ลักษณะของ SAFRANIN การใช้เทคนิคความเป็นพิษ - เคมี - 2025

ซาฟรานินเป็นสีย้อมเมอริควิโนไซด์ซึ่งได้รับการตั้งชื่อตามโครงสร้างทางเคมีที่มีวงแหวนเบนเซนอยด์ 2 วงและวงแหวนควินัวด์ 2 วงซึ่งเป็นวงแหวนที่ให้สีแดง

เรียกอีกอย่างว่า dimethyl safranin หรือ basic red 2 ในรูปแบบสั้น ๆ เนื่องจากชื่อวิทยาศาสตร์คือ 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-phenyl-phenaziniumchloro dimethyl safranin และสูตรทางเคมีคือ C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

โครงสร้างทางเคมีของซาฟรานินระบุวงแหวนเบนเซนอยด์และควินัวด์ / สารละลายซาฟรานินในน้ำ ที่มา: NEUROtiker แก้ไขโดย MSc Marielsa Gil / LHcheM

มีตัวแปรที่เรียกว่า trimethyl-safranin แต่ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างสารทั้งสอง

Safranin เป็นสีย้อมสีเดียวและขึ้นอยู่กับลักษณะของสูตรทางเคมีเป็นสารที่มีประจุบวก ดังนั้นจึงมีความสัมพันธ์สำหรับโครงสร้างที่มีประจุลบ โครงสร้างเหล่านี้จะถูกย้อมเป็นสีแดง

คุณสมบัตินี้ช่วยให้สามารถนำไปใช้ในเทคนิคทางเนื้อเยื่อจำนวนมากเพื่อย้อมโครงสร้างเซลล์ต่างๆทั้งของสิ่งมีชีวิตยูคาริโอตและโปรคาริโอต

Safranin ใช้เป็นสีย้อมคอนทราสต์ในเทคนิคที่สำคัญและเป็นที่รู้จักกันดีสำหรับการใช้งานประจำในแบคทีเรียวิทยา เทคนิคเหล่านี้ ได้แก่ : คราบ Gram-Hucker, คราบ Schaeffer Fulton สำหรับสปอร์หรือการย้อมสีของแคปซูลแบคทีเรียเป็นต้น

ลักษณะเฉพาะ

สีของหญ้าฝรั่น (เครื่องเทศที่ได้จากตราของดอก Crocus sativus) เป็นแรงบันดาลใจในการตั้งชื่อสีย้อมนี้ จากคำว่าหญ้าฝรั่นเป็นชื่อของ safranin นี่เป็นเพราะความคล้ายคลึงกันอย่างมากระหว่างสีของหญ้าฝรั่นและสีที่สีย้อมนี้มีให้

Safranin มีให้ในรูปแบบผลึกหรือผงทั้งการนำเสนอที่ละลายได้ในน้ำ สีย้อมซาฟรานินไม่มีกลิ่น คราบโครงสร้างสีแดง โครงสร้างที่ดึงดูดสีย้อม safranin เรียกว่า safranophiles

โครงสร้าง safranin มีความซับซ้อนมันมีสองแหวน benzenoid ที่ปลายและในศูนย์ที่ตั้งอยู่สองแหวน quinoid ที่ N ⁺ไอออนพบ ศูนย์กลางของโครงสร้างคือระบบที่รับผิดชอบในการจัดหาสี เนื่องจากลักษณะดังกล่าวสีนี้จึงถูกจัดอยู่ในประเภท II

ใช้

Safranin ใช้สำหรับย้อมโครงสร้างต่างๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งไฮไลต์เซลล์ Kulchitsky ที่มีอยู่ในระบบทางเดินอาหารหรือที่เรียกว่าเซลล์ enterochromaffin

มีความสามารถในการย้อมสีจุลินทรีย์ที่อยู่ในวงศ์ Rickettsiaceae ในทำนองเดียวกันมันถูกใช้ในเทคนิคต่างๆเช่นวิธี Koster ซึ่งเป็นวิธีดัดแปลงที่ใช้ในการย้อมแบคทีเรียในสกุล Brucella

ในทางกลับกัน Safranin ใช้ในเทคนิคการย้อมสีสปอร์ของ Schaeffer Fulton และในการย้อมสี Gram-Hucker ทั้งสองเทคนิค safranin ทำงานเป็นสีย้อมที่ตัดกัน

ในตอนแรกสปอร์จะมีสีเขียวมาลาไคต์ส่วนโครงสร้างที่เหลือจะเป็นสีแดงโดยซาฟรานิน ประการที่สองแบคทีเรียแกรมลบจะสูญเสียสีของผลึกสีม่วงในขั้นตอนการเปลี่ยนสีดังนั้น Safranin จึงเป็นตัวที่ทำให้แบคทีเรียแกรมลบเป็นสีแดง

นอกจากนี้ Safranin ยังใช้ในแบคทีเรียวิทยาเพื่อเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ Brucella ด้วยการเจือจางของ safranin 1: 5000 สื่อนี้ทำหน้าที่แยกความแตกต่างของสายพันธุ์ Brucella suis จากสายพันธุ์อื่น ๆ Brucella melitensis และ Brucella abortus เติบโตบนอาหารชนิดนี้ แต่ B. suis ถูกยับยั้ง

ในภาคอุตสาหกรรมเกษตรมีการใช้ Safranin ที่ 2.25% และเจือจาง 1:10 เพื่อย้อมตัวอย่างลำต้นจากต้นอ้อย

พืชชนิดนี้มักได้รับผลกระทบจากแบคทีเรีย Leifsonia xyli subsp ไซลีซึ่งทำลายไซเลมของพืช ลำต้นที่ย้อมสีได้รับการประเมินเพื่อตรวจสอบการทำงานของท่อไซเลม

เทคนิคในด้านแบคทีเรียวิทยา

คราบCastañedaสำหรับการย้อมสี r

คราบเลือดหรือเนื้อเยื่อถูกวางไว้ในสารละลายบัฟเฟอร์ (ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.6) ปล่อยให้แห้งเองตามธรรมชาติแล้วปิดทับด้วยเมทิลีนบลูเป็นเวลา 3 นาทีแล้วขัดด้วยซาฟรานนิน Rickettsiae เป็นสีน้ำเงินตัดกับพื้นหลังสีแดง

Koster stain แก้ไขสำหรับ

มีการทำสเมียร์และลนไฟในไฟแช็กเพื่อยึด จากนั้นจึงปกคลุมด้วยส่วนผสมของซาฟรานินในน้ำอิ่มตัว 2 ส่วนกับสารละลาย KOH 1 mol / L 3 ส่วนเป็นเวลา 1 นาที ซักด้วยน้ำกลั่นและขัดด้วยคาร์โบลิกเมทิลีนบลู 1%

หากตัวอย่างมีแบคทีเรียในสกุล Brucella จะปรากฏเป็นสีส้มบนพื้นสีน้ำเงิน

การย้อมสีแคปซูลแบคทีเรีย

ส่วนผสมของสารแขวนลอยแบคทีเรียทำจากหมึกอินเดียและมีการเพิ่มซาฟรานิน ภายใต้กล้องจุลทรรศน์รัศมีสีแดงจะปรากฏขึ้นรอบ ๆ แคปซูลแบคทีเรียแต่ละอันโดยมีพื้นหลังสีดำ

การย้อมสีสปอร์

การแพร่กระจายทำด้วยการระงับแบคทีเรีย จากนั้นจะคงความร้อน ปกคลุมด้วยมาลาไคต์สีเขียว 5% เผาบ่อยครั้งจนมีการปล่อยไอระเหยออกมา ทำซ้ำขั้นตอนนี้เป็นเวลา 6-10 นาที สุดท้ายล้างด้วยน้ำและขัดด้วยซาฟรานิน 0.5% เป็นเวลา 30 วินาที บาซิลลีเปื้อนสีแดงและสปอร์สีเขียว

คราบ Gram-Hucker

สเมียร์ทำด้วยสารแขวนลอยแบคทีเรียและติดตั้งในความร้อน ปิดสไลด์ด้วยคริสตัลไวโอเลตเป็นเวลา 1 นาที จากนั้น lugol จะถูกวางไว้เป็นสารละลายที่มีมารยาทเป็นเวลา 1 นาที ต่อจากนั้นจะถูกฟอกด้วยแอลกอฮอล์อะซิโตนและสุดท้ายต่อต้านด้วยซาฟรานินเป็นเวลา 30 วินาที

แบคทีเรียแกรมบวกย้อมสีม่วงอมน้ำเงินและแบคทีเรียแกรมลบสีแดง

ห้องปฏิบัติการบางแห่งได้หยุดใช้เทคนิค Gram-Hucker เพื่อใช้เทคนิค Gram-Kopeloff ที่ปรับเปลี่ยนแล้ว ในตอนหลัง safranin จะถูกแทนที่ด้วย fuchsin พื้นฐาน นี่เป็นเพราะ safranin มีคราบของสายพันธุ์ Legionella, Campylobacter และ Brucella จำพวกที่อ่อนแอ

เทคนิคในพื้นที่ของเนื้อเยื่อวิทยา

การย้อมสีของเซลล์ Kulchitsky (enterochromaffins)

เนื้อเยื่อจากระบบทางเดินอาหารเปื้อนด้วยซิลเวอร์คลอไรด์ จากนั้นจะถูกกำจัดสีด้วยโซเดียมไธโอซัลเฟตและในที่สุดก็ต่อต้านซาฟรานิน

เซลล์ Kulchitsky มีความโดดเด่นด้วยการมีเม็ดสีน้ำตาลดำ

คราบข้อเสื่อม

เนื่องจากซาฟรานินมีประจุบวกจึงจับกับกลุ่มไกลโคซามิโนไกลแคนของคาร์บอกซิลและซัลเฟตได้เป็นอย่างดี สิ่งเหล่านี้เป็นส่วนหนึ่งของโปรตีโอไกลแคนที่ประกอบเป็นกระดูกอ่อนข้อ ในแง่นี้เมื่อย้อมสีด้วย safranin O จะสามารถระบุได้ว่ามีการสูญเสียกระดูกอ่อนหรือไม่

การสูญเสียเนื้อเยื่อกระดูกอ่อนสามารถวัดได้โดยใช้มาตราส่วน Mankin หรือเรียกอีกอย่างว่าระดับโรคข้อเข่าเสื่อม

มีคำอธิบายเทคนิคด้านล่าง: ส่วนของเนื้อเยื่อจะถูกแช่ในถาดด้วยสารละลายเหล็ก hematoxylin ของ Weigert จากนั้นจึงผ่านกรดแอลกอฮอล์และล้างด้วยน้ำ

ดำเนินขั้นตอนการทำสีต่อไปโดยการจุ่มแผ่นลงในสีเขียวอย่างรวดเร็วล้างด้วยกรดอะซิติกและตอนนี้จะถูกแช่ใน safranin O. ในการเสร็จสิ้นกระบวนการจะถูกทำให้แห้งโดยใช้แอลกอฮอล์ที่ความเข้มข้นต่างกันตามลำดับจากน้อยไปมาก ขั้นตอนสุดท้ายต้องใช้ไซลีนหรือไซลีนเพื่อให้ตัวอย่างชี้แจง

สไลด์ถูกปรับสภาพด้วยยาหม่องแคนาดาหรือคล้ายกับที่สังเกตได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์

ด้วยเทคนิคนี้นิวเคลียสจะย้อมสีดำกระดูกเป็นสีเขียวและกระดูกอ่อนที่พบโปรตีโอไกลแคนเป็นสีแดง

คราบสำหรับการระบุสาหร่ายมาโคร

Pérez et al ในปี 2546 ได้เสนอเทคนิคที่ง่ายและราคาไม่แพงในการย้อมสาหร่ายมาโคร ตัวอย่างถูกเตรียมในส่วนของเนื้อเยื่อพาราฟิน ส่วนต่างๆได้รับการแก้ไขด้วยกลีเซอรีน 1% ปล่อยให้แห้งสนิท จากนั้นใส่ไซลอลเพื่อขจัดพาราฟิน

ส่วนนี้จะถูกทำให้แห้งโดยส่งผ่านถาดที่มีเอทานอลในระดับความเข้มข้นต่างกัน (ลำดับจากมากไปหาน้อย) เป็นเวลา 2 นาทีในแต่ละถาด

หลังจากนั้นจะย้อมสีเป็นเวลา 5 นาทีโดยผสม 3: 1 ของซาฟรานิน 1% กับโทลูอิดีนบลู 1% ทั้งสองเตรียมด้วยเอทานอล 50% เติมกรดพิกริกสามหยดลงในส่วนผสมซึ่งทำหน้าที่เป็นสารผสมเทียม

จากนั้นจะคายน้ำโดยผ่านถาดแอลกอฮอล์อีกครั้ง แต่คราวนี้เป็นวิธีที่เพิ่มขึ้น ในที่สุดก็ล้างด้วยไซลอลและเตรียมตัวอย่างด้วยยาหม่องแคนาดาเพื่อสังเกต

ความเป็นพิษ

โชคดีที่ Safranin เป็นสีย้อมที่ไม่ได้แสดงถึงอันตรายสำหรับผู้ที่จัดการกับมัน เป็นสีที่ไม่เป็นอันตรายไม่เป็นสารก่อมะเร็งและไม่ติดไฟ

การสัมผัสโดยตรงกับผิวหนังหรือเยื่อบุอาจทำให้เกิดรอยแดงเล็กน้อยในบริเวณนั้นโดยไม่มีภาวะแทรกซ้อนที่สำคัญ สำหรับสิ่งนี้ขอแนะนำให้ล้างบริเวณที่ได้รับผลกระทบด้วยน้ำปริมาณมาก

อ้างอิง

1. García H. Colorante safranina O. ช่างสุขภาพ, 2555; 1 (2): 83-85. มีจำหน่ายที่: medigraphic.com
2. Gil M. Gram stain: รองพื้นวัสดุเทคนิคและการใช้งาน 2019 มีจำหน่ายที่: lifeder.com
3. การย้อมสี Gil M. Spore: เหตุผลเทคนิคและการใช้งาน 2019 มีจำหน่ายที่: lifeder.com
4. Safranina” Wikipedia สารานุกรมเสรี 7 มี.ค. 2560 10:39 UTC. 3 ส.ค. 2019, 20:49 น. th.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. เทคนิคการย้อมสีที่มีประโยชน์ในการตีความทางกายวิภาคของ Gracilariopsis tenuifrons และ Gracilaria chilensis (Rhodophyta) พระราชบัญญัติบอท. เวเนซ. พ.ศ. 2546; 26 (2): 237-244. มีจำหน่ายที่: scielo.org
6. โบสถ์ Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu ความสัมพันธ์ของการทำงานของเรือ xylem และการปรากฏตัวของ Leifsonia xyli subsp ไซลี Rev. Veg Protection 2007 22 (1): 65-65. มีจำหน่ายที่: scielo.sld