล่อยให้จานอุ่นขึ้นก่อนที่จะเพาะตัวอย่าง
ใช้
ตัวอย่างที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการแยกเชื้อไวบริออสคืออุจจาระอุจจาระร่วง
ตัวอย่างอุจจาระหากไม่สามารถนำไปเพาะบนอาหารที่เลือกได้ในทันทีควรขนส่งบนสื่อ Cary Blair
เพื่อเพิ่มความไวของการเพาะเลี้ยงอุจจาระสามารถส่งผ่านน้ำเปปโตนที่ pH 8.4 เป็นสื่อเสริมคุณค่าได้นานสูงสุด 8 ชั่วโมงจากนั้นจะมีวัฒนธรรมย่อยไปยังสื่อ TCBS
นอกจากนี้ยังต้องคำนึงด้วยว่า Vibrios บางสายพันธุ์อาจทำให้เกิดภาวะโลหิตเป็นพิษในผู้ป่วยที่ได้รับภูมิคุ้มกันดังนั้นจึงสามารถแยกออกจากการเพาะเลี้ยงในเลือดได้ ในทำนองเดียวกันสามารถวิเคราะห์ตัวอย่างน้ำและอาหารจากทะเลเมื่อมีการแพร่ระบาดของโรคอหิวาตกโรค
หว่าน
หัวเชื้อของตัวอย่างการศึกษาต้องมีความโดดเด่นการหว่านจะดำเนินการโดยวิธี striation โดยอ่อนเพลีย แผ่นจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิค
โคโลนีที่สันนิษฐานของ Vibrio cholerae มีขนาดปานกลางเรียบทึบมีขอบบางและมีสีเหลืองเนื่องจากการหมักของซูโครส
สายพันธุ์ของ V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii และ V. vulnificus บางชนิดเติบโตในลักษณะเดียวกัน สายพันธุ์ Vibrios ที่สำคัญทางคลินิกอื่น ๆ เช่น V. parahaemolyticus จะไม่หมักซูโครสพัฒนาเป็นอาณานิคมสีเขียวมะกอก
แผ่นวุ้น TCBS ที่เพาะด้วยเชื้อ Vibrio parahaemolyticus ที่มา: isis325 Flickr
ในทางกลับกันต้องระลึกไว้เสมอว่าสายพันธุ์ Aeromonas และ Plesiomonas บางสายพันธุ์ที่เป็นออกซิเดส (+) สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารชนิดนี้ทำให้เกิดโคโลนีสีเหลืองซึ่งอาจทำให้แพทย์สับสนได้ ในขณะที่ Pseudomonas บางสายพันธุ์ยังมี oxidase (+) เติบโตเป็นอาณานิคมสีเขียวเช่น V. parahaemolyticus
การ จำกัด
ไม่ควรทำการทดสอบออกซิเดสที่เป็นบวกสำหรับสกุลวิบริโอจากโคโลนีที่ได้จากวุ้น TCBS เนื่องจากผลลัพธ์ที่ได้จะเป็นผลลบเท็จ สารประกอบที่อยู่ตรงกลางจะรบกวนการทดสอบนี้อย่างมาก ดังนั้นจึงต้องทำจากวัฒนธรรมย่อยเรื่องวุ้นเลือด
ระบบประกันคุณภาพ
เพื่อพิสูจน์ว่าสื่ออยู่ในสภาพดีขอแนะนำให้หว่านสายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักหรือได้รับการรับรองและสังเกตว่าการเจริญเติบโตเป็นไปตามลักษณะที่คาดไว้หรือไม่
สำหรับสิ่งนี้คุณสามารถใช้สายพันธุ์ของ:
-Vibrio cholerae- การเจริญเติบโตที่น่าพอใจ (อาณานิคมสีเหลืองขอบโปร่งแสง)
-Vibrio parahaemolyticus - - การเติบโตที่น่าพอใจ (อาณานิคมที่มีศูนย์กลางสีเขียวและขอบโปร่งแสง)
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - การเติบโตที่น่าพอใจ (อาณานิคมสีเหลืองที่มีรัศมีสีเดียวกันรอบ ๆ อาณานิคม)
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - การยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วน (อาณานิคมขนาดเล็กสีเหลืองหรือโปร่งแสง)
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- - การยับยั้งบางส่วนหรือทั้งหมด (อาณานิคมสีน้ำเงิน)
-Escherichia coli ATCC 25922 - ยับยั้งโดยสิ้นเชิง
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– การยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วน. (โคโลนีขนาดเล็กขอบสีเขียวตรงกลางโปร่งแสง)
การบ่มของตัวกลางที่ไม่ได้บรรจุควรไม่มีการเปลี่ยนแปลง
อ้างอิง
- ห้องปฏิบัติการ Difco Francisco Soria Melguizo วุ้น TCBS 2552 มีจำหน่ายที่: f-soria.es
- ห้องปฏิบัติการ BD BD TCBS Agar 2003 มีจำหน่ายที่: bd.com
- Britannia Laboratories TCBS ปานกลาง 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- Acumedia Laboratories. TCBS วุ้น 2559 ดูได้ที่: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina