- รากฐาน
- การจัดเตรียม
- การประยุกต์ใช้งาน
- ลักษณะของอาณานิคม
- การแยกแบคทีเรียกรดแลคติก
- จำนวนแบคทีเรียที่เป็นกรดแลคติก
- ระดับการวิจัย
- ระบบประกันคุณภาพ
- อ้างอิง
MRS agarเป็นวัฒนธรรมสื่อที่เป็นของแข็งที่เลือกใช้สำหรับการแยกและการแจงนับของแบคทีเรียกรดแลคติกโดยเฉพาะอย่างยิ่งของแลคโตบาซิลลัสสกุล วุ้นนี้ถูกสร้างขึ้นในปี 1960 โดย Man, Rogosa และ Sharpe ซึ่งมีชื่อเดียวกัน แต่เนื่องจากความซับซ้อนจึงมักใช้ตัวย่อ MRS
ประกอบด้วยโปรตีโอสเปปโตน, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, สารสกัดจากยีสต์, กลูโคส, ซอร์บิทานโมโนลีต, ไดโปตัสเซียมฟอสเฟต, โซเดียมอะซิเตต, แอมโมเนียมซิเตรต, แมกนีเซียมซัลเฟต, แมงกานีสซัลเฟตและวุ้น
Man Rogosa และ Sharpe Agar (MRS) ที่เพาะด้วย Lactobacillus sp. ที่มา: ภาพถ่ายที่ได้รับบริจาคสำหรับบทความนี้โดยผู้เขียน: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. ภาพถ่ายที่ถ่ายระหว่างการสอบสวนเรื่อง: การประเมินแบคทีเรียกรดแลคติกและ Bifidobacteria ที่มีศักยภาพโปรไบโอติกในน้ำนมแม่และอุจจาระของทารก .
องค์ประกอบนี้ช่วยให้สามารถพัฒนาแบคทีเรียกรดแลคติกได้อย่างเหมาะสมจากตัวอย่างทางคลินิกเช่นอุจจาระตกขาวตัวอย่างทางปากและนมแม่รวมทั้งอาหารจากนมและเนื้อสัตว์
ไม่ได้ใช้เป็นประจำในห้องปฏิบัติการทางคลินิกเนื่องจากแบคทีเรียกรดแลคติกไม่ค่อยมีส่วนเกี่ยวข้องกับกระบวนการของโรค อย่างไรก็ตามในสาขาจุลชีววิทยาอาหารมีการใช้ MRS agar บ่อยกว่า
ในทางกลับกันสื่อนี้ถูกใช้โดยศูนย์วิจัยบางแห่งซึ่งมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาแบคทีเรียกรดแลคติก
รากฐาน
Man, Rogosa และ Sharpe agar มีองค์ประกอบที่ค่อนข้างซับซ้อน โดยการแยกฟังก์ชั่นของแต่ละองค์ประกอบสามารถอธิบายรากฐานได้
โปรติโอสเปปโตนสารสกัดจากเนื้อสัตว์สารสกัดจากยีสต์และกลูโคสเป็นสารอาหารที่ให้แหล่งคาร์บอนไนโตรเจนวิตามินและแร่ธาตุที่จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย นอกจากนี้กลูโคสยังเป็นแหล่งพลังงานสากลที่ใช้ในอาหารเลี้ยงเชื้อส่วนใหญ่
ในทางกลับกันเพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตของแบคทีเรียกรดแลคติกจำเป็นต้องมีโคแฟกเตอร์ (ไอออนบวก) ที่จำเป็นในการเผาผลาญของแลคโตบาซิลลัสและแบคทีเรียที่เกี่ยวข้อง สารประกอบเหล่านี้ ได้แก่ เกลือโซเดียมแมกนีเซียมและแมงกานีส
ในทำนองเดียวกันซอร์บิแทนโมโนลีตหรือโพลีซอร์เบต 80 เป็นแหล่งกรดไขมันที่สำคัญเนื่องจากถูกดูดซึมเป็นสารอาหาร
นอกจากนี้ซอร์บิแทนโมโนลีตและแอมโมเนียมซิเตรตยังออกฤทธิ์โดยการยับยั้งการพัฒนาของพืชที่มาพร้อมกันโดยเฉพาะแบคทีเรียแกรมลบซึ่งเป็นตัวเลือกของวุ้นนี้
ในที่สุดวุ้น - วุ้นคือสิ่งที่ให้ความสม่ำเสมอของของแข็งกับตัวกลาง
ยังมีวุ้นอื่น ๆ ของ Man Rogosa Sharpe agar; หนึ่งในนั้นเสริมด้วย cysteine (MRSc) ซึ่งมีประโยชน์อย่างมากสำหรับการแยก bifidobacteria และจุลินทรีย์อื่น ๆ ในทางกลับกันมีสาร MRS ที่เสริมด้วยนีโอมัยซินพาราโมไมซินกรดนาลิดิซิคและลิเทียมคลอไรด์พิเศษสำหรับการเลือกจำนวนบิฟิโดแบคทีเรียในผลิตภัณฑ์นม
การจัดเตรียม
ชั่งของกลางที่ขาดน้ำ 68.25 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ปล่อยให้ยืนเป็นเวลา 5 นาที ในการละลายอย่างสมบูรณ์ให้เปลี่ยนเป็นแหล่งความร้อนกวนบ่อยๆและต้มประมาณ 1 ถึง 2 นาที ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
เมื่อออกจากหม้อนึ่งให้ทิ้งไว้สักครู่แล้วแจกจ่ายในขณะที่ยังร้อนอยู่ในจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อ
อนุญาตให้แข็งตัวและกลับด้านจานสั่งซื้อในชั้นวางจานและแช่เย็นจนกว่าจะใช้ ปล่อยให้แผ่นอุ่นถึงอุณหภูมิห้องก่อนใช้
pH ของตัวกลางควรเป็น 6.4 ± 0.2 อาคารพาณิชย์บางแห่งแนะนำให้ pH อยู่ระหว่าง 5.5 ถึง 5.9
ตัวกลางที่ขาดน้ำจะมีสีเบจและเตรียมไว้คืออำพันเข้ม
ทั้งอาหารที่ขาดน้ำและจานที่เตรียมไว้ควรเก็บไว้ที่ 2-8 ° C
การประยุกต์ใช้งาน
แผ่นวุ้น MRS สามารถเป็นเมล็ดแบบพื้นผิว (อ่อนเพลียหรือไม้พาย Drigalski) นอกจากนี้ยังสามารถหว่านโดยความลึก แผ่นเพลตควรได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ใน microaerophilicity (4% O 2และ 5-10% CO 2 ) เป็นเวลา 24 ถึง 72 ชั่วโมง
วิธีการหว่านจะถูกเลือกตามวัตถุประสงค์ที่แสวงหา (การแยกหรือการนับจำนวน)
ลักษณะของอาณานิคม
อาณานิคมของแลคโตบาซิลลัสโดยสันนิษฐานจะมีสีขาวและมีลักษณะเป็นเมือกหรือครีมบนวุ้นนี้ พวกเขาจะต้องได้รับการระบุในภายหลัง
การแยกแบคทีเรียกรดแลคติก
สำหรับสิ่งนี้จะใช้การเพาะพื้นผิว ตัวอย่างที่จะหว่านต้องมีขั้นตอนก่อนหน้านี้
ในกรณีของตัวอย่างนมแนะนำให้หมุนเหวี่ยงตัวอย่าง 1 มิลลิลิตรที่ 14,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อขจัดชั้นไขมัน 900 µl จะถูกทิ้งและในอีก 100 µl ที่เหลือตะกอนจะถูกแขวนไว้และเทลงบนพื้นผิวของ MRS agar จากนั้นควรกระจายอย่างสม่ำเสมอด้วยไม้พาย Drigalski
ในกรณีของตัวอย่างอุจจาระจะมีการชั่งน้ำหนักอุจจาระหนึ่ง (1) กรัมและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในน้ำเปปโตนที่ปราศจากเชื้อ 0.1% 9 มล. ซึ่งสอดคล้องกับการเจือจาง 1/10 จากนั้นเจือจางอนุกรมจะทำจนกว่าจะมีการเจือจางสุดท้าย 10 -4 จะได้รับ
สุดท้าย 100 ไมโครลิตร 10 -2 10 -3และ 10 -4เจือจางจะถูกนำและแต่ละเจือจางเป็นเมล็ดที่บน MRS agar กระจายอย่างเท่าเทียมกันด้วยพาย Drigalski
จำนวนแบคทีเรียที่เป็นกรดแลคติก
ในกรณีนี้การหว่านจะทำโดยความลึก
สำหรับตัวอย่างนมแม่ให้นำ 1 มล. ไปบรรจุในหลอดพลาสติกทรงกรวยที่ปราศจากเชื้อ เพิ่มวุ้น MRS ที่อุณหภูมิโดยประมาณ 40 ° C ถึงปริมาตรสุดท้าย 25 มล. เพื่อให้ได้ส่วนผสมที่เป็นเนื้อเดียวกัน ต่อจากนั้นเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อในลักษณะที่สม่ำเสมอและปล่อยให้ยืนได้จนกว่าจะเกิดโพลิเมอไรเซชัน
สำหรับตัวอย่างอุจจาระจะทำการเจือจางตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ใช้เวลา 1 มล. ของการเจือจางแต่ละครั้งแล้ววางลงในหลอดพลาสติกทรงกรวยที่ปราศจากเชื้อ วุ้น MRS หลอมเหลวจะถูกเพิ่มเข้าไปในปริมาตร 25 มล.
ส่วนผสมของการเจือจางแต่ละครั้งเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ ในที่สุดก็พักไว้จนกว่าจะเกิดโพลิเมอไรเซชัน
อาณานิคมไว้วางใจในวุ้น Man Rogosa และ Sharpe (MRS) ที่มา: รูปภาพบริจาคสำหรับบทความนี้ ผู้เขียน: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. ภาพถ่ายที่ถ่ายในระหว่างการวิจัยเรื่อง: การประเมินแบคทีเรียกรดแลคติกและ Bifidobacteria ที่มีศักยภาพโปรไบโอติกในน้ำนมแม่และอุจจาระของทารก
ระดับการวิจัย
ทุกวันการศึกษาแบคทีเรียกรดแลคติกได้รับความสนใจมากขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งนักวิจัยพยายามที่จะเรียนรู้เกี่ยวกับสายพันธุ์ใหม่และศักยภาพของพวกมันในการหมักเริ่มต้นสำหรับการสร้างมาตรฐานในการผลิตผลิตภัณฑ์นมและการใช้งานอื่น ๆ
ในแง่นี้ Alvarado et al. (2007) ใช้ MRS agar เพื่อทำการศึกษาซึ่งแยกระบุและจำแนกแบคทีเรียกรดแลคติกที่มีอยู่ในชีสรมควัน Andean ของเวเนซุเอลา
ในชีสพวกเขาพบว่ามีแบคทีเรียของสกุล Lactococcus และ Lactobacillus และสรุปได้ว่าส่วนผสมของสายพันธุ์ที่แยกได้เหมาะสมเป็นสายพันธุ์เริ่มต้นในการผลิตชีสจากนมพาสเจอร์ไรส์
ในทางกลับกันSánchez et al. (2017) ใช้ MRS agar เพื่อตรวจสอบการมีอยู่ของแบคทีเรียกรดแลคติกในระบบทางเดินอาหารของลูกสุกรเพื่อใช้เป็นโปรไบโอติกดั้งเดิมที่เพิ่มผลผลิตของลูกสุกรที่มีสุขภาพดี
ด้วยสื่อนี้พวกเขาสามารถแยกสิ่งมีชีวิตได้ 4 ชนิด ได้แก่ Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae และ Pediococcus pentosaceus
เช่นเดียวกันBáez et al. (2019) ใช้ MRS agar เพื่อประเมินแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) และ bifidobacteria ที่มีศักยภาพโปรไบโอติกในน้ำนมแม่และอุจจาระของทารก
พวกเขาสามารถแยก 11 BAL และ 3 Bifidobacteria sp ในนมแม่และ 8 BAL และ 2 Bifidobacteria sp ในอุจจาระ ทั้งหมดพบพารามิเตอร์บางอย่างที่พิสูจน์ได้ว่าเป็นแบคทีเรียที่มีกิจกรรมโปรไบโอติก
ผู้เขียนสรุปได้ว่าทั้งนมแม่และอุจจาระจากทารกที่กินนมแม่เพียงอย่างเดียวเป็นแหล่งของแบคทีเรียโปรไบโอติกตามธรรมชาติ
ระบบประกันคุณภาพ
ในการประเมินคุณภาพของวุ้น MRS ให้ควบคุมสายพันธุ์เช่น:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escillichia coli และ Bacilli
ผลที่คาดว่าจะได้รับคือการเจริญเติบโตที่น่าพอใจสำหรับแบคทีเรีย 6 ตัวแรกในขณะที่ E. coli และ Bacillus cereus ต้องได้รับการยับยั้งอย่างสมบูรณ์
อ้างอิง
- Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. การแยกการระบุและลักษณะของแบคทีเรียกรดแลคติกจากชีส Andean Artisan รมควันเวเนซุเอลา ใช้เป็นวัฒนธรรมเริ่มต้น ประสิทธิภาพ (มาราไกโบ) 2550; 17 (3): 301-308. มีจำหน่ายที่: scielo.org
- Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro การแยกแบคทีเรียกรดแลคติกออกจากทางเดินอาหารของลูกสุกร Rev. สืบสวน สัตว์แพทย์ เปรู 2017; 28 (3): 730-736. มีจำหน่ายที่: scielo.org
- Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. การประเมินแบคทีเรียกรดแลคติกและ Bifidobacteria ที่มีศักยภาพโปรไบโอติกในน้ำนมแม่และอุจจาระของทารกในเขตเทศบาล Acevedo, Miranda 2017 ผลงานระดับปริญญาตรีเพื่อรับวุฒิปริญญาตรีใน Bioanalysis มหาวิทยาลัย Carabobo เวเนซุเอลา
- ห้องปฏิบัติการ Britannia MRS วุ้น 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia MRS วุ้น Wikipedia สารานุกรมเสรี 10 มกราคม 2018, 19:44 UTC มีให้ที่: wikipedia.org เข้าถึง 17 กุมภาพันธ์ 2019
- Roy D. สื่อสำหรับการแยกและการแจกแจงของ bifidobacteria ในผลิตภัณฑ์นม Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.