วุ้นช็อกโกแลต: พื้นฐานการใช้และการเตรียม - ชีววิทยา

วุ้นช็อคโกแลตเป็นสื่อวัฒนธรรมที่เป็นของแข็งอุดม, ไม่ใช่ - เลือกและไม่ใช่ - ค่า ส่วนใหญ่ใช้สำหรับการแยกจุลินทรีย์ที่ต้องการจากมุมมองทางโภชนาการแม้ว่าแบคทีเรียทุกชนิดสามารถเจริญเติบโตได้

ด้วยเหตุนี้ประโยชน์ของมันจึงเพิ่มขึ้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งในการเพาะตัวอย่างที่ปราศจากเชื้อตามปกติเช่นน้ำไขสันหลังและของเหลวร่วม แม้ว่ามันจะรวมอยู่ในวิธีการที่เลือกไว้สำหรับการหว่านตัวอย่างโพลีจุลชีพ แต่ในกรณีเหล่านี้จำเป็นต้องเพิ่มยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งพืชที่อยู่ร่วมกัน

วุ้นช็อกโกแลตที่มีการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย

สื่อนี้มีลักษณะสีน้ำตาลคล้ายกับช็อกโกแลตมากจึงมีชื่อ การเตรียมคล้ายกับวุ้นในเลือดเฉพาะในกรณีนี้ต้องอุ่นเลือดเพื่อให้เม็ดเลือดแดงแตกตัว

การเตรียมเช่นเดียวกับวุ้นเลือดมีความละเอียดอ่อนมากเนื่องจากมีการปนเปื้อนได้ง่าย ด้วยเหตุนี้ห้องปฏิบัติการหลายแห่งจึงต้องการซื้อสื่อนี้ซึ่งจัดทำโดย บริษัท การค้าที่รับประกันคุณภาพอยู่แล้ว

รากฐาน

สารนี้ประกอบด้วยฐานวุ้นที่อุดมด้วยสารอาหารและเลือดอุ่น การแตกของเม็ดเลือดแดงให้ปัจจัย X (hemin) และ factor V (NAD) ซึ่งจำเป็นต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิดเช่น Haemophilus สกุล นอกจากนี้ยังมีประโยชน์มากสำหรับการแยก Neisserias sp.

เช่นเดียวกับวุ้นเลือดสามารถใช้สื่อต่าง ๆ เป็นวุ้นพื้นฐานได้ขึ้นอยู่กับความต้องการ ในบรรดาสื่อที่ใช้ ได้แก่ การให้ยาฉีดเข้าหัวใจและวุ้นถั่วเหลืองทริปซิเคสแม้ว่าสิ่งที่แนะนำมากที่สุดคือวุ้นโคลัมเบีย, Müeller Hinton, GC agar และ Thayer Martin agar

วุ้นช็อคโกแลตบางรูปแบบรวมถึงอาหารเสริมที่มีจำหน่ายในท้องตลาดที่เรียกว่า Isovitalex หรือ Polivitex

อาหารเสริมเหล่านี้ประกอบด้วยวิตามิน B ₁₂ , L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoic acid, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), thiamine pyrophosphate, ferric nitrate, thiamine hydrochloride, cysteine hydrochloride, L-cystine และ glucose

สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าวุ้นช็อคโกแลตอุดมไปด้วยมากกว่าวุ้นในเลือด แต่ไม่อนุญาตให้สังเกตรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดง

การประยุกต์ใช้งาน

ที่มา: pixnio.com. ผู้แต่ง:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

วุ้นช็อกโกแลตที่เตรียมด้วยวุ้นโคลัมเบีย

สารนี้ประกอบด้วยการย่อยเคซีนและหัวใจในตับอ่อนการย่อยเนื้อสัตว์โซเดียมคลอไรด์วุ้นสารสกัดจากยีสต์และแป้งข้าวโพด นอกจากนี้ยังอุดมไปด้วยวิตามินแร่ธาตุและกรดอะมิโนที่จำเป็น

ฐานเลือดที่อุ่นนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกแบคทีเรียในสกุล Neisseria ในทางกลับกันหากมีการเพิ่มอาหารเสริมสำหรับ Brucella ลงในอาหารเสริมสามารถแยกจุลินทรีย์ที่กล่าวถึงได้ ผลลัพธ์จะดีขึ้นโดยใช้เลือดม้า

วุ้นช็อกโกแลตที่เตรียมด้วยวุ้นฐาน GC (สำหรับ gonococci)

สารนี้ประกอบด้วยเปปโตนแป้งข้าวโพดโมโนบาซิกและไดบาซิคบัฟเฟอร์โซเดียมคลอไรด์และวุ้น

การนำเสนอวุ้นช็อคโกแลตที่เตรียมในเชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่มาพร้อมกับฐานนี้และไม่มีเลือดอุ่น แต่เป็นส่วนผสมสังเคราะห์ของเฮมินและอาหารเสริมทางเคมีของปัจจัยการเจริญเติบโตวิตามินแร่ธาตุกรดอะมิโนแฟกเตอร์ V และกลูโคส

วุ้นช็อกโกแลตที่เตรียมด้วยวุ้นMüeller Hinton

ใช้เพื่อทดสอบความไวต่อยาต้านจุลชีพของจุลินทรีย์จุกจิกเช่น Streptococcus pneumoniae โดยใช้เลือดแกะที่อุ่น 5%

นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการแยกขั้นต้นของ Neisserias และ Haemophilus แต่ในกรณีเฉพาะของการแยก Haemophilus ควรใช้เลือดม้าเนื่องจากเป็นแหล่งที่มาของปัจจัย X และ V.

ในทางกลับกันถ้าตัวอย่างที่จะหว่านมาจากพื้นที่ที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อขอแนะนำให้เพิ่มยาปฏิชีวนะเพื่อยับยั้งพืชปกติของพื้นที่

ตัวอย่างสำหรับตัวอย่างระบบทางเดินหายใจที่สงสัยว่ามีแบคทีเรียในสกุล Haemophilus bacitracin ใช้เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของ Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus และ saprophytic Neisserias

ในกรณีของตัวอย่างแผลที่อวัยวะเพศที่สงสัยว่า Haemophilus ducreyi มีการใช้วุ้นช็อคโกแลตที่เตรียมดังต่อไปนี้สำเร็จแล้ว: Müeller - Hinton agar ที่มีเลือดม้าช็อกโกแลต 5% การเพิ่มคุณค่าของ Isovitalex 1% และ 3 vancomycin µg / ml.

วุ้นช็อกโกแลตที่เตรียมด้วยวุ้น Thayer Martin

สื่อนี้มีความพิเศษสำหรับการแยกเชื้อ Neisseria gonorrhoeae ต้องมียาปฏิชีวนะเพื่อยับยั้งพืชที่มาพร้อมกับ เลือดของลูกแกะถูกนำมาใช้

การจัดเตรียม

คุณควรดูข้อบ่งชี้ในการเตรียมวุ้นพื้นฐานที่จะใช้ พบได้ที่ด้านหลังของภาชนะของตัวกลางที่ขาดน้ำ โดยทั่วไปจะอธิบายว่าคุณต้องชั่งน้ำหนักเท่าใดเพื่อเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อหนึ่งลิตร

ปริมาณที่ต้องการสามารถเตรียมได้ในห้องปฏิบัติการอาจมากกว่าหรือน้อยกว่าหนึ่งลิตร

การคำนวณ

กฎสามข้อใช้ในการคำนวณว่าจะต้องชั่งน้ำหนักเท่าใดเพื่อเตรียมปริมาตรที่ต้องการ ตัวอย่าง:

ถ้าสำหรับ 1 ลิตรจำเป็นต้องมีน้ำหนัก 40 กรัมและห้องปฏิบัติการต้องการ 800 มล. จะกล่าวว่า:

1,000 มล. ----------- 40 กรัม

800 มล. -----------– X

สูตรจะเป็นดังนี้:

X = 32 กรัม (ปริมาณที่ต้องชั่ง 800 มล.)

ชั่งน้ำหนักและละลาย

ปริมาณที่จำเป็นจะถูกชั่งน้ำหนักและวางไว้ในขวดพร้อมกับน้ำ

อุ่นด้วยไฟปานกลางและผสมเบา ๆ ด้วยการหมุนจนกว่าตัวกลางที่ขาดน้ำจะละลายหมดปล่อยให้เดือดเป็นเวลา 1 นาที

ฆ่าเชื้อ

ใส่ขวดลงในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 20 นาที

รวมเลือด

เมื่อออกจากหม้อนึ่งจะสามารถยืนได้จนกว่าอุณหภูมิของตัวกลางจะอยู่ที่ประมาณ 56 ถึง 70 ° C เพื่อวางเลือดและผสมจนตัวกลางเปลี่ยนเป็นสีน้ำตาล

หากคุณกำลังเพิ่มอาหารเสริมนี่เป็นเวลาที่ต้องทำ จากนั้นผสมและเสิร์ฟ 20 มล. ต่อจานเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากเชื้อ

ขั้นตอนทั้งหมดควรทำในเครื่องดูดควันแบบลามินาร์หรือรอบ ๆ เตา Bunsen

ปล่อยทิ้งไว้จนแข็งตัวและเก็บกลับด้านในตู้เย็น

อีกวิธีหนึ่งในการเตรียมช็อกโกแลตวุ้นโดยไม่ต้องใช้เลือด

สื่อกลางได้รับการเตรียมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นเฮโมโกลบินที่ได้รับในเชิงพาณิชย์จะละลายและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่ง

สารละลายทั้งสองได้รับอนุญาตให้เย็นถึง 50 ° C รวมเข้าด้วยกันและเพิ่มส่วนเสริม ผสมภายใต้สภาวะปลอดเชื้อแล้วเสิร์ฟในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ

ระบบประกันคุณภาพ

เป็นสิ่งสำคัญที่เลือดจะต้องอยู่ในอุณหภูมิที่ระบุเนื่องจากเป็นสิ่งที่ดีที่สุดในการทำให้เซลล์เม็ดเลือดแดงและในขณะเดียวกันก็รักษาปัจจัย V ซึ่งไวต่อความร้อน

ไม่ควรมีฟองอยู่ที่ผิวของวุ้น จากชุดละ 100 แผ่นควรนำแผ่นหนึ่งหรือสองแผ่นไปบ่มในเตาอบที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพื่อตรวจสอบความปลอดเชื้อ

เพื่อผลลัพธ์ที่ดีที่สุดควรใช้วุ้นช็อคโกแลตหลังจากเตรียมไม่นาน

ควรเก็บรักษาสายพันธุ์แบคทีเรียที่มีการควบคุมไว้ในห้องปฏิบัติการเพื่อประเมินประสิทธิภาพของอาหารสดสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์จุกจิกหลักที่มีความสำคัญทางคลินิก

อ้างอิง

García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). จุลชีววิทยาคลินิกในทางปฏิบัติ University of Cadiz รุ่นที่ 2. บริการสิ่งพิมพ์ UCA
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินาบรรณาธิการ Panamericana SA
Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. ความเป็นไปได้ในการใช้อาหารเลี้ยงเชื้อ GC-Biocen Agar ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238 มีจำหน่ายที่: scielo.sld
ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia วุ้นช็อกโกแลต Wikipedia สารานุกรมเสรี 17 ธันวาคม 2018, 19:54 น. UTC ดูได้ที่: en.wikipedia.org

วุ้นช็อกโกแลต: พื้นฐานการใช้และการเตรียม - ชีววิทยา - 2025