POTATO DEXTROSE AGAR: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

วุ้น potato dextroseเป็นสื่อที่ไม่ใช่ของแข็ง - วัฒนธรรมสารอาหารที่เลือก ชนิดของแบคทีเรียและเชื้อราสามารถเจริญเติบโตได้ แต่มีการระบุการใช้โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกเชื้อราและยีสต์ที่เป็นเส้นใย เรียกอีกอย่างว่า PDA medium สำหรับสำนวนภาษาอังกฤษ Potato Dextrose Agar

มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการแยกเชื้อราไฟโตพาโทเจนิกนั่นคือเชื้อราที่มีผลต่อพืช ในการหว่านตัวอย่างจากผักที่ติดเชื้อสามารถใช้วิธีอื่นเช่น Sabouraud agar หรือ malta-agar อย่างไรก็ตามสำหรับการใช้งานเป็นประจำควรใช้วุ้นเดกซ์โตรสมันฝรั่งเนื่องจากได้รับการสร้างสปอร์มากขึ้น

Aspergillus niger และ Sinemas ในวุ้นเดกซ์โทรสมันฝรั่งตามลำดับ ที่มา: Alextrevelian 006 ที่ English Wikipedia / Joselrojas

นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการนับอาณานิคมของเชื้อราในตัวอย่างเครื่องสำอางผลิตภัณฑ์ยาและอาหารจากนมบางชนิด ในทำนองเดียวกันมันเหมาะสำหรับการหว่านตัวอย่างของการขูดผิวหนังเพื่อค้นหา Dermatophytes ซึ่งเจริญเติบโตได้ดีในสื่อนี้โดยพัฒนาเม็ดสีที่มีลักษณะเฉพาะ

Potato dextrose medium เป็นสื่อที่ง่ายและสะดวกในการเตรียมในห้องปฏิบัติการ ประกอบด้วยตามชื่อของมันการแช่มันฝรั่งเดกซ์โทรสและวุ้น นอกจากนี้ยังสามารถเพิ่มสารยับยั้งเพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียและเพิ่มการคัดเลือกสำหรับเชื้อรา

รากฐาน

Potato dextrose agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ให้องค์ประกอบทางโภชนาการที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาเชื้อราและยีสต์ที่มีเส้นใย

การผสมมันฝรั่งกับกลูโคสให้แหล่งพลังงานที่สมบูรณ์แบบสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อราที่น่าพอใจ ในขณะที่วุ้นเป็นผู้ที่ให้ความสอดคล้องกับตัวกลาง

ตัวกลางเพียงอย่างเดียวไม่ได้ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียดังนั้นจึงเป็นสื่อที่ไม่เลือก เพื่อให้ได้รับการคัดเลือกจำเป็นต้องมีการเพิ่มสารยับยั้งเช่นกรดทาร์ทาริกหรือยาปฏิชีวนะ

การจัดเตรียม

- การเตรียมวุ้นเด็กซ์โตรสมันฝรั่งแบบโฮมเมด (ไม่ใช่เชิงพาณิชย์)

จานเพาะเชื้อ

เตรียมไว้ดังนี้:

ในตอนแรกมันฝรั่งจะถูกล้างอย่างดีโดยเอาดินที่มีอยู่ออก หั่นเป็นชิ้นบาง ๆ พร้อมทุกอย่างและเปลือก ชั่งมันฝรั่ง 200 กรัมและต้มในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรเป็นเวลาครึ่งชั่วโมง

ในตอนท้ายของเวลาให้กรองหรือกรองสิ่งที่เตรียมทั้งหมดผ่านผ้า

ของเหลวที่ได้จะเสร็จสมบูรณ์ด้วยน้ำกลั่นไม่เกินหนึ่งลิตร เติมวุ้น 20 กรัมและเดกซ์โทรส 20 กรัมลงในยาผสมให้เข้ากันและนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C ที่ความดัน 15 ปอนด์เป็นเวลา 15 นาที

ปล่อยให้เย็นถึง 50 ° C และเสิร์ฟในอาหาร Petri ที่ปราศจากเชื้อ จานที่เตรียมไว้จะถูกเก็บไว้ในตู้เย็น

เวดจ์

นอกจากนี้ยังสามารถเตรียมเวดจ์วุ้นมันฝรั่งเดกซ์โทรส

ในกรณีนี้ก่อนการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันจะต้องใส่ตัวกลาง 12 ถึง 15 มิลลิลิตรในหลอดหลังจากนั้นจะถูกนึ่งฆ่าเชื้อและเมื่อปล่อยทิ้งไว้ให้นอนบนส่วนรองรับพิเศษจนกว่าจะแข็งตัว เก็บในตู้เย็น

ตัวกลางยังคงอยู่ที่ pH 5.6 ± 0.2 อย่างไรก็ตามห้องปฏิบัติการบางแห่งเพิ่มกรดทาร์ทาริก 10% เพื่อลด pH ลงเหลือ 3.1 ± 0.1 เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย

ในแง่เดียวกันนี้ห้องปฏิบัติการอื่น ๆ ต้องการเพิ่มยาปฏิชีวนะเพื่อให้สามารถเลือกใช้ในการเพาะปลูกเชื้อราและป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย

- การเตรียมวุ้นเดกซ์โทรสในเชิงพาณิชย์

ชั่งน้ำหนักของตัวกลางที่ขาดน้ำตามท้องตลาด 39 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร พักไว้ 5 นาที

ส่วนผสมจะถูกทำให้ร้อนด้วยการกวนบ่อยๆจนละลายหมด จากนั้นนำไปฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที

สามารถเตรียมเพลทหรือเวดจ์ได้ ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

pH ยังคงอยู่ที่ 5.6 ± 0.2 หากต้องการ pH 3.1 ควรเติมกรดทาร์ทาริก 20% ที่ปราศจากเชื้อ 14 มล. ก่อนเสิร์ฟลงในจาน

ตัวกลางดิบคือสีเบจและตัวกลางที่เตรียมไว้คืออำพันอ่อนมีลักษณะขุ่นเล็กน้อยหรือเป็นสีเหลือบ

การประยุกต์ใช้งาน

ขั้นตอนการหว่านตัวอย่างพืชบนวุ้นเดกซ์โทรสมันฝรั่ง

- สำหรับใบเปื้อน

ใบถูกหั่นเป็นชิ้น

ในแก้วขนาด 50 ซีซีที่มีแอลกอฮอล์ 50% วางเศษใบไม้ (ชิ้นที่เปื้อนและมีสุขภาพดี) เพื่อฆ่าเชื้อบนพื้นผิวเป็นเวลา 20 ถึง 30 วินาที ทิ้งแอลกอฮอล์และเติมโซเดียมไฮโปคลอไรท์ 20% เป็นเวลา 40 ถึง 50 วินาทีหากเป็นใบบาง ๆ และเพิ่มเวลาเป็น 80 วินาทีหากเป็นเปลือกไม้และท่อนไม้

ทิ้งโซเดียมไฮโปคลอไรท์และนำชิ้นส่วนที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยคีมฆ่าเชื้อแล้ววางลงบนพื้นผิวของตัวกลาง (สูงสุด 10 ชิ้น) ตั้งวันที่และฟักตัวที่อุณหภูมิ 20-30 ° C

- สำหรับผลไม้และหัว

หากผลไม้มีเนื้อให้เปิดผลไม้ที่ได้รับผลกระทบจากเชื้อราและนำชิ้นส่วนด้วยมีดผ่าตัดที่ปราศจากเชื้อจากทั้งส่วนที่เป็นโรคและส่วนที่มีสุขภาพดีแล้ววางไว้บนพื้นผิวของวุ้น

ถ้าผลไม้เป็นรสเปรี้ยวเช่นมะนาวหรือส้มต้องเปิดเมล็ดและหว่านเมล็ด

เมื่อพื้นผิวของผลไม้ได้รับผลกระทบและสังเกตเห็นสปอร์อุดมคติคือการใช้วิธีขูดบนจาน ซึ่งประกอบด้วยการสัมผัสสปอร์ด้วยไม้พายรูปตัว“ L” ที่ผ่านการฆ่าเชื้อและทำให้เย็นแล้วจากนั้นทำการหยอดเมล็ดซิกแซก 2-3 ครั้งบนวุ้น

- สำหรับธัญพืช

พวกเขาจะถูกฆ่าเชื้อตามที่อธิบายไว้ในใบและวางบนวุ้นในภายหลัง

- สำหรับกิ่งก้านและลำต้น

เปลือกจะถูกขูดออกและนำชิ้นส่วนที่มีสุขภาพดีและเป็นโรคในภายหลังมาหว่านลงบนวุ้นโดยตรง

แผ่นเพาะเมล็ดจะถูกบ่มแบบแอโรบิคที่อุณหภูมิ 20-30 ° C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง

ขั้นตอนการหว่านตัวอย่างผิวหนังเส้นผมหรือเล็บบนวุ้นเดกซ์โทรสมันฝรั่ง

การสุ่มตัวอย่างควรทำโดยใช้มีดผ่าตัดเบอร์ 11 ไม่ว่าจะเป็นการตัดขนเกล็ดผิวหนังหรือเล็บที่ได้รับผลกระทบเพื่อค้นหาผิวหนัง ก่อนนำตัวอย่างควรฆ่าเชื้อบริเวณนั้นด้วยแอลกอฮอล์ 70%

- ตัวอย่างผิวหนัง

ในแผลที่เป็นเกล็ดควรขูดขอบของรอยโรคเนื่องจากมีแนวโน้มที่จะพบเชื้อราที่นั่น

ในแผลที่มีสารหลั่งตัวอย่างจะถูกนำมาด้วยไม้กวาดแห้งหรือเปียก หว่านทันทีบนวุ้นเดกซ์โตรสมันฝรั่งหรือวุ้นซาบูราบัด หลีกเลี่ยงวิธีการขนส่ง

อีกวิธีหนึ่งในการสุ่มตัวอย่างคือผ่านเทคนิคพรมสี่เหลี่ยมของ Mariat และ Adan Campos ในกรณีนี้พื้นที่ที่ได้รับผลกระทบจะถูกถูด้วยขนสัตว์ที่ปราศจากเชื้อ 5 ครั้งเพื่อการเพาะปลูกในภายหลัง

สามารถใส่ตัวอย่างลงในอาหารเลี้ยงเชื้อได้โดยตรง

- ตัวอย่างผม

ส่วนที่ได้รับผลกระทบสามารถตัดออกหรือถอนออกได้ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับพยาธิวิทยา วางตัวอย่างในอาหารเลี้ยงเชื้อ

- ตัวอย่างเล็บ

สามารถขูดหรือตัดส่วนใดส่วนหนึ่งของเล็บที่ได้รับผลกระทบได้ จะขึ้นอยู่กับประเภทของการบาดเจ็บ

ตัดตัวอย่างเป็นชิ้นขนาด 1 มม. ก่อนหว่านเพื่อเพิ่มโอกาสในการสัมผัสเชื้อรากับอาหารเลี้ยงเชื้อ

ขั้นตอนการระบุ

โคโลนีที่ได้รับบนจานจะถูกแยกในท่อที่มีวุ้นเดกซ์โทรสของมันฝรั่งเพื่อทำการศึกษาโคโลนีในระดับมหภาค (ลักษณะสีความสม่ำเสมอระดับการพัฒนา

การศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์ (การสังเกตโครงสร้างและการก่อตัวของโครงสร้าง) สามารถทำได้โดยใช้จุลินทรีย์หรือการสังเกตโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ระหว่างสไลด์กับสไลด์

จำนวนอาณานิคม

สื่อนี้สามารถใช้เพื่อตรวจสอบปริมาณเชื้อราและยีสต์ที่มีอยู่ในตัวอย่างพืชอาหารเครื่องสำอางหรือยา เพื่อจุดประสงค์นี้จึงใช้วุ้นเดกซ์โทรสที่เสริมด้วยยาปฏิชีวนะเช่น: (คลอแรมเฟนิคอล, คลอโรเตตราไซคลีนหรือทั้งสองอย่าง)

เทตัวอย่าง 1 มล. - ควรเจือจาง - ลงในจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อและว่างเปล่าจากนั้นละลายแผ่นวุ้นเด็กซ์โตรสมันฝรั่งและปล่อยให้เย็นถึง 45 ° C เทลงบนจานเพาะเชื้อแล้วหมุนจนเป็นเนื้อเดียวกัน พักไว้จนกว่าจะแข็งตัว

ฟักไข่แบบแอโรบิคที่อุณหภูมิ 20-25 ° C (แม่พิมพ์) หรือ 30-32 ° C (ยีสต์) เป็นเวลา 5 ถึง 7 วันขึ้นไปขึ้นอยู่กับชนิดของเชื้อราที่ต้องการและชนิดของตัวอย่าง สามารถใช้จานสองใบเพื่อบ่มในช่วงอุณหภูมิทั้งสอง

การนับอาณานิคมของเชื้อราในตัวอย่างอาหาร วุ้นมันฝรั่งเดกซ์โทรสเสริมด้วยยาปฏิชีวนะ ที่มา: pxhere.com photo / 777267

การบำรุงรักษาสายพันธุ์ของเชื้อรา

Potato Dextrose Agar สามารถใช้เพื่อรักษาสายพันธุ์ของเชื้อราที่ทำงานได้เป็นเวลาหลายปี

สำหรับสิ่งนี้เชื้อราจะเติบโตบนชิ้นส่วนของวุ้นเดกซ์โทรสมันฝรั่งและเมื่อเชื้อราเติบโตแล้วจะถูกปกคลุมด้วยน้ำมันแร่ น้ำมันควรผ่านการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งเป็นเวลา 45 นาทีและมีความหนืดประมาณ 300 ถึง 330 Saybolt น้ำมันควรอยู่เหนือปลายเอียง 1 ถึง 2 ซม.

ระบบประกันคุณภาพ

จากแต่ละชุดที่เตรียมไว้ใช้ 1 หรือ 2 แผ่นแล้วนำไปบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงหรือที่ 20 ° C เป็นเวลา 96 ชั่วโมง การควบคุมการเป็นหมันที่ดีคือการไม่พบการพัฒนาของอาณานิคม

นอกจากนี้ยังสามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักหรือได้รับการรับรองเช่น:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 คาดว่าจะมีการเติบโตที่ดีในทุกกรณี

อ้างอิง

1. Britannia Laboratories มันฝรั่งวุ้นกลูโคส 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
2. ห้องปฏิบัติการนีโอเจน วุ้นมันฝรั่งเด็กซ์โตรส. มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
3. ห้องปฏิบัติการ Insumolab วุ้นมันฝรั่งเดกซ์โทรส มีจำหน่ายที่: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
5. Casas-Rincón G. Mycology ทั่วไป 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. เวเนซุเอลาการากัส
6. Aceituno M. การประเมินคุณภาพทางจุลชีววิทยาในอายแชโดว์ชนิดผงขนาดกะทัดรัดของห้องปฏิบัติการการผลิตแห่งชาติตามวิธีการอ้างอิง Pharmacopea Usp 2005 วิทยานิพนธ์ที่มีคุณสมบัติเหมาะสมสำหรับตำแหน่งเภสัชเคมี มหาวิทยาลัยซานคาร์ลอสแห่งกัวเตมาลา
7. Cuétara M. การประมวลผลตัวอย่างพื้นผิว. วารสาร Iberoamerican of Mycology. 2007 PP 1-12