วุ้น Hektoenหรือ Hektoen enteric agar สื่อที่เป็นของแข็งเป็นเลือกและวัฒนธรรมที่แตกต่างกัน มันถูกสร้างขึ้นที่สถาบัน Hektoen โดย King และ Metzger สำหรับการแยกเชื้อแบคทีเรีย enteropathogenic ของสกุล Shigella และ Salmonella
สื่อประกอบด้วยโปรตีโอสเปปโตน, สารสกัดจากยีสต์, เกลือน้ำดี, แลคโตส, ซูโครส, ซาลิซิน, โซเดียมไธโอซัลเฟต, โซเดียมคลอไรด์, ซิเตรตเหล็ก, แอมโมเนียมซิเตรต, โบรโมไทมอลบลู, กรดฟุคซินและวุ้น สูตรนี้ทำให้สามารถแยกความแตกต่างของสกุล Shigella และ Salmonella จากแบคทีเรียที่เหลือที่สามารถเจริญเติบโตในอาหารชนิดนี้ได้
A. Virgin Hektoen agar B. วุ้นปั้นจั่น ที่มา: Flickr.com/ ผู้อัปโหลดต้นฉบับคือ Philippinjl ที่ French Wikipedia
แม้ว่าจะมีสื่ออื่น ๆ ที่มีหน้าที่เหมือนกับวุ้น Hektoen แต่ก็มีข้อได้เปรียบมากกว่าเมื่อเทียบกับสื่ออื่น ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อคุณต้องการกู้คืนสายพันธุ์ Shigella
สายพันธุ์ของทั้งสองเพศทำให้เกิดปัญหาระบบทางเดินอาหารอย่างรุนแรงในมนุษย์เนื่องจากการบริโภคอาหารที่ปนเปื้อน ดังนั้นการส่งผ่านทางอุจจาระ - ทางปาก นั่นคือเหตุผลที่การใช้วุ้น Hektoen ส่วนใหญ่ระบุไว้ในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของตัวอย่างอุจจาระและอาหาร
รากฐาน
Hektoen Agar มีเปปโตนและสารสกัดจากยีสต์เป็นแหล่งของสารอาหารซึ่งเป็นองค์ประกอบที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาจุลินทรีย์
อย่างไรก็ตามมันยังมีเกลือน้ำดีที่ออกฤทธิ์โดยการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียบางชนิดโดยเฉพาะแกรมบวกและแกรมลบบางชนิด ด้วยเหตุนี้จึงถือเป็นสื่อที่เลือกได้
ในทางกลับกันวุ้นของ Hektoen เป็นตัวกลางที่แตกต่างกัน คุณสมบัตินี้เกิดจากการมีคาร์โบไฮเดรดที่สามารถหมักได้เช่นแลคโตสซูโครสและซาลิซินร่วมกับระบบตัวบ่งชี้ pH ซึ่งแสดงด้วยโบรโมไทมอลบลูและกรดฟุคซิน
แบคทีเรียทั้งหมดที่สามารถเจริญเติบโตบนอาหารที่ไม่ได้อยู่ในสกุล Salmonella และ Shigella จะพัฒนาอาณานิคมของปลาแซลมอนหรือสีส้มยกเว้นสกุล Proteus สาเหตุนี้เกิดจากการหมักของคาร์โบไฮเดรตอย่างน้อยหนึ่งชนิดซึ่งทำให้ตัวกลางเป็นกรดซึ่งจะทำให้ตัวบ่งชี้ pH เปลี่ยนไป
ในส่วนของมันสกุล Shigella และ Salmonella ไม่สามารถหมักคาร์โบไฮเดรตใด ๆ ที่มีอยู่ได้โดยใช้เพียงเปปโตนเป็นแหล่งพลังงานซึ่งทำให้ตัวกลางเป็นด่างดังนั้นอาณานิคมของพวกมันจึงมีสีเขียวอมฟ้า
แบคทีเรียที่สามารถสร้างไฮโดรเจนซัลไฟด์ (ก๊าซไม่มีสี) สามารถแยกแยะได้ในสื่อนี้ โซเดียมไธโอซัลเฟตทำหน้าที่เป็นแหล่งของกำมะถันในขณะที่เหล็กซิเตรตเป็นผู้พัฒนา สารประกอบทั้งสองทำให้เกิดการตกตะกอนสีดำของเหล็กซัลไฟด์ที่แสดงปฏิกิริยา
การตกตะกอนสีดำที่อยู่ตรงกลางของอาณานิคมที่มีรัศมีโปร่งใสรอบ ๆ ทำให้มีลักษณะเป็นตาปลา ลักษณะนี้แสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของสกุล Salmonella
ในที่สุดโซเดียมคลอไรด์จะรักษาสมดุลออสโมติกและวุ้นจะให้ความสม่ำเสมอของของแข็งกับตัวกลาง
การจัดเตรียม
หนัก 76 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร เขย่าส่วนผสมแรง ๆ แล้วพักไว้ 10 ถึง 15 นาที สามารถอุ่นและต้มโดยให้มีการเคลื่อนไหวแบบหมุนจนกว่าจะละลายทั้งหมด สื่อนี้ไม่ได้ผ่านการนึ่งฆ่าเชื้อ
เมื่อตัวกลางถึงอุณหภูมิประมาณ 45 ° C ปริมาตร 20 มล. จะถูกเทลงในจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อโดยตรง
วุ้นได้รับอนุญาตให้แข็งตัว ในเวลานั้นพวกเขาพร้อมสำหรับการใช้งาน ขอแนะนำให้ใช้ทันที หากไม่สามารถทำได้ให้เก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้
ควรนำจานออกจากตู้เย็นล่วงหน้าก่อนเพาะเมล็ดเพื่อนำไปไว้ในอุณหภูมิห้อง
pH ของตัวกลางควรเป็น 7.5 ± 0.2 สีของตัวกลางที่ขาดน้ำเป็นสีม่วงและตัวกลางที่เตรียมไว้มีสีน้ำตาลอมเขียว
ใช้
แนะนำให้ใช้วุ้น Hektoen สำหรับการค้นหาแบคทีเรียของสกุล Shigella และ Salmonella ในตัวอย่างอุจจาระและอาหาร
ความเป็นไปได้ในการแยกเชื้อแบคทีเรียเหล่านี้จะเพิ่มขึ้นอย่างมากหากตัวอย่างก่อนหน้านี้อุดมไปด้วยน้ำซุปชนิดพิเศษเช่นน้ำซุปซีลีไนต์น้ำซุปซีสตีนซีลีไนต์น้ำซุปเตตระไธโอเนตเป็นต้น
หัวเชื้อต้องแข็งแรงและการหว่านทำได้โดยการสตรีม แผ่นจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงในแอโรบิค
แนะนำให้ฟักเป็นเวลา 48 ชั่วโมงเนื่องจากลักษณะของโคโลนีชัดเจนกว่าสำหรับการตีความและความแตกต่างในเวลานี้
ระบบประกันคุณภาพ
ในการควบคุมคุณภาพของสื่อนี้จะใช้สายพันธุ์แบคทีเรียที่ผ่านการรับรองเช่น Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 และ Shigella sonnei ATCC 25931
ผลที่คาดว่าจะได้รับมีดังนี้: Salmonella typhimurium และ Salmonella enteritidis ควรพัฒนาโคโลนีสีเขียวแกมน้ำเงินโดยมีหรือไม่มีศูนย์สีดำ ในขณะที่สายพันธุ์ Shigella จะเติบโตเป็นอาณานิคมสีเขียวอมฟ้า
นอกจากนี้ยังสามารถรวมสายพันธุ์ของ Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 และ Staphylococcus aureus ATCC 25923
ในกรณีเหล่านี้ลักษณะที่สังเกตได้มีดังต่อไปนี้: E. coli และ K. pneumoniae จะพัฒนาอาณานิคมของปลาแซลมอนสีส้มในตัวกลางนี้โดยมีการตกตะกอนที่มีสีเดียวกันอยู่รอบตัว ในขณะที่ Proteus จะพัฒนาอาณานิคมสีน้ำเงิน - เขียวโดยมีหรือไม่มีศูนย์ดำ
แม้ว่าจะต้องยับยั้งเชื้อ S. aureus และ E. faecalis แต่ในบางครั้ง E. faecalis ก็สามารถเจริญเติบโตเป็นอาณานิคมสีเหลืองขนาดเล็กมาก
ในทางกลับกันเนื่องจากสื่อนี้ไม่ได้ผ่านการนึ่งฆ่าเชื้อจึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องประเมินความเป็นหมันของตัวกลาง ดังนั้นจากการเตรียมแต่ละชุดควรบ่มแผ่นที่ไม่ได้ใส่ปุ๋ยหนึ่งถึงสองแผ่นที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิค
เห็นได้ชัดว่าไม่มีการเติบโตใด ๆ ในจาน
ข้อ จำกัด
- สายพันธุ์ Proteus สามารถพัฒนาได้ในสื่อนี้และลักษณะของอาณานิคมของพวกมันอาจสับสนกับสายพันธุ์ Salmonella หรือ Shigella ด้วยเหตุนี้อาณานิคมที่น่าสงสัยใด ๆ จึงต้องได้รับการยืนยันด้วยการทดสอบทางชีวเคมี
- จำเป็นต้องควบคู่ไปกับการใช้สารนี้ร่วมกับวุ้นอื่น ๆ ที่เลือกน้อยเพราะหากพบจุลินทรีย์ที่มีความเข้มข้นต่ำก็อาจไม่พัฒนาในอาหารชนิดนี้
- อย่าให้ความร้อนสูงเกินไปในระหว่างการเตรียมเนื่องจากความร้อนที่มากเกินไปจะทำให้องค์ประกอบของตัวกลางเปลี่ยนไป
- โดยปกติอาณานิคมของแลคโตสที่หมักซัลโมเนลลาอาจปรากฏขึ้นซึ่งอาจไม่มีใครสังเกตเห็น
อ้างอิง
- ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia วุ้นลำไส้ Hektoen Wikipedia สารานุกรมเสรี 13 มีนาคม 2019, 23:38 UTC. ดูได้ที่: .wikipedia.org / เข้าถึง 16 มีนาคม 2019
- BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar) 2556 ดูได้ที่: bd.com
- Britannia Laboratories Hektoen Enteric Agar. 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- ห้องปฏิบัติการ Difco Francisco Soria Melguizo วุ้นเฮกโต่น. มีจำหน่ายที่: f-soria.es
- คู่มือ Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar พิมพ์ครั้งที่ 2. มีให้ใน: bd.com/europe