MEDIO MIO: รองพื้นการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025

กลาง MIOคือการทดสอบทางชีวเคมีที่ใช้เพื่อช่วยในการระบุตัวตนของสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในครอบครัว Enterobacteriaceae มีคุณค่าทางโภชนาการมากและประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคสสารสกัดจากยีสต์เปปโตนไตรปไทน์แอล - ออร์นิทีนไฮโดรคลอไรด์โบรโมเครซอลสีม่วงและวุ้น

ความหมายของตัวย่อ (MIO) อธิบายพารามิเตอร์แต่ละตัวที่สามารถสังเกตได้ในสื่อนี้ การเคลื่อนที่อินโดลและออร์นิทีน การเคลื่อนที่คือความสามารถของจุลินทรีย์ในการเคลื่อนที่เนื่องจากมีแฟลกเจลลา เพื่อให้สามารถสังเกตคุณสมบัตินี้ได้ความสอดคล้องของตัวกลางจะต้องเป็นกึ่งแข็งดังนั้นการเตรียมจึงมีวุ้นน้อย

โครงร่างของการตีความผลลัพธ์ในสื่อ MIO ที่มา: จัดทำโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil

การผลิตอินโดลแสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของเอนไซม์ทริปโตฟาเนสที่ทำหน้าที่กับทริปโตเฟนของกรดอะมิโนทำให้จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ที่เปิดเผยเพื่อให้การผลิตอินโดลมองเห็นได้

ในที่สุด ornithine จะพิจารณาว่าแบคทีเรียสามารถ decarboxylate กรดอะมิโนได้หรือไม่นั่นคือถ้ามีเอนไซม์ orinithine decarboxylase

รากฐาน

เปปโตนสารสกัดจากยีสต์และไตรปไทน์

องค์ประกอบเหล่านี้นำไปสู่พลังทางโภชนาการของสื่อนี้ เป็นแหล่งของสารอาหารและกรดอะมิโนที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาแบคทีเรีย

นอกจากนี้ไตรปไทน์ยังเป็นแหล่งที่มาของทริปโตเฟนเพื่อแสดงการมีอยู่ของเอนไซม์ทริปโตฟาเนสซึ่งย่อยสลายทริปโตเฟนโดยการลดการปนเปื้อนโดยปล่อยอินโดลกรดไพรูวิกแอมโมเนียและพลังงาน

อินโดลไม่มีสีดังนั้นการปรากฏตัวของมันจึงถูกเปิดเผยโดยการเติมน้ำยาของ Ehrlich หรือ Kovacs ห้าหยดทั้งที่มี p-dimethylaminobenzaldehyde

กลุ่มอัลดีไฮด์ของสารประกอบนี้ทำปฏิกิริยากับอินโดลทำให้เกิดผลิตภัณฑ์สีแดงฟูเชียรูปวงแหวนบนพื้นผิวของวุ้น

ร่องรอยของสีใด ๆ ควรถือเป็นการทดสอบในเชิงบวก ควรอ่านหลักฐานทันทีเนื่องจากเมื่อเวลาผ่านไปสีจะลดลง

นอกจากนี้ควรเปิดเผยการทดสอบนี้หลังจากสังเกตเห็นผลการเคลื่อนที่และการสลายตัวของออร์นิทีนแล้ว

การตีความ

การทดสอบเชิงบวก:การก่อตัวของวงแหวนสีแดงบานเย็นเมื่อเติมน้ำยา Kovacs ลงไป

การทดสอบเชิงลบ:ไม่มีการสร้างวงแหวน

การเคลื่อนไหว

ความสามารถในการเคลื่อนที่ของแบคทีเรียจะปรากฏชัดเจนหากสังเกตเห็นตัวกลางที่มีเมฆมากหรือมีการเจริญเติบโตที่หนาขึ้นรอบ ๆ การฉีดวัคซีนครั้งแรก

การทดสอบการเคลื่อนไหวในทางลบจะพิสูจน์ได้จากการสังเกตเส้นบาง ๆ ของการเติบโตและทุกสิ่งรอบตัวจะไม่มีการเติบโต

สิ่งสำคัญคือต้องอ่านการเคลื่อนที่ก่อนที่อินโดลจะถูกเปิดเผยเนื่องจากการเพิ่มเมฆรีเอเจนต์ลงในตัวกลางทั้งหมด

ในแบคทีเรียที่เคลื่อนที่ได้ แต่เติบโตช้ามันยากที่จะแสดงให้เห็นถึงการเคลื่อนไหวของพวกมันด้วยสื่อนี้ ในกรณีนี้ขอแนะนำให้ใช้การทดสอบหรือวิธีการอื่น ๆ เช่นการเคลื่อนที่ปานกลางหรือวิธีรอการหล่น

กลูโคส

กลูโคสเป็นคาร์โบไฮเดรตที่สามารถหมักได้ซึ่งนอกเหนือจากการให้พลังงานแล้วยังทำให้สภาพแวดล้อมเป็นกรดซึ่งเป็นเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับการเกิด decarboxylation ของกรดอะมิโน ornithine

การหมักกลูโคสจะต้องเกิดขึ้นเสมอโดยเริ่มจากหลักการที่ว่าแบคทีเรียทั้งหมดในตระกูล Enterobacteriaceae หมักกลูโคส

L-Ornithine

ในกรณีที่แบคทีเรียสร้างเอนไซม์ ornithine decarboxylase สิ่งนี้อาจกระทำได้เมื่อตัวกลางถูกทำให้เป็นกรดโดยการหมักกลูโคส

เอนไซม์ ornithine decarboxylase ทำหน้าที่กับหมู่คาร์บอกซิลของกรดอะมิโนที่ผลิตเอมีนที่เรียกว่า putresine ซึ่งทำให้ตัวกลางเป็นด่างอีกครั้ง

การทดสอบนี้ควรอ่านหลังการฟักตัวเป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพราะหากคุณพยายามอ่านก่อนที่คุณจะสามารถตีความการทดสอบด้วยค่าลบเท็จได้

ควรจำไว้ว่าปฏิกิริยาแรกที่เกิดขึ้นคือการหมักกลูโคสดังนั้นตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองในระยะเริ่มต้น (10 ถึง 12 ชั่วโมงแรก) ถ้าเกิด ornithine decarboxylation ในภายหลังตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีม่วง

เป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องตีความการทดสอบ ornithine decarboxylation ก่อนที่จะเปิดเผยอินโดลเนื่องจากการเติมน้ำยาของ Kovacs จะเปลี่ยนสีของตัวกลาง

การตีความ

การทดสอบเชิงลบ:สื่อที่มีสีเหลืองหรือพื้นหลังสีเหลือง

การทดสอบในเชิงบวก:ปานกลางเป็นสีม่วง

ตัวบ่งชี้ PH

ในกรณีนี้ใช้ bromocresol purple ผู้รับผิดชอบในการเปิดเผยเมื่อมีการเปลี่ยนแปลง pH ในตัวกลาง เมื่อมีการทำให้เป็นกรดตัวบ่งชี้จะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองและเมื่อทำให้เป็นด่างจะเปลี่ยนเป็นสีม่วง

เทคนิคการเพาะเมล็ดและการพัฒนา

ในการหว่านสื่อ MIO จะใช้ห่วงตรงหรือเข็มและรวบรวมส่วนหนึ่งของอาณานิคมที่จะศึกษา

เจาะลึกตรงกลาง MIO เป็นเส้นตรง ไม่แนะนำให้ทำการเจาะสองครั้งเนื่องจากอาจให้ภาพการเคลื่อนไหวที่ผิดพลาดได้หากไม่ได้ทำการเจาะในที่เดียวกัน

ฟักตัวเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ° C ในแอโรบิค ดูผลลัพธ์ตามลำดับนี้: การเคลื่อนที่การสลายตัวของออร์นิทีนและในที่สุดก็เปิดเผยอินโดล

ขอแนะนำให้เอาตัวกลาง 2 มล. ออกโดยปลอดเชื้อส่งไปยังหลอดที่ปราศจากเชื้อและทำการทดสอบอินโดลที่นั่นเพื่อที่ว่าหากเป็นลบหลอดเดิมที่เหลือสามารถบ่มต่อไปได้อีก 24 ชั่วโมงเพื่อเผยอินโดลอีกครั้ง

การพัฒนาอินโดลมีดังต่อไปนี้: เติมน้ำยาของ Kovacs 3 ถึง 5 หยดลงในสื่อ MIO และกวนอย่างแรง เป็นที่สังเกตว่ามีวงแหวนสีแดงบานเย็นปรากฏขึ้นหรือไม่

การจัดเตรียม

MIO ปานกลาง

ชั่งน้ำหนักตัวกลาง MIO 31 กรัมและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร

ตั้งไฟจนส่วนผสมเดือดเป็นเวลา 1 นาทีเขย่าบ่อยๆจนวุ้นละลายหมด กระจายของกลาง 4 มล. ลงในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาฝ้าย

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที นำออกจากหม้อนึ่งและปล่อยให้ยืนตรงในชั้นวางในลักษณะที่ก่อให้เกิดบล็อกกึ่งทึบ

เก็บในตู้เย็น 2-8 ° C ปล่อยให้มันอุ่นขึ้นก่อนที่จะหว่านเชื้อแบคทีเรีย

สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจและสีของตัวกลางที่เตรียมไว้เป็นสีม่วงเหลือบเล็กน้อย

pH สุดท้ายของตัวกลางที่เตรียมไว้คือ 6.5 ± 0.2

ตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองที่ pH เป็นกรดและเป็นสีม่วงที่ pH อัลคาไลน์

Kovacs Reagent (ผู้พัฒนาอินโดลทดสอบ)

น้ำยานี้จัดทำดังนี้:

วัดปริมาณอะมิลไอโซอะมิลหรือบิวทิลแอลกอฮอล์ 150 มล. (อย่างใดอย่างหนึ่งในสาม) p-dimethylaminobenzaldehyde 10 กรัมจะถูกละลายในนั้น จากนั้นเติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 50 มล.

น้ำยาที่เตรียมไว้ไม่มีสีหรือเหลืองอ่อน ควรเก็บไว้ในขวดสีเหลืองอำพันและเก็บไว้ในตู้เย็น สีน้ำตาลเข้มแสดงถึงการเสื่อมสภาพ

นอกจากนี้น้ำยา Kovacs ยังสามารถใช้แทนน้ำยา Ehrlich ได้อีกด้วย อย่างหลังนี้มีความอ่อนไหวมากกว่าควรเปิดเผยอินโดลในแบคทีเรียที่ผลิตได้ในปริมาณนาทีเช่นในแท่งแกรมลบที่ไม่ผ่านการหมักและแบบไม่ใช้ออกซิเจนบางชนิด

ใช้

สื่อนี้เป็นการทดสอบที่เติมเต็มแบตเตอรี่ของการทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการระบุแบคทีเรียที่อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae

ข้อมูล decarboxylation ornithine ทำหน้าที่แยกความแตกต่างของ Shigella sonnei ซึ่งทดสอบในเชิงบวกจาก Shigella boydii, Shigella flexneri และ S. dysenterieae ซึ่งทดสอบเป็นลบ

นอกจากนี้ยังแยกความแตกต่างของสกุล Klebsiella ซึ่งทดสอบในเชิงลบจากสกุล Enterobacter ซึ่งสายพันธุ์ส่วนใหญ่ทดสอบในเชิงบวก

ที่มา: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina

ระบบประกันคุณภาพ

ทุกครั้งที่มีการเตรียมสื่อ MIO ชุดหนึ่งสามารถทำการทดสอบการควบคุมได้ สำหรับสิ่งนี้จะใช้สายพันธุ์ที่รู้จักหรือได้รับการรับรองเพื่อสังเกตพฤติกรรมของตัวกลาง

สายพันธุ์ที่สามารถใช้ได้คือ Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes และ Proteus mirabilis

ผลที่คาดว่าจะได้รับคือ E. coli และ M. morganii Dan M: +, I: + และ O: +

Klebsiella pneumoniae เป็นลบทั้งหมด (M: -, I: -, O :-) Proteus mirabilis และ Enterobacter aerogenes ให้ M: + I: - และ O: +

อ้างอิง

1. Mac Faddin J. (2003). การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก 3rd ed. กองบรรณาธิการ Panamericana บัวโนสไอเรส. อาร์เจนตินา.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
4. Britannia Laboratories MIO Medio 2015 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Motility Indole Ornithine (MIO) ปานกลาง 2550. มีจำหน่ายที่: bd.com
6. ห้องปฏิบัติการ Valtek การเคลื่อนไหว MIO ปานกลางอินโดลออร์นิทีน 2010 มีจำหน่ายที่: andinamedica.com