LIA (LYSINE IRON) AGAR: รองพื้นการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025

LIA วุ้น (Lysine เหล็ก) คือการทดสอบทางชีวเคมีที่ใช้ในการระบุเชื้อแบคทีเรียของครอบครัว Enterobacteriaceae สื่อนี้สร้างขึ้นโดย Edwards และ Fife ตามสูตรของ Falkow

เดิมการทดสอบนี้เป็นน้ำซุปที่มีเปปโตนสารสกัดจากยีสต์กลูโคสแอลไลซีนโบรโมเครซอลสีม่วงและน้ำกลั่น Edwards และ Fife ได้เพิ่ม agar-agar, ferric ammonium citrate และโซเดียมไธโอซัลเฟต

การทดสอบเชิงบวกและลบสำหรับไลซีนดีคาร์บอกซิเลชัน ที่มา: คุณสมบัติภาพถ่ายและไดอะแกรมของผู้เขียน MSc. Marielsa Gil

การทดสอบโดยทั่วไปประกอบด้วยการแสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของเอนไซม์ไลซีนดีคาร์บอกซิเลสที่สามารถทำปฏิกิริยากับกลุ่มคาร์บอกซิลของกรดอะมิโนแอล - ไลซีน การปนเปื้อนของกรดอะมิโนอาจเกิดขึ้นได้เนื่องจากมีเอนไซม์ไลซีนดีอะมิเนส

นอกจากนี้องค์ประกอบของตัวกลางยังแสดงให้เห็นถึงความสามารถของแบคทีเรียบางสกุลในการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ สุดท้ายนี้ยังสามารถสังเกตการสร้างหรือไม่ของก๊าซในตัวกลาง

รากฐาน

เปปโตนและสารสกัดจากยีสต์

เช่นเดียวกับอาหารเลี้ยงเชื้อส่วนใหญ่ Lysine Iron Agar มีส่วนประกอบที่เป็นแหล่งของสารอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย ส่วนประกอบเหล่านี้แสดงด้วยสารสกัดจากเปปโตนและยีสต์

กลูโคส

ในทำนองเดียวกันวุ้นนี้มีน้ำตาลกลูโคสเป็นคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ แบคทีเรียทั้งหมดในตระกูล Enterobacteriaceae รู้จักหมักกลูโคส

ขั้นตอนนี้มีความสำคัญเนื่องจากจะต้องรับผิดชอบในการทำให้ตัวกลางเป็นกรดซึ่งเป็นเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับเอนไซม์ไลซีนดีคาร์บอกซิเลสที่มีอยู่เพื่อทำหน้าที่กับสารตั้งต้น

ในแบคทีเรียบางสกุลสามารถสังเกตการผลิตก๊าซเนื่องจากการหมักกลูโคส

ก๊าซดังกล่าวปรากฏให้เห็นเมื่อมีการกระจัดของวุ้นในท่อโดยปล่อยให้มีพื้นที่ว่างที่ด้านล่างของท่อหรือโดยการแตกของตัวกลางออกเป็นสองส่วนหรือมากกว่านั้น

L-ไลซีน

เมื่อไลซีนถูก decarboxylated แล้วจะเกิด diamine (cadaverine) และคาร์บอนไดออกไซด์ขึ้น

Decarboxylation เกิดขึ้นต่อหน้าโคเอนไซม์ไพริดอกซัลฟอสเฟต ปฏิกิริยานี้ไม่สามารถย้อนกลับได้

ตัวบ่งชี้ค่า pH (สีม่วง bromocresol)

การเปลี่ยนแปลง pH ทั้งหมดที่เกิดขึ้นในตัวกลางโดยปฏิกิริยาต่างๆจะถูกตรวจพบโดยตัวบ่งชี้ pH ของโบรโมเครซอลสีม่วง

ในแง่นี้เมื่อมีการทำให้เป็นกรดตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองและเมื่อมีการทำให้เป็นด่างตัวกลางจะกลับสู่สีม่วงหรือสีม่วงเดิม

เมื่อเกิดการปนเปื้อนของไลซีนเนื่องจากการมีเอนไซม์ไลซีนดีอะมิเนสสีแดงจะเกิดขึ้นบนพื้นผิวโดยทั่วไปในสกุล Proteus, Providencia และ Morganella บางชนิด

นี่เป็นเพราะความจริงที่ว่าในระหว่างกระบวนการขจัดสิ่งปนเปื้อนกรดอัลฟาคีโต - คาร์บอนิกจะเกิดขึ้นซึ่งทำปฏิกิริยากับแอมโมเนียมซิเตรตเมื่อมีออกซิเจนซึ่งทำให้เกิดสีดังกล่าว

เฟอร์ริกแอมโมเนียมซิเตรตและโซเดียมไธโอซัลเฟต

ในทางกลับกันแบคทีเรียที่ผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์จะเห็นได้จากการมีโซเดียมไธโอซัลเฟต (แหล่งที่มาของกำมะถัน) และเฟอร์ริกแอมโมเนียมซิเตรตซึ่งเป็นผู้พัฒนา H ₂ S.

แบคทีเรียที่มีเอนไซม์ไธโอซัลเฟตรีดักเทสมีความสามารถในการออกฤทธิ์โดยการลดโซเดียมไธโอซัลเฟตที่มีอยู่กลายเป็นซัลไฟต์และไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H ₂ S)

อย่างหลังนี้เป็นก๊าซที่ไม่มีสี แต่เมื่อทำปฏิกิริยากับเกลือของเหล็กจะเกิดเฟอรัสเมทัลลิกซัลไฟด์ซึ่งเป็นสารประกอบที่ไม่ละลายน้ำ (ตกตะกอนสีดำที่มองเห็นได้)

อย่างไรก็ตามความสามารถในการสร้าง H ₂ S ด้วยตัวกลางนี้ไม่น่าเชื่อถือมากนักเนื่องจากแบคทีเรียเชิงลบไลซีนดีคาร์บอกซิเลสบางชนิดที่สามารถผลิต H ₂ S จะไม่ก่อตัวเป็นตะกอนสีดำเนื่องจากความเป็นกรดของตัวกลางรบกวน ดังนั้นขอแนะนำให้ตรวจสอบกับสื่ออื่น ๆ ที่มีธาตุเหล็ก

การตีความการทดสอบ

ไลซีนดีคาร์บอกซิเลชัน

ควรอ่านหลอดหลังจาก 24 ชั่วโมงของการฟักตัวมิฉะนั้นอาจมีความเสี่ยงที่จะตีความปฏิกิริยาผิดพลาดโดยรายงานผลลบที่ผิดพลาด

ต้องจำไว้ว่าปฏิกิริยาแรกที่จะเกิดขึ้นคือการหมักกลูโคสดังนั้นหลอดทั้งหมดหลังจาก 10 ถึง 12 ชั่วโมงจะเปลี่ยนเป็นสีเหลือง

หากเมื่อสิ้นสุดเวลาฟักตัว (24 ชั่วโมง) พื้นหลังสีเหลืองที่มีพื้นผิวสีม่วงหรือสีม่วงปฏิกิริยาจะเป็นลบ สีม่วงของพื้นผิวสอดคล้องกับการทำให้เป็นด่างของตัวกลางโดยการใช้เปปโตน

ปฏิกิริยาเชิงบวกคือปฏิกิริยาที่ด้านล่างและพื้นผิวของหลอดเป็นสีม่วงอย่างสมบูรณ์นั่นคือมันจะกลับสู่สีเดิม

ดังนั้นผู้กำหนดความเป็นบวกของการทดสอบคือฐานหรือพื้นหลังของสื่อ หากมีข้อสงสัยเกี่ยวกับสีสามารถเปรียบเทียบกับหลอด LIA แบบไม่ฉีดเชื้อได้

การปนเปื้อนของไลซีน

ท่อที่แสดงการปนเปื้อนของไลซีนจะมีพื้นผิวสีน้ำตาลแดงและพื้นหลังสีเหลือง (กรด) หรือสีแดงอมแดงทั้งหลอด

ปฏิกิริยานี้ถูกตีความว่าเป็นลบสำหรับไลซีนดีคาร์บอกซิเลชัน แต่เป็นบวกสำหรับการกำจัดไลซีน

ปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดและตีความบนขอบหน้าปัด

การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H

ปฏิกิริยาเชิงบวกจะสังเกตได้จากการปรากฏตัวของตะกอนสีดำในตัวกลางทั้งหมดหรือบางส่วน โดยปกติจะอยู่ระหว่างขอบของมุมเอียงและฐาน

หากการตกตะกอนเกิดขึ้นทั่วทั้งท่อจะไม่เปิดเผยปฏิกิริยาอื่น ๆ ที่เกิดขึ้นตรงกลาง

บันทึกผลลัพธ์

เมื่อตีความผลการทดสอบจะได้รับการบันทึกดังนี้:

ขั้นแรกให้อ่านมุมเอียงจากนั้นด้านล่างหรือบล็อกจากนั้นจึงทำการผลิต H ₂ S และสุดท้ายคือการผลิตก๊าซ

ตัวอย่าง: K / A + (-) ซึ่งหมายความว่า:

• K: กรอบอัลคาไลน์ (สีม่วง)
• ตอบ: พื้นหลังที่เป็นกรด (สีเหลือง) เช่นปฏิกิริยาดีคาร์บอกซิเลชันเชิงลบและการปนเปื้อนเชิงลบ
• +: การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์
• (-): ไม่มีแก๊ส

การจัดเตรียม

หนัก 35 กรัมของวุ้นเหล็กไร้น้ำไลซีนปานกลางและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร

ตั้งไฟจนวุ้นละลายหมดโดยปล่อยให้เดือดประมาณหนึ่งนาทีคนบ่อยๆ กระจายของกลาง 4 มล. ลงในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาฝ้าย

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที นำออกจากหม้อนึ่งและปล่อยให้ยืนทำมุมเพื่อให้ฐานลึกและเอียงสั้น

เก็บในตู้เย็น 2-8 ° C ปล่อยให้มันอุ่นขึ้นก่อนที่จะหว่านเชื้อแบคทีเรีย

สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีม่วงอมแดง

pH สุดท้ายของตัวกลางที่เตรียมไว้คือ 6.7 ± 0.2

ตัวกลางเปลี่ยนเป็นสีเหลืองที่ pH 5.2 หรือน้อยกว่าและเป็นสีม่วงที่ pH 6.5 ขึ้นไป

การประยุกต์ใช้งาน

การทดสอบนี้ร่วมกับการทดสอบทางชีวเคมีอื่น ๆ ใช้สำหรับการระบุแบคทีเรียในวงศ์ Enterobacteriaceae

สื่อถูกเพาะด้วยห่วงตรงหรือเข็มเจาะหนึ่งหรือสองรูที่ด้านล่างของท่อจากนั้นพื้นผิวของตัวกลางจะถูกทำคะแนนเป็นฟันปลา

ฟักตัวเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 35-37 ° C ในแอโรบิค หากจำเป็นให้ฟักเป็นเวลา 24 ชั่วโมงต่อไป

ส่วนใหญ่มีประโยชน์ในการแยกความแตกต่างของสายพันธุ์ Citrobacter แลคโตสลบจาก Salmonellas sp

ที่มา: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina

อ้างอิง

1. Mac Faddin J. (2003). การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก 3rd ed. กองบรรณาธิการ Panamericana บัวโนสไอเรส. อาร์เจนตินา.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
4. Britannia Laboratories ไลซีนเหล็กวุ้น 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants 2550. มีจำหน่ายที่: bd.com
6. ห้องปฏิบัติการ Valtek Medium LIA 2009 มีจำหน่ายที่: andinamedica.com