THAYER MARTIN AGAR: รองพื้นการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025

วุ้นเธเออร์มาร์ตินเป็นสื่อเลือกคุณค่าทางโภชนาการสูงและมั่นคงสำหรับการแยก meningitidis Neisseria และ Neisseria gonorrhoeae นั้น ทั้งที่เรียกว่า Neisserias ที่ทำให้เกิดโรคหรือมีความสำคัญทางคลินิก

ลักษณะพิเศษที่สำคัญที่สุดอย่างหนึ่งของ Thayer Martin Agar คือผลิตภัณฑ์เสริมอาหารมีปริมาณสูง คุณสมบัตินี้มีความสำคัญเนื่องจาก Neisserias เป็นจุลินทรีย์ที่มีความต้องการสูงมากจากมุมมองทางโภชนาการดังนั้นจึงไม่เติบโตในสื่อทั่วไป

Thayer Martin / Agar Thayer Martin สื่อกลาง แหล่งที่มาของภาพ 1: ถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil, ภาพที่ 2 Pixinio.com bacteriacolonized, modified, Thayer, Martin, agar.

ในทางกลับกันเนื่องจากจุลินทรีย์เหล่านี้มักพบในพื้นที่ที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อจึงจำเป็นต้องเพิ่มสารยับยั้งเพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของพืชที่มาพร้อมกันโดยไม่ส่งผลต่อการพัฒนาของสกุล Neisseria

วุ้นนี้ประกอบด้วยวุ้นพื้นฐาน GC เฮโมโกลบินอาหารเสริมเพิ่มเติมและสารยับยั้งที่ซับซ้อน (ยาปฏิชีวนะและยาต้านเชื้อรา) อาคารพาณิชย์ขายอาหารเสริมแต่ละรายการแยกกัน

ตัวอย่างที่จะหว่านลงในสื่อนี้จะขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่ต้องการ สำหรับ Neisseria gonorrhoeae ตัวอย่างที่ดีที่สุดคือสารคัดหลั่งจากช่องคลอดและท่อปัสสาวะ ในขณะที่ Neisseria meningitidis ตัวอย่างที่ใช้มากที่สุดคือ CSF, pharyngeal และ nasopharyngeal exudates

รากฐาน

Neisserias เป็นจุลินทรีย์ที่จัดว่าน่ารำคาญดังนั้นการแยกเชื้อจึงทำได้ยาก ดังนั้น Thayer Martínจึงเป็นสื่อที่ซับซ้อนและส่วนประกอบแต่ละอย่างตอบสนองฟังก์ชันที่อธิบายไว้ด้านล่าง:

วุ้นฐาน GC

วุ้น GC ประกอบด้วยโปรตีโอสเปปโตนแป้งข้าวโพดโซเดียมคลอไรด์ไดโปตัสเซียมฟอสเฟตโมโนโพแทสเซียมฟอสเฟตและวุ้น ส่วนประกอบของมันให้สารอาหารพื้นฐานสำหรับการพัฒนาจุลินทรีย์ทำให้กรดไขมันที่เป็นพิษเป็นกลางช่วยรักษาสมดุลออสโมติกกำหนด pH และให้ความสม่ำเสมอของของแข็งกับตัวกลาง

เฮโมโกลบิน

ฮีโมโกลบินให้ปัจจัย V และ X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD และ hemin ตามลำดับ) ด้วยเหตุนี้สายพันธุ์ Haemophilus จึงเติบโตในอาหารชนิดนี้เช่นกัน ฮีโมโกลบินสามารถรับได้ในเชิงพาณิชย์ในรูปแบบที่ขาดน้ำหรือสามารถเติมเลือดวัวสดที่ละลายน้ำแข็งเข้าไปในอาหารได้

อาหารเสริมเสริมคุณค่า

ในทางกลับกันต้องมีการเพิ่มอาหารเสริมเพื่อเพิ่มคุณค่าในอาหาร Thayer-Martin เนื่องจากสารอาหารที่มีอยู่ในวุ้นพื้นฐานไม่เพียงพอสำหรับความต้องการของพืชสกุล Neisseria

ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารที่ใช้กันมากที่สุดเรียกว่า isovitalex ประกอบด้วย glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, p-amino benzoic acid, วิตามินบี 12, ไทอามีนและกลูโคส สารประกอบเหล่านี้จำเป็นสำหรับการพัฒนา Neisserias ที่ทำให้เกิดโรคอย่างเหมาะสม

สารยับยั้ง

เนื่องจากเป็นอาหารที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูงจึงต้องใช้สารยับยั้งที่ป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์จากพืชตามปกติในพื้นที่ดังนั้นจึงนิยมแยกสกุล Neisseria

สารยับยั้งประกอบด้วย vancomycin, colistin และ nystatin Vancomycin ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวก colistin ป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมลบเช่น Pseudomonas และ saprophytic Neisserias และ nystatin ทำหน้าที่ในยีสต์เช่น Candida albicans

อย่างไรก็ตาม Thayer Martin Agar ได้รับการแก้ไขในภายหลัง การเปลี่ยนแปลงประกอบด้วยการเพิ่ม trimethoprim การเพิ่มขึ้นของปริมาณวุ้นและการเติมน้ำตาลกลูโคสเพิ่มเติม การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ช่วยปรับปรุงการฟื้นตัวของสายพันธุ์ Neisseria gonorrhoeae อย่างมีนัยสำคัญ

ควรสังเกตว่า trimethoprim ยับยั้งการเจริญเติบโตของสกุล Proteus และการก่อตัวเป็นฝูง ในแง่นี้มันเป็นยาปฏิชีวนะที่ให้ลักษณะเฉพาะที่เลือกให้กับสื่อ Thayer Martin

การจัดเตรียม

วุ้น Thayer Martin ดั้งเดิม

-GC วุ้น

ชั่งน้ำหนักตัวกลาง GC ที่ขาดน้ำ 8.2 กรัมและแขวนไว้ใน 100 มล. ผสมและต้มเป็นเวลา 1 นาทีโดยคนบ่อยๆให้ละลายหมด ฆ่าเชื้อส่วนผสมในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที

- ฮีโมโกลบิน 2%

ระงับฮีโมโกลบินที่ขาดน้ำ 2 กรัมในน้ำกลั่นร้อน 2 หรือ 3 มิลลิลิตรจนส่วนผสมสม่ำเสมอ เติมน้ำเพิ่มทีละนิดเพื่อให้ได้ปริมาณ 100 มล. สารแขวนลอยต้องเป็นเนื้อเดียวกันก่อนฆ่าเชื้อ

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งเป็นเวลา 15 นาที

- อาหารเสริมเพิ่มคุณค่า

เปลี่ยนขวดเพื่อการค้าใหม่ด้วยตัวเจือจางที่ บริษัท การค้าเดียวกันจัดหาให้ ผสมให้เข้ากัน ปริมาณของตัวเจือจางที่จะใช้จะระบุไว้ในคำแนะนำชุด

-VCN อาหารเสริมยับยั้ง (vancomycin, colistin, nystatin)

เปลี่ยนขวดใหม่ด้วยสารเจือจางที่ บริษัท การค้าจัดหาให้ ผสมให้เข้ากัน ปริมาณของตัวเจือจางที่จะใช้จะระบุไว้ในคำแนะนำชุด

-Prepared

สำหรับทุก ๆ 100 มล. ของวุ้น GC ให้ดำเนินการดังนี้:

เมื่อวุ้น GC ออกจากหม้อนึ่งแล้วปล่อยให้เย็นลงที่อุณหภูมิประมาณ 50 ° C แล้วเติมสารละลายฮีโมโกลบินที่เตรียมไว้ 2 มิลลิลิตรอาหารเสริมเพิ่มคุณค่า 2 มิลลิลิตร (isobitalex หรือ britalex) และอาหารเสริมยับยั้ง 2 มิลลิลิตร ผสมและเสิร์ฟในอาหาร Petri ที่ปราศจากเชื้อ

ปล่อยให้แข็งตัวและเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้

สีของสื่อที่เตรียมไว้คือสีแดงเชอร์รี่ pH สุดท้ายของตัวกลางคือ 7.2 ± 0.2

วุ้น Thayer Martin ดัดแปลง

ชั่งน้ำหนักตัวกลาง GC ที่ขาดน้ำ 8.2 กรัมและแขวนไว้ใน 100 มล. ใส่วุ้นวุ้น 1 กรัมและกลูโคส 0.3 กรัม ผสมและต้มเป็นเวลา 1 นาทีโดยคนบ่อยๆให้ละลายหมด ฆ่าเชื้อส่วนผสมในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที

เตรียมเฮโมโกลบินและอาหารเสริมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้

อาหารเสริมปราบปรามที่ใช้คือ VCNT (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim)

-Prepared

ดำเนินการตามที่อธิบายไว้สำหรับวุ้น Thayer Martin ดั้งเดิม

ใช้

Thayer Martin Agar ควรได้รับอนุญาตให้อุ่นก่อนที่ชิ้นงานจะเป็นริ้ว ตัวอย่างที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่ pharyngeal swabs, nose swabs, ช่องคลอด, urethral และ / หรือ rectal discharge และ CSF

ใช้ตัวอย่างที่สดใหม่และทำหัวเชื้อที่แข็งแรงบนวุ้น ตัวอย่างได้รับการเพาะเมล็ดโดยตรงโดยการปล่อยวัสดุจากนั้นความเหนื่อยล้าก็พุ่งลงบนพื้นผิว

แผ่นเปลือกโลกถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงในขวดโหลขนาดเล็ก (5% CO ₂ ) เมื่อสิ้นสุดเวลาฟักตัวแผ่นเปลือกโลกจะถูกตรวจสอบเพื่อหาอาณานิคมขนาดเล็กสีเทาและบางครั้งก็มีลักษณะคล้ายมิวคอยด์

ทำการทดสอบแกรมและชีวเคมีเชิงยืนยันกับอาณานิคมที่น่าสงสัย

ระบบประกันคุณภาพ

สามารถใช้สายพันธุ์จุลินทรีย์ต่อไปนี้สำหรับการควบคุมคุณภาพของ Thayer Martin Agar

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 และ Neisseria meningitidis ATCC 13090; คาดว่าจะมีพัฒนาการที่น่าพอใจในทั้งสองสายพันธุ์

ควรรวมสายพันธุ์ต่อไปนี้ด้วย: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 และ Candida albicans ATCC 10231 ในทั้งหมดนี้คาดว่าจะมีการยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วนในสื่อนี้

ข้อ จำกัด

- เราต้องจำไว้ว่าแบคทีเรียที่ต้านทานต่อสารยับยั้งที่ใช้สามารถเติบโตได้ในตัวกลาง

- มีสายพันธุ์ Neisseria gonorrhoeae ที่สามารถไวต่อความเข้มข้นของ vancomycin ที่ใช้ ด้วยเหตุนี้จึงแนะนำให้ใช้วุ้นช็อกโกแลตที่เสริมด้วย isovitalex แต่ไม่มีสารยับยั้ง

- มียีสต์สายพันธุ์ที่ทนต่อ nystatin ที่สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารชนิดนี้และรบกวนการแยกเชื้อ Neisserias ที่ทำให้เกิดโรคโดยเฉพาะ gonococci

อ้างอิง

1. ห้องปฏิบัติการวินิจฉัย Valtek Thayer-Martin Agar.2016. มีจำหน่ายที่: com
2. Britannia Laboratories Thayer Martin Medium Modified. 2010 ดูได้ที่: britanialab.com
3. ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia วุ้น Thayer-Martin Wikipedia สารานุกรมเสรี 26 ตุลาคม 2017, 16:33 น. UTC ดูได้ที่: wikipedia.org 4. เข้าถึง 28 กุมภาพันธ์ 2019
4. Britannia Laboratories วุ้น GC 2010 ดูได้ที่: britanialab.com
5. Laboratories BBL ™ Medium Enrichment for Fastidious Microorganisms 2542. มีจำหน่ายใน: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina