XLD AGAR: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

วุ้น XLDหรือไซโลสไลซีน desoxycholate วุ้นกลางคือการคัดเลือกและวัฒนธรรมที่เป็นของแข็งแตกต่างกันสำหรับการแยก enteropathogens เทย์เลอร์ออกแบบสูตร XL agar (Xylose, Lysine) เพื่อปรับปรุงการแยกเชื้อ Shigella สกุล

เขาสังเกตว่าสกุลนี้ถูกยับยั้งในสื่อส่วนใหญ่ที่มีไว้สำหรับการแยกเชื้อเอนเทอโรพาโทเคน ต่อจากนั้นโซเดียมดีออกซีโคเลตโซเดียมไธโอซัลเฟตและเฟอริคแอมโมเนียมซิเตรตถูกเพิ่มเข้าไปเพื่อเพิ่มความสามารถในการเลือก สูตรนี้ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประโยชน์ทั้งในการแยกเชื้อ Shigella และ Salmonella

ความแตกต่างของโคโลนีของ Shigella, Salmonella และ Coliforms ใน XLD agar ก. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. ที่มา: A. โดย: CDC / Amanda Moore, MT; ทอดด์ปาร์คเกอร์ปริญญาเอก; Audra Marsh ได้รับความอนุเคราะห์จาก Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. By: CDC / Dr. เกษตรกร JJ มารยาท: ห้องสมุดภาพสาธารณสุข

XLD agar ประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์โซเดียมดีออกซีโคเลตไซโลสไลซีนแลคโตสซูโครสโซเดียมไธโอซัลเฟตเฟอร์ริกแอมโมเนียมซิเตรตโซเดียมคลอไรด์ฟีนอลเรดและวุ้น ในห้องปฏิบัติการแบคทีเรียส่วนใหญ่จะใช้ duo XLD agar และ SS agar สำหรับการตรวจตัวอย่างอุจจาระสำหรับ Shigella และ Salmonella

ห้องปฏิบัติการอื่น ๆ ชอบการผสมระหว่างเชื้อ CHROMagar Salmonella และ XLD agar ซึ่งเป็นตัวเลือกอื่น ๆ คู่หูเหล่านี้สามารถปรุงในอาหาร Petri คู่ได้ ด้านหนึ่งพวกเขาวางวุ้น XLD และอีกด้านหนึ่งของสื่อที่เลือก

รากฐาน

- พลังทางโภชนาการ

XLD agar มีสารสกัดจากยีสต์ซึ่งทำหน้าที่เป็นแหล่งของสารอาหารสำหรับจุลินทรีย์ที่เติบโตบนวุ้นนี้ นอกจากนี้การมีคาร์โบไฮเดรต (ไซโลสซูโครสและแลคโตส) ยังให้พลังงานแก่แบคทีเรียที่สามารถหมักได้

- การเลือกของสื่อ

ในฐานะที่เป็นสารยับยั้งจะมีโซเดียมดีออกซีโคเลต สิ่งนี้ป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกทำให้สื่อมีลักษณะที่เลือกได้

- พลังที่แตกต่างกัน

อาณานิคม Shigella ทั่วไป

ดังที่ได้กล่าวไปแล้ววุ้น XLD มีไซโลส คาร์โบไฮเดรตนี้ถูกหมักโดยแบคทีเรียทั้งหมดที่เติบโตในอาหารนี้ยกเว้นสกุล Shigella

นี่เป็นหนึ่งในลักษณะเฉพาะที่ทำให้เกิดความแตกต่างเนื่องจากอาณานิคมของ Shigella แตกต่างจากส่วนที่เหลือโดยการพัฒนาอาณานิคมสีแดงในขณะที่แบคทีเรียอื่น ๆ สร้างอาณานิคมสีเหลือง

อาณานิคมทั่วไปของเชื้อ Salmonella

สกุลซัลโมเนลลายังหมักไซโลสซึ่งเริ่มสร้างอาณานิคมสีเหลือง อย่างไรก็ตามหลังจากใช้คาร์โบไฮเดรดไซโลสหมดลงมันจะโจมตีไลซีนสำหรับเอนไซม์ไลซีนดีคาร์บอกซิเลส decarboxylation ของไลซีนจะสร้างด่างที่เปลี่ยนสีของอาณานิคมและตัวกลางโดยรอบให้เป็นสีแดงดั้งเดิม

พฤติกรรมนี้ดำเนินการโดย Salmonella เท่านั้นเนื่องจากโคลิฟอร์มที่ decarboxylate lysine ไม่สามารถทำให้เป็นด่างของตัวกลางได้ เนื่องจากโคลิฟอร์มยังหมักแลคโตสและซูโครสที่มีอยู่ ดังนั้นการผลิตกรดจึงสูงมากทำให้แบคทีเรียเหล่านี้เหลืออาณานิคมสีเหลือง

ควรสังเกตว่าสกุล Salmonella ไม่ได้หมักซูโครสหรือแลคโตส

การผลิต H

XLD agar ยังช่วยในการตรวจหาเชื้อ Salmonella H ₂ S สำหรับสิ่งนี้มันขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของกำมะถันที่แสดงโดยโซเดียมไธโอซัลเฟตและตัวพัฒนาปฏิกิริยาซึ่งก็คือเฟอร์ริกแอมโมเนียมซิเตรต

ปฏิกิริยาหลังทำปฏิกิริยากับ H ₂ S (ก๊าซไม่มีสี) และก่อให้เกิดการตกตะกอนสีดำที่ไม่ละลายน้ำของเหล็กซัลเฟต ในแง่นี้ลักษณะของโคโลนีซัลโมเนลลาจะเป็นสีแดงโดยมีจุดศูนย์กลางสีดำ

ควรสังเกตว่าเพื่อให้ปฏิกิริยาการสร้าง H ₂ S เกิดขึ้นจำเป็นต้องมี pH ที่เป็นด่าง นั่นคือเหตุผลที่ Enterobacteriaceae อื่น ๆ ที่มีรูปแบบ H ₂ S ไม่สามารถทำได้หรือทำได้ไม่ดีในอาหารชนิดนี้เนื่องจากความเป็นกรดสูงที่เกิดจากการหมักคาร์โบไฮเดรตจะยับยั้งหรือขัดขวางปฏิกิริยา

- โซเดียมคลอไรด์วุ้นและฟีนอลเรด

สุดท้ายโซเดียมคลอไรด์รักษาสมดุลออสโมติก วุ้นเป็นสารที่ทำให้แข็งตัวและฟีนอลเรดจะตรวจจับการเปลี่ยนแปลง pH เปลี่ยนสีของโคโลนีและตัวกลาง

การจัดเตรียม

ชั่งน้ำหนัก XLD กลางที่ขาดน้ำ 55 กรัมแล้วละลายในน้ำ 1 ลิตร ความร้อนและคนส่วนผสมจนถึงจุดเดือด อย่าให้ความร้อนมากเกินไปเนื่องจากความร้อนจะทำลายตัวกลางและสร้างตะกอนที่เปลี่ยนแปลงสัณฐานวิทยาของอาณานิคมทั่วไป

สื่อนี้ต้องไม่ผ่านการนึ่งฆ่าเชื้อ เมื่อละลายน้ำจะต้องส่งไปยังอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 50 ° C เมื่อระบายความร้อนควรเสิร์ฟบนจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อโดยตรง สามารถเทลงในจานเดี่ยวหรือจานคู่ ทิ้งไว้ให้แข็งตัวและเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้งานได้

อุณหภูมิก่อนใช้ เนื่องจากเป็นสื่อที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อจึงแนะนำให้เตรียมไว้ใกล้กับวันที่ใช้

pH สุดท้ายของตัวกลางควรเป็น 7.4 ± 0.2 สีของตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีแดงอมส้มโปร่งแสงโดยไม่ตกตะกอน

หากคุณมีวุ้นพื้นฐาน Xylose Lysine (XL) คุณสามารถเพิ่มโซเดียมดีออกซีโคเลตโซเดียมไธโอซัลเฟตและแอมโมเนียมซิเตรตของเหล็ก ด้วยวิธีนี้จะได้รับสูตรวุ้น XLD

การประยุกต์ใช้งาน

XLD agar ใช้สำหรับการฟื้นตัวของ enteropathogens ส่วนใหญ่เป็นสกุล Shigella และอันดับสองของสกุล Salmonella มีประโยชน์ในการประเมินตัวอย่างอุจจาระน้ำและอาหาร

ประเภทของตัวอย่าง

อุจจาระ

ตัวอย่างอุจจาระสามารถหว่านลงบนวุ้น XLD ได้โดยตรงทำให้กระจายวัสดุได้ดีเพื่อให้ได้โคโลนีที่แยกได้

เพื่อปรับปรุงการฟื้นตัวของเชื้อซัลโมเนลลาสามารถทำวุ้น XLD จากอาหารเสริมเชื้อ Salmonella

อาหาร

ในกรณีของอาหารสามารถใช้น้ำซุปเสริมสำหรับ Salmonella และ Shigella ได้ สำหรับเชื้อ Salmonella คุณสามารถใช้น้ำซุป selenite cystine น้ำซุป tetrathionate สีเขียวสดใสและอื่น ๆ

ในกรณีของ Shigella สามารถเสริมด้วยน้ำซุป Shigella ที่มีโนโวบิโอซิน 0.5 µ / ml โดยบ่มที่อุณหภูมิ 42 °± 1 ° C เป็นเวลา 16-20 ชั่วโมง

น้ำ

ในการวิเคราะห์น้ำแนะนำให้ใช้เทคนิคการกรองเมมเบรนและการใช้วุ้น XLD ร่วมด้วย

เงื่อนไขการปลูกและการระบุ

ตัวกลางที่ผ่านการเพาะเมล็ดจะถูกบ่มแบบแอโรบิคที่ 35 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง

มีการสังเกตอาณานิคมทั่วไปของแต่ละสกุลอาณานิคมที่น่าสงสัยควรได้รับการทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุตัวตน

ระบบประกันคุณภาพ

ในการประเมินการควบคุมคุณภาพของตัวกลางสามารถใช้แบคทีเรียสายพันธุ์ต่อไปนี้: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922 ATC Proteus 43071 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

สกุล Salmonella มีลักษณะเด่นคือการนำเสนออาณานิคมสีแดงที่มีศูนย์กลางสีดำหรืออาณานิคมสีดำสนิทบนสื่อนี้ ในขณะที่ในสกุล Shigella อาณานิคมจะต้องเป็นสีแดงนั่นคือสีของตัวกลาง

ในกรณีของ Escherichia coli คาดว่าจะถูกยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วน ถ้ามันโตขึ้นอาณานิคมจะมีสีเหลือง สำหรับ Proteus mirabilis คาดว่าจะมีการเจริญเติบโตที่ไม่ดีโดยมีโคโลนีสีชมพูมีหรือไม่มีศูนย์ดำ ในที่สุดสกุล Klebsiella จะเติบโตเป็นอาณานิคมสีเหลือง

ความคิดสุดท้าย

XLD agar ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการแบคทีเรียเพื่อประสิทธิภาพสูงในการฟื้นตัวของ Shigella และยังมีการฟื้นตัวของเชื้อ Salmonella ได้เป็นอย่างดี

Rall et al. (2005) ในผลงานของพวกเขาเรื่อง "การประเมินน้ำซุปที่เพิ่มคุณค่าสามชนิดและอาหารเลี้ยงเชื้อ 5 ชนิดสำหรับการตรวจหาเชื้อซัลโมเนลลาในสัตว์ปีก" แสดงให้เห็นว่าจากสารอาหารคลาสสิก 3 ชนิดที่ผ่านการทดสอบ (วุ้นสีเขียวสดใส, วุ้น SS และวุ้น XLD) , XLD วุ้นมีอัตราการฟื้นตัวที่ดีที่สุด

เปอร์เซ็นต์การฟื้นตัวมีดังนี้ 13.8% สำหรับวุ้นสีเขียวสดใส 27.6% สำหรับ SS และ 34.5% สำหรับ XLD Rambach agar ที่มีการฟื้นตัว 48% และ CHROMagar ที่มี 79.3% ถูกเกินโดยสื่อโครเมียมเท่านั้น

อ้างอิง

1. ความเจ็บป่วยที่เกิดจากอาหาร shigellosis มีจำหน่ายที่: anmat.gov.ar
2. "วุ้น XLD" Wikipedia สารานุกรมเสรี 9 ก.พ. 2019 11:46 UTC. 10 เม.ย. 2019, 19:25 น. wikipedia.org
3. ห้องปฏิบัติการบีบีแอล. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate) 2013 มีจำหน่ายที่: bd.com
4. แล็บ. นีโอเจน. วุ้น XLD มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen
5. ห้องปฏิบัติการ Francisco Soria Melguizo XLD วุ้น ดูได้ที่: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. การประเมินน้ำซุปเสริมคุณค่าสามชนิดและสารชุบ 5 ชนิดสำหรับการตรวจหาเชื้อ Salmonella ในสัตว์ปีก Braz J. Microbiol 2005 36 (2): 147-150. มีให้จาก: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina