TSI AGAR: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

TSI วุ้นหรือสามวุ้นเหล็กน้ำตาลเป็นสื่อที่เป็นของแข็งซึ่งทำหน้าที่เป็น ทดสอบทางชีวเคมีเพื่อเป็นแนวทางในการระบุเริ่มต้นของแกรมเชิงลบแบคทีเรีย ขึ้นอยู่กับการแสดงการหมักของน้ำตาลที่มีอยู่และการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์และก๊าซ

องค์ประกอบและพื้นฐานของมันคล้ายกับการทดสอบเหล็กของ Kligler มากโดยมีความแตกต่างกันที่ส่วนหลังประกอบด้วยกลูโคสและแลคโตสเท่านั้น ในฐานะที่เป็นชื่อของมันมีความหมายว่าวุ้นเหล็กน้ำตาลสามเท่าประกอบด้วยคาร์โบไฮเดรตที่สามารถหมักได้สามชนิด: กลูโคสแลคโตสและซูโครส

ภาพการทดสอบ TSI กับจุลินทรีย์ที่แตกต่างกัน A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa ที่มา: Witmadrid จาก Wikimedia Commons

นอกจากนี้ TSI medium ยังมีอนุพันธ์ของโปรตีน 4 ชนิดที่ทำให้เป็นวุ้นที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูง ได้แก่ สารสกัดจากยีสต์สารสกัดจากเนื้อสัตว์เปปโตนและโปรตีโอสเปปโตน นอกจากนี้ยังมีแอมโมเนียมซัลเฟตของเหล็กโซเดียมไธโอซัลเฟตโซเดียมคลอไรด์ฟีนอลเรดและวุ้น

การที่จุลินทรีย์ไม่สามารถหมักกลูโคสที่มีอยู่ในอาหารได้ทันทีจะไม่รวมไว้ในวงศ์ Enterobacteriaceae ดังนั้นการทดสอบนี้จึงมีความจำเป็นอย่างยิ่งในการตัดสินใจเลือกเส้นทางการระบุตัวตนเพื่อระบุสกุลและชนิด

ห้องปฏิบัติการแต่ละห้องจะตัดสินใจว่าจะทำงานกับ TSI agar หรือ Kligler iron agar

รากฐาน

สารประกอบแต่ละตัวทำหน้าที่ภายในตัวกลาง

โซเดียมคลอไรด์และวุ้น

โซเดียมคลอไรด์เป็นสิ่งจำเป็นในการรักษาสมดุลออสโมติกของตัวกลาง ในขณะที่วุ้นให้ความแข็งสม่ำเสมอ

ตัวบ่งชี้ PH (ฟีนอลสีแดง)

pH ของตัวกลางที่เตรียมไว้สมดุลที่ 7.3 และตัวบ่งชี้ pH (ฟีนอลสีแดง) เปลี่ยนเป็นสีเหลืองต่ำกว่า 6.8 ซึ่งหมายความว่ากรดจำนวนเล็กน้อยที่เกิดจากการหมักน้ำตาลจะเปลี่ยนตัวกลางจากสีแดงส้มเป็นสีเหลือง

หากไม่มีการหมักเกิดขึ้นจะมีการทำให้เป็นด่างของตัวกลางโดยใช้เปปโตนเปลี่ยนจากสีแดงส้มเป็นสีแดงเข้ม

อนุพันธ์ของโปรตีน (สารสกัดจากยีสต์สารสกัดจากเนื้อสัตว์เปปโตนและโปรตีโอสเปปโตน)

เมื่อแบคทีเรียเผาผลาญโปรตีนที่มีอยู่ในวุ้น TSI เอมีนจะถูกผลิตขึ้นเพื่อทำให้ตัวกลางเป็นด่าง (ส่วนใหญ่อยู่ที่ระดับเอียง) เนื่องจากปฏิกิริยาต้องใช้ออกซิเจน เอมีนเปลี่ยนขอบเป็นสีแดงสด

แต่ทั้งนี้จะขึ้นอยู่กับความสามารถของแบคทีเรียในการหมักคาร์โบไฮเดรตหรือไม่

การหมักคาร์โบไฮเดรต (กลูโคสแลคโตสและซูโครส)

การศึกษาการหมักน้ำตาลสามารถให้ภาพได้หลายภาพและแต่ละภาพมีการตีความแตกต่างกัน การตีความการทดสอบแบ่งจุลินทรีย์ออกเป็น 3 ประเภท ได้แก่ ผู้ที่ไม่ใช้น้ำตาลกลูโคสผู้ไม่หมักแลคโตสและผู้หมักแลคโตส / ซูโครส

ควรสังเกตว่าปริมาณกลูโคสในตัวกลางมี จำกัด ในขณะที่ความเข้มข้นของแลคโตสและซูโครสสูงกว่า 10 เท่า

แบคทีเรียในตระกูล Enterobacteriaceae และจุลินทรีย์ที่หมักด้วยกลูโคสอื่น ๆ จะเริ่มหมักน้ำตาลนี้เนื่องจากเป็นคาร์โบไฮเดรตที่ง่ายที่สุดเพื่อให้เป็นพลังงาน

ในทางกลับกันแลคโตสและซูโครสเป็นคาร์โบไฮเดรตเชิงซ้อนที่ต้องย่อยสลายและเปลี่ยนเป็นกลูโคสเพื่อให้เข้าสู่วงจร Embden-Meyerhof

- จุลินทรีย์ไม่หมักกลูโคส

เมื่อจุลินทรีย์หัวเชื้อไม่สามารถหมักน้ำตาลกลูโคสได้ก็จะสามารถหมักคาร์โบไฮเดรตอื่น ๆ ได้น้อยลงมาก ดังนั้นจึงไม่มีกรดเกิดขึ้นที่นี่ แต่มีการสร้างเอมีนที่มุมเอียงโดยใช้เปปโตน

ในกรณีนี้ขอบหน้าปัดจะเปลี่ยนเป็นสีแดงเข้มขึ้นและด้านล่างของท่ออาจไม่เปลี่ยนแปลงหรืออาจเป็นด่างทำให้ทั้งหลอดเป็นสีแดง

การตีความ: K / K หมายถึงมุมเอียงอัลคาไลน์ / ด่างหรือด้านล่างที่เป็นกลาง

ในภาพตอนต้นของบทความให้ดูภาพของหลอด D

ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่าจุลินทรีย์ไม่ได้อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae

- จุลินทรีย์ไม่หมักแลคโตส / ซูโครส

หากแบคทีเรียสามารถหมักน้ำตาลกลูโคสได้ แต่ไม่ใช่แลคโตสหรือซูโครสจะเกิดสิ่งต่อไปนี้:

แบคทีเรียจะกินกลูโคสทั้งหมดที่มีอยู่หลังจากผ่านไปประมาณ 6 ถึง 8 ชั่วโมงโดยสามารถทำให้เป็นกรดทั้งมุมเอียงและบล็อกได้ นั่นคือวุ้นจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองอย่างสมบูรณ์ แต่เมื่อกลูโคสหมดลงและไม่สามารถใช้แลคโตสและซูโครสได้แบคทีเรียจะเริ่มการเผาผลาญโปรตีน

ปฏิกิริยานี้ต้องการออกซิเจนดังนั้นการย่อยสลายของเปปโตนจึงเกิดขึ้นที่พื้นผิว (เอียง) เอมีนผลิตด่างให้ขอบหน้าปัดเปลี่ยนจากสีเหลืองเป็นสีแดง ปฏิกิริยานี้ปรากฏให้เห็นหลังจากฟักตัวเป็นเวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมง

การตีความ: K / A หมายถึงมุมเอียงอัลคาไลน์และกรดปึก

ในภาพตอนต้นของบทความให้ดูภาพของหลอด B

- จุลินทรีย์หมักแลคโตส / ซูโครส

จุลินทรีย์ที่สามารถหมักแลคโตสและซูโครสสามารถหมักน้ำตาลกลูโคสได้อย่างชัดเจน หลังจากปริมาณน้ำตาลกลูโคสต่ำสุดที่มีอยู่ในตัวกลางถูกใช้จนหมดไพรูเวทที่เกิดขึ้นจะเริ่มเผาผลาญเพื่อสร้างกรดผ่านวงจรแอโรบิค Krebs และในช่วง 8 ถึง 12 ชั่วโมงตัวกลางทั้งหมดจะเป็นสีเหลือง

หากแบคทีเรียสามารถทำลายแลคโตสหรือซูโครสได้กรดจะยังคงถูกผลิตต่อไปและหลังจาก 18 ถึง 24 ชั่วโมงท่อทั้งท่อ - เอียงและปลั๊กจะยังคงเป็นสีเหลือง

ควรสังเกตว่าการใช้กลูโคสนั้นทำได้สองวิธีคือวิธีหนึ่งที่มุมเอียงของท่อแบบแอโรบิคและอีกวิธีหนึ่งที่ด้านล่างของท่อแบบไม่ใช้ออกซิเจน

การตีความ: A / A หมายถึงก้นกรด / ก้นกรด มันอาจมีหรือไม่มีก๊าซ

ในภาพตอนต้นของบทความให้ดูภาพของหลอด A

การผลิตก๊าซ

จุลินทรีย์บางชนิดมีความสามารถในการผลิตก๊าซในระหว่างการหมักน้ำตาล เห็นได้ชัดว่าก๊าซอยู่ในท่อโดยความดันที่กระทำภายในวุ้น ความดันทำให้เกิดฟองหรือการกระจัดของวุ้น บางครั้งการก่อตัวของก๊าซอาจทำให้ตัวกลางแตกหักได้

สิ่งสำคัญคือเมื่อทำการเพาะเมล็ด TSI ควรทำการเจาะทะลุตรงกลางของวุ้นจนสุด หากการเจาะถูกเบี่ยงเบนเข้าหาผนังของท่ออาจทำให้เกิดผลบวกปลอมในการผลิตก๊าซเนื่องจากมันจะหลบหนีผ่านช่องที่ก่อตัวผิด

การผลิตก๊าซเช่นเดียวกับปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในมุมเอียงของวุ้นต้องการออกซิเจนดังนั้นจึงขอแนะนำให้ปิดหลอดด้วยปลั๊กฝ้ายและหากใช้ฝา Bakelite ก็ไม่ควรแน่นสนิท

รายงานการผลิตก๊าซเป็นค่าบวก (+) หรือค่าลบ (-)

รูปแบบการก่อตัวของก๊าซ ที่มา: โครงการที่จัดทำโดย MSc Marielsa Gil. แหล่งที่มาของภาพ: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe ผ่าน Wikimedia Commons

โซเดียมไธโอซัลเฟตและเหล็กแอมโมเนียมซัลเฟต

แบคทีเรียที่สามารถผลิตก๊าซไข่เน่า (ก๊าซไม่มีสี) ดูดซับกำมะถันจากโซเดียมไธโอซัลเฟตที่มีอยู่ในตัวกลาง เมื่อ H ₂ S เกิดขึ้นจะทำปฏิกิริยากับเฟอร์รัสแอมโมเนียมซัลเฟตทำให้เกิดเหล็กซัลไฟด์ (ตกตะกอนสีดำที่เห็นได้ชัดเจน)

รายงานการผลิตH ₂ S เป็นค่าบวก (+) หรือค่าลบ (-)

ในภาพตอนต้นของบทความให้ดูภาพของหลอด C

การจัดเตรียม

ชั่งน้ำหนัก 62.5 กรัมของอาหารวุ้นเหล็กทริปเปิลที่ขาดน้ำ (TSI) และละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร

ความร้อนจนวุ้นละลายหมด ต้มสักนาทีคนบ่อยๆ กระจายของกลาง 4 มล. ลงในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาฝ้าย

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที นำออกจากหม้อนึ่งและพักไว้ที่มุม ต้องใช้ความระมัดระวังว่าทั้งฐานและกรอบมีระยะห่างเท่ากัน

เก็บในตู้เย็น 2-8 ° C ปล่อยให้มันอุ่นขึ้นก่อนที่จะหว่านเชื้อแบคทีเรีย

สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจอ่อนและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีแดงส้ม

pH สุดท้ายของตัวกลางที่เตรียมไว้คือ 7.3 ± 0.2

การประยุกต์ใช้งาน

การทดสอบ TSI ใช้กันอย่างแพร่หลายในระดับห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา การทดสอบนี้มีความสำคัญเพื่อชี้แนะประเภทของการทดสอบที่ต้องใช้เพื่อระบุสกุลและชนิด การดำเนินการและการตีความที่ดีสามารถช่วยประหยัดวัสดุและแรงงาน

หากผลลัพธ์เป็น TSI K / K และการทดสอบไซโตโครมออกซิเดสเป็นบวกเป็นที่ทราบกันดีว่าควรใช้การทดสอบเพื่อระบุแท่งแกรมลบที่ไม่ผ่านการหมักเช่น Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia เป็นต้น ถ้าเป็นออกซิเดสลบจะมุ่งเน้นไปที่จำพวก Acinetobacter, Stenotrophomonas เป็นต้น

ในทางกลับกันหากได้รับ TSI A / A หรือ K / A และการทดสอบไซโตโครมออกซิเดสเป็นลบยิ่งไนเตรตลดลงเป็นไนไตรต์มากขึ้นเราจะมั่นใจได้ว่าเป็นจุลินทรีย์ที่อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae ในกรณีนี้เส้นทางการระบุจะมุ่งเน้นไปที่การทดสอบเฉพาะสำหรับแบคทีเรียกลุ่มนี้

ในทางกลับกันหากได้รับภาพ K / A หรือ A / A และการทดสอบไซโตโครมออกซิเดสเป็นบวกการทดสอบเพิ่มเติมที่จะประกอบจะมุ่งเป้าไปที่การระบุสายพันธุ์หมักที่ไม่ได้อยู่ในวงศ์ Enterobacteriaceae เช่น Aeromonas Plesiomonas, Vibrio และ Pasteurella

TSI ที่มีไฮโดรเจนซัลไฟด์, ออกซิเดสลบจะเป็นแนวทางในการระบุสกุลต่อไปนี้ของวงศ์ Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella หรือ Salmonella

TSI ที่มีไฮโดรเจนซัลไฟด์เพียงเล็กน้อยหรือปานกลางในมุมเอียงอัลคาไลน์ที่มีพื้นหลังเป็นด่างและออกซิเดสบวกจะเป็นแนวทางในการใช้การทดสอบเพื่อระบุแท่งแกรมลบที่ไม่ผ่านการหมักซึ่งผลิต H ₂ S เช่น Shewanella putrefaciens

ในที่สุด TSI สามารถใช้สำหรับการตรวจสอบการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ในแบคทีเรียแกรมบวกโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อสงสัยว่า Erysipelothrix rhusiopathiae

หว่าน

สื่อ TSI ต้องฉีดวัคซีนด้วยโคโลนีบริสุทธิ์โดยแยกได้ในวัฒนธรรมหลักหรือวัฒนธรรมที่เลือก หากนำโคโลนีมาจากอาหารเลี้ยงเชื้อที่เพาะด้วยตัวอย่างที่มีพืชผสมจะต้องใช้ความระมัดระวังในการนำออกจากพื้นผิวเท่านั้นเนื่องจากสายพันธุ์ที่มีชีวิตที่ยับยั้งในตัวกลางนั้นอาจมีอยู่ในส่วนล่างของโคโลนี

ดังนั้นจึงไม่ควรระบายความร้อนของลูปบนตัวกลางที่เลือกจากนั้นโคโลนีจะถูกนำขึ้นและเติมเชื้อด้วยตัวกลาง TSI

การหว่านจะทำด้วยห่วงตรงหรือเข็ม จะทำการเจาะโดยดูแลให้ทะลุตรงกลางตรงกลางไปจนถึงด้านล่างและจากนั้นการหว่านจะเสร็จสิ้นโดยการฉีดลงดินในรูปซิกแซก อย่าเจาะสองรู

บ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ในแอโรบิคเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ตีความในเวลานี้ไม่ว่าก่อนหรือหลัง

ข้อ จำกัด

ควรอ่านการทดสอบ TSI ภายใน 18 ถึง 24 ชั่วโมงหลังการฟักตัว การอ่านก่อนเวลานี้อาจให้ผลบวกลวงสำหรับการหมัก A / A ในขณะที่การอ่านหลังจากเวลานี้สามารถก่อให้เกิดภาพลบที่ผิดพลาดของผู้ที่ไม่ใช่ถังหมักเนื่องจากการบริโภคเปปโตนที่ทำให้ตัวกลางเป็นด่าง

อ้างอิง

1. Mac Faddin J. (2003). การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก 3rd ed. กองบรรณาธิการ Panamericana บัวโนสไอเรส. อาร์เจนตินา.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
4. "TSI agar". Wikipedia สารานุกรมเสรี 10 ก.ค. 2561, 08:09 น. UTC. 10 ก.พ. 2019, 03:33 น. ดูได้ที่: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories TSI Agar (วุ้นเหล็กสามน้ำตาล) 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
6. BD Laboratories วุ้นเหล็กสามน้ำตาล (TSI Agar) พ.ศ. 2546 มีจำหน่ายที่: bd.com