วุ้นเลือด: เหตุผลการใช้และการเตรียม - ชีววิทยา

วุ้นเลือดเป็นสื่อวัฒนธรรมที่เป็นของแข็งอุดมค่า แต่ nonselective ใช้สำหรับการฟื้นตัวและการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่หลากหลายจากตัวอย่างทางคลินิกหรือสำหรับวัฒนธรรมย่อย

ควรรวมวุ้นในเลือดแบบคลาสสิกสำหรับการเพาะตัวอย่างทางคลินิกส่วนใหญ่ที่ได้รับในห้องปฏิบัติการ ยกเว้นตัวอย่างอุจจาระที่ไม่มีประโยชน์เว้นแต่จะเตรียมด้วยการดัดแปลงบางอย่าง

จานวุ้นเลือด

อาหารเลี้ยงเชื้อนี้โดยทั่วไปประกอบด้วยวุ้นพื้นฐานที่ได้รับการปรับปรุงและเลือด 5% ฐานวุ้นอาจแตกต่างกันไปตามความต้องการ แต่ส่วนใหญ่จะประกอบด้วยเปปโตนกรดอะมิโนวิตามินสารสกัดจากเนื้อสัตว์โซเดียมคลอไรด์วุ้นและอื่น ๆ

สำหรับเลือดโดยปกติจะต้องสัมผัสกับสัตว์วิวาเรียมเพื่อรับเลือดจากสัตว์เช่นแกะกระต่ายหรือม้า อย่างไรก็ตามนี่เป็นไปไม่ได้เสมอไปและบางครั้งก็ใช้เลือดของมนุษย์

สามารถเตรียมอาหารวุ้นในห้องปฏิบัติการหรือซื้อสำเร็จรูปจาก บริษัท เฉพาะ การเตรียมสื่อนี้เป็นสิ่งที่ละเอียดอ่อนที่สุดความประมาทในการเตรียมจะส่งผลให้ชุดปนเปื้อน

นั่นคือเหตุผลที่ต้องใช้ความระมัดระวังที่เป็นไปได้ทั้งหมดและในตอนท้ายจะต้องดำเนินการควบคุมคุณภาพโดยการบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C 1 แผ่นสำหรับทุกๆ 100 ที่เตรียมไว้

รากฐาน

Staphylococcus aureus เพาะเลี้ยงบนวุ้นในเลือด Nathan Reading บน Flickr Nathan R. บน Twitter ผ่าน Wikimedia Commons มีการกล่าวถึงแล้วว่าวุ้นในเลือดมีลักษณะของการเป็นตัวกลางที่ได้รับการเสริมความแตกต่างและไม่เลือก พื้นฐานสำหรับคุณสมบัติเหล่านี้มีอธิบายไว้ด้านล่าง

วุ้นเลือดเป็นอาหารที่อุดมด้วยคุณค่าเนื่องจากมีเลือด 5-10% บนฐานวุ้นเป็นสารเติมแต่งหลัก สารประกอบทั้งสองมีสารอาหารมากมายและคุณสมบัตินี้ช่วยให้แบคทีเรียที่เพาะปลูกได้ส่วนใหญ่เจริญเติบโตได้

การเติบโตนั้นเกิดขึ้นโดยไม่มีข้อ จำกัด ; ด้วยเหตุนี้จึงไม่เลือก อย่างไรก็ตามหากมีการเพิ่มสารประกอบลงในอาหารที่ป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิดและเป็นที่ชื่นชอบของจุลินทรีย์อื่น ๆ มันจะกลายเป็นสิ่งที่เลือกได้ เป็นกรณีนี้หากมีการเพิ่มยาปฏิชีวนะหรือยาต้านเชื้อราบางประเภท

ในทำนองเดียวกันวุ้นในเลือดเป็นสื่อที่แตกต่างกันเนื่องจากช่วยให้เราสามารถแยกแยะแบคทีเรียได้ 3 ชนิด ได้แก่ เบต้า - เฮโมไลติกอัลฟาฮีโมไลติกและแกมมา - ฮีโมไลติก

Beta-hemolytics เป็นสารที่มีความสามารถในการทำให้เม็ดเลือดแดงแตกหรือทำลายเม็ดเลือดแดงได้อย่างสมบูรณ์สร้างรัศมีที่ชัดเจนรอบ ๆ อาณานิคมดังนั้นพวกมันจึงสร้างßหรือß -hemolysis และจุลินทรีย์เรียกว่าß-hemolytic

ตัวอย่างของแบคทีเรียß-hemolytic ได้แก่ Streptococcus pyogenes และ Streptococcus agalactiae

Alpha-hemolytics เป็นสารที่ทำให้เกิดการแตกของเม็ดเลือดแดงบางส่วนโดยที่ฮีโมโกลบินจะถูกออกซิไดซ์เป็น methemoglobin ทำให้เกิดสีเขียวรอบ ๆ อาณานิคม ปรากฏการณ์นี้เรียกว่าαหรือα -hemolysis และแบคทีเรียจัดเป็นα - hemolytic

ตัวอย่างของแบคทีเรียα-hemolytic ได้แก่ Streptococcus pneumoniae และ Streptococcus ของกลุ่ม viridans

สุดท้ายมีสิ่งที่เรียกว่า gamma-hemolytic หรือ non-hemolytic bacteria สิ่งเหล่านี้เติบโตบนวุ้นโดยไม่สร้างการเปลี่ยนแปลงผลกระทบที่เรียกว่าγ -hemolysis และจุลินทรีย์คือγ -hemolytic

ตัวอย่างของแบคทีเรียγ-hemolytic: กลุ่ม D Streptococcus บางสายพันธุ์ (Streptococcus bovis และ Enterococcus faecalis)

การประยุกต์ใช้งาน

อาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นในเลือดเป็นหนึ่งในอาหารที่ใช้กันมากที่สุดในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา

ในบรรดาจุลินทรีย์ที่สามารถเจริญเติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือด ได้แก่ : แอโรบิคที่เข้มงวด, facultative, microaerophilic, ไม่ใช้ออกซิเจน, แบคทีเรียแกรมบวกหรือแกรมลบ, แบคทีเรียที่เติบโตเร็วหรือเติบโตช้า

แบคทีเรียที่ต้องการสารอาหารหรือจุกจิกบางชนิดก็เจริญเติบโตเช่นเดียวกับเชื้อราและยีสต์ ในทำนองเดียวกันมันมีประโยชน์สำหรับการเพาะเลี้ยงย่อยหรือเปิดใช้งานสายพันธุ์ที่อ่อนแอมากจากการเผาผลาญ

อย่างไรก็ตามการเลือกกรุ๊ปเลือดและวุ้นพื้นฐานจะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่น่าจะเป็นที่สงสัยว่าจะฟื้นตัวและการใช้เพลต (การเพาะเชื้อหรือยาปฏิชีวนะ)

การเลือกกรุ๊ปเลือด

เลือดอาจเป็นเนื้อแกะกระต่ายม้าหรือมนุษย์ก็ได้

ที่แนะนำมากที่สุดคือเลือดของเนื้อแกะโดยมีข้อยกเว้นบางประการ ตัวอย่างเช่นในการแยกสายพันธุ์ Haemophilus โดยเลือดที่แนะนำคือเลือดม้าหรือกระต่ายเนื่องจากเลือดเนื้อแกะมีเอนไซม์ที่ยับยั้งปัจจัย V.

สิ่งที่แนะนำน้อยที่สุดคือมนุษย์อย่างไรก็ตามมีการใช้มากที่สุดอาจเป็นเพราะหาได้ง่ายที่สุด

เลือดจะต้องได้รับการช็อกไฟฟ้าโดยไม่ต้องเติมแต่งใด ๆ และจากสัตว์ที่มีสุขภาพดี สำหรับการใช้เลือดของมนุษย์ต้องคำนึงถึงปัจจัยหลายประการ:

หากเลือดมาจากผู้ที่ติดเชื้อแบคทีเรียพวกเขาจะมีแอนติบอดีจำเพาะ ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้การเจริญเติบโตของแบคทีเรียบางชนิดมีแนวโน้มที่จะถูกยับยั้ง

หากได้รับจากธนาคารเลือดจะมีซิเตรตและแบคทีเรียบางชนิดอาจไม่เติบโตต่อหน้า ในทางกลับกันหากเลือดมาจากผู้ป่วยที่รับประทานยาปฏิชีวนะการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่อ่อนแอจะถูกยับยั้งได้

และถ้าเลือดมาจากคนที่เป็นเบาหวานน้ำตาลกลูโคสที่มากเกินไปจะขัดขวางการพัฒนารูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงที่เหมาะสม

ทางเลือกของประเภทวุ้นพื้นฐาน

วุ้นพื้นฐานที่ใช้ในการเตรียมวุ้นเลือดมีความกว้างมาก ในหมู่พวกเขา ได้แก่ : วุ้นสารอาหาร, วุ้นหัวใจแช่หัวใจ, วุ้นถั่วเหลืองทริปซิเคส, วุ้นMüeller Hinton, วุ้น Thayer Martin, วุ้นโคลัมเบีย, วุ้น Brucella, วุ้น Campylobacter เป็นต้น

การใช้วุ้นเลือดตามพื้นฐานที่ใช้ในการเตรียม

วุ้นสารอาหาร

ฐานนี้ใช้น้อยที่สุดเนื่องจากส่วนใหญ่จะเติบโตแบคทีเรียที่ไม่ต้องการเช่นแบคทีเรียในลำไส้, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp เป็นต้น ไม่แนะนำให้แยกเชื้อ Streptococcus

วุ้นเลี้ยงหัวใจ (BHI)

เป็นหนึ่งในอาหารที่ใช้เป็นฐานสำหรับวุ้นในเลือดเนื่องจากมีสารอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียส่วนใหญ่รวมถึง Streptococcus sp และแบคทีเรียที่มีความต้องการอื่น ๆ แม้ว่าจะไม่เหมาะสมที่จะสังเกตรูปแบบของการแตกของเม็ดเลือดแดง

โดยทั่วไปแล้วเลือดของลูกแกะจะใช้กับฐานนี้

นอกจากนี้ยังสามารถเตรียมตัวแปรวุ้นในเลือดซึ่งมีการเพิ่มสารประกอบอื่น ๆ เพื่อแยกจุลินทรีย์บางชนิด ตัวอย่างเช่น Brain Heart Infusion Agar ที่เสริมด้วยเลือดกระต่ายซีสตีนและกลูโคสสามารถใช้เพื่อแยกเชื้อ Francisella tularensis ได้

ในขณะที่ซีสตีนเทลลูไรต์จะมีประโยชน์ในการแยก Corynebacterium diphteriae สามารถใช้เลือดมนุษย์หรือเนื้อแกะได้

เมื่อเบต้า - เม็ดเลือดแดงแตกครั้งแรกจะเห็นเป็นรัศมีแคบ ๆ ในขณะที่รัศมีที่สองจะกว้างขึ้นมาก

ในทำนองเดียวกันฐานนี้ร่วมกับ bacitracin แป้งข้าวโพดเลือดม้าและผลิตภัณฑ์เสริมอาหารอื่น ๆ (IsoVitaleX) ใช้สำหรับการแยกเชื้อ Haemophilus sp จากตัวอย่างทางเดินหายใจ

นอกจากนี้หากมีการเพิ่มยาปฏิชีวนะคลอแรมเฟนิคอล - เจนตามิซินหรือเพนิซิลลิน - สเตรปโตมัยซินร่วมกับเลือดม้าก็จะเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกเชื้อราที่ทำให้เกิดโรคที่ต้องการแม้ว่าจะให้ผลผลิตสูงกว่าวุ้นน้ำตาล Sabouraud มีประโยชน์อย่างยิ่งในการแยก Histoplasma capsulatum

วุ้นถั่วเหลือง Trypticase

ฐานนี้เป็นที่แนะนำมากที่สุดสำหรับการสังเกตรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงที่ดีขึ้นและสำหรับการตรวจวินิจฉัยเช่นออปโตควินแทกซาและบาซิทราซิน เป็นวุ้นเลือดคลาสสิกที่ใช้เป็นประจำ

ที่มีฐานนี้คุณยังสามารถเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือดเป็นพิเศษสำหรับ Corynebacterium diphteriae กับ tellurite ซีสตีนและเลือดของลูกแกะ

ในทำนองเดียวกันการรวมกันของวุ้นนี้กับเลือดของลูกแกะบวกกับคานามัยซิน - แวนโคไมซินนั้นเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการเจริญเติบโตของแอนแอโรบิคโดยเฉพาะอย่างยิ่ง Bacteroides sp

วุ้นMüeller Hinton

ฐานที่เสริมด้วยเลือดนี้ใช้เพื่อให้ยาปฏิชีวนะของจุลินทรีย์ที่จุกจิกเช่น Streptococcus sp

นอกจากนี้ยังมีประโยชน์สำหรับการแยกเชื้อเช่น Legionella pneumophila

Thayer Martin Agar

สารนี้เหมาะเป็นฐานสำหรับวุ้นในเลือดเมื่อสงสัยว่าสกุล Neisseria โดยเฉพาะ Neisseria meningitidis เนื่องจาก N. gonorrhoeae ไม่เติบโตในวุ้นในเลือด

นอกจากนี้ยังใช้เพื่อทดสอบความอ่อนแอต่อ Neisseria meningitidis

วุ้นโคลัมเบีย

ฐานนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการเพาะตัวอย่างชิ้นเนื้อในกระเพาะอาหารสำหรับเชื้อ Helicobacter pylori

สื่อเตรียมโดยการเติมเลือดแกะ 7% ที่กระตุ้นด้วยยาปฏิชีวนะ (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B และ cefsulodin) เพื่อ จำกัด การเติบโตของแบคทีเรียประเภทอื่น ๆ ที่อาจมีอยู่

ฐานเดียวกันนี้เสริมด้วยเลือดของมนุษย์หรือเนื้อแกะกรด nalidixic และ colistin มีประโยชน์ในการแยก Gardnerella vaginalis นอกจากนี้ยังเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการประเมินความไวต่อยาต้านจุลชีพต่อยาปฏิชีวนะของจุลินทรีย์ชนิดเดียวกัน

นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการเตรียมวุ้นในเลือดสำหรับการเพาะเลี้ยงแบบไม่ใช้ออกซิเจนเพิ่มอะมิโนไกลโคไซด์และแวนโคไมซิน

ฐานนี้ช่วยให้สามารถสังเกตรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงได้อย่างเหมาะสม

วุ้น Brucella

สารนี้ใช้เป็นฐานสำหรับวุ้นในเลือดร่วมกับการเพิ่มวิตามินเคจึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียที่ไม่ใช้ออกซิเจน ในกรณีนี้แนะนำให้ใช้เลือดของลูกแกะ

เชื้อ Campylobacter

Campylobacter agar เสริมด้วยเลือดแกะ 5% และยาปฏิชีวนะ 5 ชนิด (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B และ vancomycin) เป็นสื่อที่ใช้ในการแยก Campylobacter jejuni ในตัวอย่างอุจจาระ

การจัดเตรียม

โรงเรือนพาณิชย์แต่ละแห่งนำคำแนะนำในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ 1 ลิตรไว้ที่ด้านหลังของภาชนะ การคำนวณที่สอดคล้องกันสามารถทำได้เพื่อเตรียมปริมาณที่ต้องการขึ้นอยู่กับวุ้นพื้นฐานที่เลือก

ชั่งน้ำหนักและละลาย

วุ้นพื้นฐานขาดน้ำ (ผง) จึงต้องละลายในน้ำกลั่นปรับ pH 7.3

ปริมาณที่ระบุโดยวุ้นพื้นฐานที่เลือกจะถูกชั่งน้ำหนักและละลายในปริมาณน้ำที่สอดคล้องกันในขวดจากนั้นให้ความร้อนด้วยความร้อนปานกลางและผสมกับการเคลื่อนไหวแบบหมุนจนกว่าผงทั้งหมดจะละลาย

ฆ่าเชื้อ

เมื่อละลายแล้วให้ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 20 นาที

รวมเลือด

เมื่อออกจากหม้อนึ่งขวดจะได้รับอนุญาตให้เย็นจนกว่าอุณหภูมิจะอยู่ระหว่าง 40 ถึง 50 ° C เป็นอุณหภูมิที่ผิวหนังของมนุษย์รองรับและในขณะเดียวกันวุ้นก็ยังไม่แข็งตัว

ในการทำเช่นนี้ให้ใช้มือสัมผัสขวดและถ้าทนความร้อนได้ก็เป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมในการเติมเลือดที่ละลายในเลือดตามปริมาณที่สอดคล้องกัน (50 มล. สำหรับวุ้นแต่ละลิตร) ผสมเบา ๆ ให้เป็นเนื้อเดียวกัน

ทางผ่านของการรวมตัวของเลือดเป็นสิ่งสำคัญเพราะถ้าทำเมื่อตัวกลางร้อนมากเม็ดเลือดแดงจะแตกตัวและไม่ใช้ตัวกลางในการสังเกตการแตกของเม็ดเลือดแดง

ถ้าเติมเย็นเกินไปมันจะจับตัวเป็นก้อนและพื้นผิวของตัวกลางจะไม่เรียบเพื่อให้ได้คะแนนที่เหมาะสม

เทลงในจาน Petri

เสิร์ฟในอาหาร Petri ที่ปราศจากเชื้อทันทีหลังจากทำให้เลือดเป็นเนื้อเดียวกัน เทลงในจานเพาะเชื้อแต่ละจานประมาณ 20 มล. ขั้นตอนนี้ทำได้ในเครื่องดูดควันแบบลามินาร์หรือใกล้กับหัวเผา

เมื่อเสิร์ฟวุ้นเลือดในจาน Petri ไม่ควรมีฟองอากาศหลงเหลืออยู่บนพื้นผิวของจาน หากสิ่งนี้เกิดขึ้นเปลวไฟของเตา Bunsen จะถูกส่งผ่านจานอย่างรวดเร็วเพื่อกำจัดพวกมัน

จานได้รับอนุญาตให้แข็งตัวและเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) โดยคว่ำจนกว่าจะใช้ ก่อนที่จะใช้แผ่นวุ้นเลือดต้องทำให้สุก (อนุญาตให้ถึงอุณหภูมิห้อง) เพื่อให้สามารถเพาะได้

จานที่เตรียมไว้ใช้เวลาประมาณ 1 สัปดาห์

อ้างอิง

Bayona M. เงื่อนไขทางจุลชีววิทยาสำหรับการเพาะเลี้ยง Helicobacter pylori Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). จุลชีววิทยาคลินิกในทางปฏิบัติ University of Cadiz รุ่นที่ 2. บริการสิ่งพิมพ์ UCA
"วุ้นเลือด" Wikipedia สารานุกรมเสรี 10 ธ.ค. 2561, 14:55 น. UTC. 27 ธ.ค. 2018, 01:49 น. en.wikipedia.org.
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA
CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. กัวเตมาลา มีจำหน่ายที่: trensa.com
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินาบรรณาธิการ Panamericana SA

วุ้นเลือด: เหตุผลการใช้และการเตรียม - ชีววิทยา - 2026