บิสมัทซัลไฟต์วุ้น: เหตุผลการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025

บิสมัทซัลไฟต์วุ้นเป็นเลือกขนาดกลางและวัฒนธรรมค่าของแข็งสูตรพิเศษสำหรับการแยกเชื้อ Salmonella enterica ของช่ำชอง enterica serotype typhi ท่ามกลางสายพันธุ์อื่น ๆ ของเชื้อ Salmonella สื่อนี้เรียกว่า BSA agar สำหรับตัวย่อในภาษาอังกฤษ Bismuth Sulfite Agar

สูตรดั้งเดิมสำหรับวุ้นบิสมัทซัลไฟต์ถูกสร้างขึ้นในปีพ. ศ. 2470 โดย Wilson and Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); ประกอบด้วยโซเดียมซัลไฟต์กลูโคสสารละลายบิสมัทแอมโมเนียมซิเตรตเฟอร์รัสซัลเฟตและวุ้น

การเจริญเติบโต 48 ชั่วโมงของการฟักตัวของเชื้อ Salmonella sp ต่อวุ้นบิสมัทซัลไฟต์ ที่มา: Pixnio.com ผู้แต่ง: Dr. WR Erving, USCDCP

วันนี้มีการดัดแปลงของกลางเดิมซึ่งประกอบด้วยสารสกัดจากเนื้อสัตว์และเคซีนเปปโตนตัวบ่งชี้บิสมัทซัลไฟต์กลูโคสไดโซเดียมฟอสเฟตเฟอร์รัสซัลเฟตสีเขียวสดใสและวุ้น

มีหลายวิธีในการแยกสายพันธุ์ซัลโมเนลลา แต่เมื่อต้องการกู้คืนซีโรไทป์ไทป์วุ้นบิสมัทซัลไฟต์มีข้อได้เปรียบที่โดดเด่นกว่าพวกมันเนื่องจากโดยส่วนใหญ่แล้วจุลินทรีย์นี้จะได้รับการฟื้นตัวต่ำมากหรือไม่มีเลย .

อย่างไรก็ตามจำเป็นต้องใช้สื่อมากกว่าหนึ่งชนิดเมื่อพยายามแยก enteropathogens เนื่องจากวุ้นบิสมัทซัลไฟต์มีประสิทธิภาพน้อยกว่าสำหรับเชื้อซัลโมเนลลาชนิดอื่น ๆ และสำหรับสกุลชิเกลลาซึ่งถูกยับยั้งหรือพัฒนาได้ไม่ดี ในวุ้นนี้

ควรสังเกตว่าเชื้อซัลโมเนลลาทุกสายพันธุ์ Typhi serotype เป็นหนึ่งใน enteropathogens ที่สำคัญที่สุดในมนุษย์ซึ่งเป็นแหล่งกักเก็บเพียงอย่างเดียว ซีโรวาร์นี้ทำให้เกิดไข้ไทฟอยด์กระเพาะและลำไส้อักเสบแบคทีเรียและภาวะโลหิตเป็นพิษ

ด้วยเหตุนี้จึงมีความเกี่ยวข้องที่จะรวมวุ้นนี้เมื่อวิเคราะห์ตัวอย่างน้ำอุจจาระหรืออาหารที่สงสัยว่ามีอยู่

รากฐาน

เช่นเดียวกับอาหารเลี้ยงเชื้อส่วนใหญ่ Bismuth Sulfite Agar มีสารอาหารเพื่อส่งเสริมการเจริญเติบโตของแบคทีเรียเช่นเปปโตนและสารสกัดจากเนื้อสัตว์ ในทำนองเดียวกันกลูโคสทำหน้าที่เป็นแหล่งพลังงานและคาร์บอน

อย่างไรก็ตามแบคทีเรียบางชนิดไม่สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารชนิดนี้เนื่องจากบิสมัทซัลไฟต์ Agar เป็นสื่อที่คัดเลือกได้ ประกอบด้วยสารประกอบที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์แกรมบวกและแบคทีเรียแกรมลบบางชนิด สารประกอบเหล่านี้ ได้แก่ ตัวบ่งชี้บิสมัทซัลไฟต์และสีเขียวสดใส

ในส่วนของมันนั้นไดโซเดียมฟอสเฟตจะรักษาความเป็นออสโมลาริตีและ pH ของตัวกลาง

นอกจากนี้บิสมัทซัลไฟต์วุ้นยังเป็นตัวกลางที่แตกต่างเนื่องจากมีเฟอร์รัสซัลเฟตซึ่งแสดงการก่อตัวของ H ₂ S H ₂ S ที่เกิดจากแบคทีเรียจะทำปฏิกิริยากับเฟอร์รัสซัลเฟตและก่อตัวเป็นตะกอนสีดำที่ไม่ละลายน้ำที่มองเห็นได้ชัดเจน

สุดท้ายวุ้น - วุ้นจะให้ความสม่ำเสมอที่มั่นคงกับตัวกลาง

การจัดเตรียม

ชั่งของกลางที่ขาดน้ำ 52.3 กรัมแล้วละลายในน้ำหนึ่งลิตร ต้มส่วนผสมให้เดือดประมาณ 1 นาทีโดยคนบ่อยๆจนละลายหมด อย่าร้อนมากเกินไป สื่อนี้ไม่สามารถนึ่งฆ่าเชื้อได้เนื่องจากความร้อนสูงจะทำลายอาหารเลี้ยงเชื้อ

ปล่อยให้เย็นถึง 45 ° C แล้วเขย่าก่อนเสิร์ฟในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ ขอแนะนำให้ทำเพลทที่มีความหนาดี ในการทำเช่นนี้ต้องเท 25 มล. ลงในแต่ละจาน ปล่อยให้แข็งตัว เนื่องจากเป็นสื่อที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อจึงเป็นเรื่องปกติที่จะแนะนำให้ใช้ทันที

อย่างไรก็ตามจากการศึกษาของ D'aoust ในปี 2520 พบว่ามีการฟื้นตัวของเชื้อ Salmonella typhimurium และ Salmonella enteritidis ได้ดีขึ้นเมื่อเป็นวุ้นบิสมัทซัลไฟต์ที่มีอายุปานกลางโดยไม่ส่งผลต่อประสิทธิภาพของ serovars Typhi และ Paratyphi B.

D'aoust แนะนำให้ใช้เพลตในวันที่ 4 ของการแช่เย็นแม้ว่าจะเตือนว่าเมื่อวัยกลางคนการคัดเลือกลดลงและสายพันธุ์ Proteus vulgaris จะพัฒนาได้ง่ายขึ้น

ด้วยเหตุนี้สำหรับตัวอย่างที่มีการปนเปื้อนสูงเช่นอุจจาระจึงควรใช้อาหารที่ปรุงสดใหม่ มิฉะนั้นให้ใช้ในวันที่ 4 ของการเตรียมการ ผู้เขียนคนอื่นแนะนำให้ใช้จานในวันรุ่งขึ้นหลังจากเตรียมเก็บไว้ในตู้เย็น

แผ่นแช่เย็นต้องได้รับการอบอุณหภูมิก่อนใช้ pH ของตัวกลางควรเป็น 7.5 ± 0.2 ตัวกลางดิบคือสีเบจและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีเหลือบเขียวอมเทา

การประยุกต์ใช้งาน

ในบรรดาตัวอย่างที่สามารถปลูกในสื่อนี้ ได้แก่ ตัวอย่างอุจจาระน้ำดื่มหรือน้ำเสียและอาหาร

ในการปรับปรุงไอโซเลทขอแนะนำให้ทำการบำบัดก่อนการเสริมคุณค่าด้วยน้ำซุปแลคโตสและหลังจากการเสริมคุณค่าด้วยน้ำซุปเตตระไธโอเนตหรือน้ำซุปซีสตีนซีลีไนต์ก่อนที่จะเพาะบนวุ้นบิสมัทซัลไฟต์

แผ่นเปลือกโลกได้รับการบ่มที่ 35 ° C ± 0.2 เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงในแบบแอโรบิค

ลักษณะของโคโลนีบนวุ้นบิสมัทซัลไฟต์

โดยทั่วไปแล้วอาณานิคมของ Salmonella Typhi จะเห็นในวุ้นนี้ภายใน 24 ชั่วโมงโดยมีจุดศูนย์กลางสีดำและล้อมรอบด้วยรัศมีสีเขียวสดใส ในขณะที่ภายใน 48 ชั่วโมงจะเปลี่ยนเป็นสีดำสนิทเนื่องจากการก่อตัวของไฮโดรเจนซัลไฟด์

- สื่อนี้ยับยั้งสายพันธุ์ส่วนใหญ่ของสกุล Shigella

- S. Typhi และ S. arizonae สามารถให้อาณานิคมที่คล้ายกันมาก

- โคลิฟอร์มที่ผลิต H ₂ S เช่น Proteus และ Citrobacter จะสร้างโคโลนีที่คล้ายคลึงกับเชื้อ Salmonella ดังนั้นจึงจำเป็นต้องทำการทดสอบการระบุตัวตนทางชีวเคมี

- ต้องดำเนินการตีที่ดีเพื่อให้ได้อาณานิคมที่แยกได้ เป็นวิธีเดียวที่จะสังเกตลักษณะทั่วไปของอาณานิคมของสกุล Salmonella

ระบบประกันคุณภาพ

สำหรับการควบคุมความเป็นหมันนั้นแผ่นที่ไม่ได้ใส่ปุ๋ยจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ซึ่งคาดว่าจะไม่มีการเติบโตหรือเปลี่ยนสี

สำหรับการควบคุมคุณภาพสายพันธุ์ที่รู้จักเช่น:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212

Escherichia coli และ Shigella flexneri คาดว่าจะถูกยับยั้งบางส่วนโดยการพัฒนาโคโลนีสีน้ำตาลอมเขียวและน้ำตาลตามลำดับ ในขณะที่ Salmonellas ทั้งสองต้องมีการพัฒนาที่ดีเยี่ยมโดยมีอาณานิคมสีดำที่มีความมันวาวของโลหะและสุดท้าย Enterococcus faecalis จะต้องถูกยับยั้งโดยสิ้นเชิง

อ้างอิง

1. Wilson, W. , และ EM McV. แบลร์ การใช้กลูโคสบิสมัทซัลไฟต์เหล็กปานกลางสำหรับการแยกบีไทโฟซัสและบีโปรติอุส วารสารสุขอนามัย 2470; 26 (4), 374-391. สืบค้นจาก. jstor.org
2. D'aoust JY. ผลของสภาพการเก็บรักษาประสิทธิภาพของวุ้นบิสมัทซัลไฟต์ J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. มีให้ใน: ncbi.nlm.nih.gov
3. ห้องปฏิบัติการ IVD บิสมัท - ซัลไฟต์ agar ตาม WILSON-BLAIR 2552 มีจำหน่ายที่: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
4. Himedia Laboratories บิสมัทซัลไฟต์วุ้น. 2017 มีจำหน่ายที่: himedialabs.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
6. Morales R, de la Cruz D, Leyva G และ Ybarra M. คุณภาพทางแบคทีเรียของนมแพะดิบที่ผลิตใน Miravalles, Puebla Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54