- รากฐาน
- กระบวนการ
- - ปฏิกิริยา Xanthoprotein สำหรับการตรวจหากรดอะมิโนที่มีหมู่อะโรมาติก
- - ปฏิกิริยา Xanthoprotein เพื่อตรวจหาสารฟีนอลิกและอินโดลในเลือด
- เครื่องชั่งการตีความ
- ใช้
- ข้อควรระวัง
- อ้างอิง
ปฏิกิริยา xanthoproteinเป็นขั้นตอนทางเคมีที่ใช้ในการตรวจสอบการมีหรือไม่มีกรดอะมิโนที่มีกลิ่นหอมเช่นซายน์และโพรไบโอซึ่งอาจจะเป็นในรูปแบบฟรีหรือเป็นการโปรตีนที่ละลายน้ำได้เปปไทด์หรือ polypeptides
นอกจากนี้ยังใช้ในการตรวจหาสารพิษในเลือดที่มีกลุ่มเบนซินในโครงสร้าง การทดสอบนี้เรียกอีกอย่างว่าปฏิกิริยา xanthoprotein Becher
ปฏิกิริยา xanthoprotein ที่เป็นบวกที่มา: นำมาจากวิดีโอ: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo
ปฏิกิริยา xanthoprotein ใช้กรดไนตริกเข้มข้นความร้อนและด่างที่ทำให้เป็นกลาง หากสารละลายเปลี่ยนจากสีเหลืองเป็นสีส้มหลังจากทำให้ปฏิกิริยาเป็นกลางการทดสอบจะถือว่าเป็นบวก สีที่สังเกตได้เกิดจากการก่อตัวของสารประกอบไนโตรเจนที่ได้จากการไนตริฟิเคชันของกลุ่มเบนซิน
หากต้องการหาปริมาณโปรตีนทั้งหมดจำเป็นต้องใช้วิธีการกำหนดโปรตีนอื่น ๆ เช่นบิยูเร็ต
ปฏิกิริยา xanthoprotein ส่วนใหญ่จะใช้เมื่อทำการวิเคราะห์สารที่ไม่ทราบองค์ประกอบทางเคมี ปฏิกิริยานี้มักเป็นส่วนหนึ่งของชุดการทดสอบที่จะช่วยตรวจสอบองค์ประกอบทางเคมีของสารหรือสารสกัดเฉพาะ นั่นคือเหตุผลที่นักวิจัยใช้กันอย่างแพร่หลาย
ในทางกลับกันปฏิกิริยา Becher xanthoprotein ใช้ในการตรวจหาสารฟีนอลิกและอินโดลในเลือดทำให้สามารถทำนายลักษณะของโรคไตได้ก่อนที่พารามิเตอร์อื่น ๆ จะเพิ่มขึ้นในภายหลัง
รากฐาน
ปฏิกิริยาโดยทั่วไปจะตรวจจับการมีอยู่ของกลุ่มเบนซีนทั้งในกรดอะมิโนเช่นเดียวกับในโปรตีนและเปปไทด์ กรดไนตริกทำหน้าที่บนวงแหวนเบนซีนของกรดอะมิโนที่มีอยู่ทำให้เกิดสารประกอบฟีนอลิกไนโตร
ปฏิกิริยาจะต้องใช้ความร้อนโดยทั่วไปจะเกิดการตกตะกอนที่เมฆตัวกลางทำให้เป็นน้ำนม การตกตะกอนอาจเป็นสีขาวหรือสีเหลือง ในที่สุดก็ต้องมีขั้นตอนการทำให้เป็นด่างที่เน้นสี สำหรับสิ่งนี้จะใช้ฐานเช่นโซเดียมไฮดรอกไซด์ 40% หรือแอมโมเนีย
ปฏิกิริยาจะถูกตีความเป็นบวกหากสังเกตเห็นสีเหลืองเข้มในระหว่างกระบวนการให้ความร้อนหรือสีส้มเข้มเมื่อปฏิกิริยาเป็นด่าง กรดอะมิโนที่ตรวจพบส่วนใหญ่ ได้แก่ ไทโรซีนและทริปโตเฟน
ปฏิกิริยา Xanthoprotein ที่มา: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html
ในกรณีของฟีนิลอะลานีนแม้ว่าจะเป็นกรดอะมิโนอะโรมาติก แต่นิวเคลียสของเบนซีนของกรดอะมิโนนี้ยากที่จะไนเตรตในปฏิกิริยาง่ายๆดังนั้นมันจะปล่อยปฏิกิริยาเชิงลบหรือเชิงบวกที่อ่อนแอออกมา
โดยทั่วไปการทดสอบ xanthoprotein สามารถเสริมด้วยการทดสอบ Hopkins-Cole ซึ่งใช้เพื่อระบุทริปโตเฟนโดยเฉพาะ หากการทดสอบ xanthoprotein เป็นผลบวกและการทดสอบ Hopkins-Cole เป็นลบการมีทริปโตเฟนในสารละลายนั้นจะถูกตัดออกโดยชี้ไปที่ไทโรซีนเป็นหลัก นอกจากนี้ยังสามารถเสริมด้วยปฏิกิริยามิลลอนสำหรับการตรวจจับไทโรซีนและอื่น ๆ อีกด้วย
ปฏิกิริยานี้สามารถใช้กับตัวอย่างเลือดพลาสม่าหรือซีรั่ม desalbuminated สำหรับการวินิจฉัยภาวะยูรีเมียหรือไตวาย ในกรณีนี้สิ่งที่ต้องการคือการตรวจหาสารพิษ (ฟีนอลิกและอินโดล) ที่ผลิตจากการเน่าเปื่อยของลำไส้
สารเหล่านี้มีกลุ่มเบนซีนดังนั้นจึงให้ปฏิกิริยาแซนโทโปรทีนเป็นบวกแม้ว่าสารที่ทำปฏิกิริยาจะไม่ใช่กรดอะมิโนหรือโปรตีนก็ตาม
กระบวนการ
- ปฏิกิริยา Xanthoprotein สำหรับการตรวจหากรดอะมิโนที่มีหมู่อะโรมาติก
ใส่ตัวอย่างทดสอบ 1 มล. ในหลอดทดลองที่แห้งและสะอาด
- เติมกรดไนตริกเข้มข้น 0.5 มล.
- แช่ส่วนผสมในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 70 ° C เป็นเวลา 2 นาที ก่อนหน้านี้เตรียมอ่างน้ำไว้ที่อุณหภูมิดังกล่าว
- เมื่อถอดท่อออกจากอ่างน้ำจะสังเกตได้ว่าสารละลายเปลี่ยนเป็นน้ำนมและมีสีขาวอมเหลือง
- สารละลายระบายความร้อนโดยหยดน้ำเย็นที่ฐานของท่อ
- การเตรียมทำอัลคาไลน์โดยค่อยๆเติมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 40% (หยดทีละหยด) จนกว่าจะมีการเปลี่ยนสี
- หากผลการทดสอบเป็นบวกวงแหวนสีส้มเข้มจะก่อตัวขึ้นที่ส่วนต่อประสานของของเหลว
- หากปฏิกิริยาเป็นลบจะไม่มีการสร้างสี
- ปฏิกิริยา Xanthoprotein เพื่อตรวจหาสารฟีนอลิกและอินโดลในเลือด
- จ่ายกรดไตรคลอโรอะซิติก 20% 5 ซีซีต่อเลือดดำพลาสม่าหรือซีรั่ม 5 ซีซีตามที่ระบุไว้มากที่สุด ผสมให้เข้ากันแล้วกรอง
- ใช้ฟิลเตรต 2 มล. ผสมกับกรดไนตริก 0.5 มล. จากนั้นนำไปอุ่นจนเดือดเพราะวางท่อไว้บนเปลวไฟที่เบากว่าเป็นเวลา 30 วินาที ระบายความร้อนด้วยน้ำและเติมโซเดียมคลอไรด์ 1.5 จาก 33%
ตีความได้ดังนี้:
- ผลลบ: สีเหลือง
- ผลบวก (+) สีเหลืองมะนาว
- (++) สีเหลืองทอง
- (+++) สีเหลืองเข้มถึงน้ำตาล
นอกจากนี้ยังสามารถตีความได้โดยใช้มาตรวัดสีแบบ Autenrieth อ้างอิงซึ่งประกอบด้วยโพแทสเซียมไดโครเมตความเข้มข้นต่างๆ เตรียมในการเจือจาง 10 ใน 10 จากสารละลายสต็อก 0.03874% แต่ละหลอดแสดงถึงเปอร์เซ็นต์
เครื่องชั่งการตีความ
มีการตีความสองระดับที่เรียกว่าโบราณและสมัยใหม่ ค่าปกติคือ:
โต๊ะเก่า: ระหว่าง 75 ถึง 85%
โต๊ะสมัยใหม่: ระหว่าง 15 ถึง 25%
หากสีของหลอดทดลองอยู่ตรงกลางของหลอดมาตรฐานสองหลอดค่าเฉลี่ยจะเกิดขึ้นระหว่างการวัดทั้งสอง
สารละลายมาตรฐานโพแทสเซียมไดโครเมตถูกเตรียมไว้ดังนี้: วัดปริมาณโพแทสเซียมไดโครเมต 10 นิวตันได้ 7.9 มล. และทำในขวดปริมาตรได้ถึง 100 มล. การเจือจางตามที่แสดงในตาราง Autenrieth colorimetric
Autenrieth ตาราง colorimetric ที่มา: ปฏิกิริยาVásquez A. Xanthoprotein วารสารคลินิกภาษาสเปน. พ.ศ. 2492; 35 (5): 326-327 มีจำหน่ายที่: Elsevier
ใช้
การใช้ปฏิกิริยา xanthoprotein เป็นส่วนหนึ่งของชุดการทดสอบทางชีวเคมีที่ช่วยให้ทราบองค์ประกอบทางเคมีของสารที่ไม่รู้จักบางชนิด การทดสอบนี้มีส่วนช่วยในการวิเคราะห์ทางเคมีเพื่อตรวจจับโปรตีนที่มีกลุ่มเบนซีนในโครงสร้าง
นักวิจัยนิยมใช้ปฏิกิริยานี้ในการศึกษาสารต่างๆที่น่าสนใจ
ในแง่นี้Vásquez-Jorge และผู้ทำงานร่วมกันใช้สิ่งนี้และปฏิกิริยาอื่น ๆ เพื่อตรวจสอบปริมาณโปรตีนของของเหลวที่สกัดจากหอยนางรมโกงกาง (Crassostrea rhizophorae)
ในทำนองเดียวกัน Rojas et al. (2009) ใช้ชุดการทดสอบรวมทั้งปฏิกิริยา xanthoprotein เพื่อวิเคราะห์ glycomacropeptides ใน ricotta whey ตกตะกอน
ในทางกลับกันปฏิกิริยา Becher xanthoprotein ถูกดัดแปลงโดย Volhard เพื่อใช้ในวัตถุประสงค์อื่น ในกรณีนี้สำหรับการตรวจหาสารฟีนอลิกและอินโดลที่สามารถเพิ่มขึ้นได้มากก่อนหน้านี้ (หลายสัปดาห์หรือหลายเดือน) ก่อนที่ระดับยูเรียและไนโตรเจนตกค้างในเลือดจะเพิ่มขึ้น
ของเสียที่เป็นพิษเหล่านี้เกิดขึ้นจากการเน่าเปื่อยของอาหารในลำไส้
สารเหล่านี้สะสมในเลือดเมื่อไม่ได้รับการกำจัดอย่างถูกต้องดังนั้นการทดสอบ xanthoprotein ในเชิงบวกสามารถทำนายการเริ่มมีอาการของไตวายในระยะเริ่มแรกที่เหมาะสมหรือภาวะของ uremia ได้
คุณสามารถกำหนดความสูงของสีได้ขึ้นอยู่กับความเข้มของสี ในกรณีนี้การทดสอบเป็นเชิงปริมาณ
ในคนที่มีสุขภาพแข็งแรงการทดสอบนี้จะให้สีเหลืองเล็กน้อยซึ่งสอดคล้องกับระดับปกติของทริปโตเฟนและไทโรซีนที่อาจอยู่ในเลือด
ในขณะที่ในผู้ป่วยไตปฏิกิริยาแซนโธโปรตีนจะเป็นบวกอย่างมากเนื่องจากมีสารต่อไปนี้: ฟีนอลอินโดลพาราครอสอะโรมาติกออกซีไซด์และอื่น ๆ
ข้อควรระวัง
การทดสอบนี้ต้องดำเนินการโดยผู้เชี่ยวชาญที่ผ่านการฝึกอบรม ต้องคำนึงถึงกฎระเบียบด้านความปลอดภัยทางชีวภาพทั้งหมดเนื่องจากรีเอเจนต์ที่ใช้เป็นกรดและเบสที่มีฤทธิ์กัดกร่อน
หากกรดไนตริกหยดลงบนผิวหนังหรือเล็บโดยไม่ได้ตั้งใจพวกมันจะกลายเป็นสีเหลืองเนื่องจากโครงสร้างทั้งสองประกอบด้วยโปรตีน นอกจากนี้บนผิวหนังและเยื่อเมือกยังทำให้เกิดแผลไหม้อย่างรุนแรง
หากเกิดการสัมผัสผิวหนังควรปฏิบัติตามระเบียบปฏิบัติคือล้างบริเวณนั้นทันทีด้วยสบู่และน้ำเป็นเวลาประมาณ 20 นาที
หากกระเด็นเข้าตาควรล้างด้วยน้ำสะอาดปริมาณมากพยายามให้ดวงตาเปิดอยู่
อ้างอิง
- "ปฏิกิริยา Xanthoprotein" Wikipedia สารานุกรมเสรี 2 ก.ย. 2019, 17:49 UTC. 21 ต.ค. 2019, 20:31 น. wikipedia.org/
- Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y การศึกษาคุณลักษณะทางเคมีกายภาพและปริมาณโปรตีนของสารสกัดของเหลวของหอยนางรมโกงกาง (Crassostrea rhizophorae) Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. มีจำหน่ายใน Redalyc
- Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. การแยกและประสิทธิภาพของ GMP โดยการตกตะกอนของเวย์ด้วยกรดไตรคลอโรอะซิติก Cient. (มาราไกโบ) 2552; 19 (3): 295-302. มีจำหน่ายที่: ve.scielo
- ปฏิกิริยาVásquez A. Xanthoprotein วารสารคลินิกภาษาสเปน. พ.ศ. 2492; 35 (5): 326-327 มีจำหน่ายที่: Elsevier
- Gálvez I, Gárate O. ปฏิกิริยาของ Becher และ Andrewes ในการผ่าตัดปัสสาวะ บริการระบบทางเดินปัสสาวะของโรงพยาบาลสเปน วารสารระบบทางเดินปัสสาวะของอาร์เจนตินา 395-404