วุ้นแป้งข้าวโพด: พื้นหลังการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา

วุ้นข้าวโพดเป็นอาหารแข็งวัฒนธรรมอำนาจทางโภชนาการต่ำมีประโยชน์สำหรับการถ่ายเชื้อของเชื้อราบางอย่างและแสดงให้เห็นถึง chlamydospores ในสายพันธุ์ของ Candida albicans ที่ซับซ้อน ในภาษาอังกฤษเรียกว่า Corn Meal Agar

อาหารเม็ดข้าวโพดธรรมดามีองค์ประกอบที่เรียบง่ายมากประกอบด้วย cornmeal วุ้นและน้ำ เนื่องจากมีระดับโภชนาการต่ำจึงเหมาะอย่างยิ่งที่จะใช้ในการบำรุงรักษาสายพันธุ์ของเชื้อราในระยะเวลาปานกลางโดยเฉพาะเชื้อราดำ

A. การแสดงกราฟของ Candida albicans Complex บนวุ้นแป้งข้าวโพด B. Chlamydospores ของ Candida albicans Complex ที่มองเห็นภายใต้กล้องจุลทรรศน์ซึ่งเกิดขึ้นจากวุ้นข้าวโพด ที่มา: A. GrahamColm / B. โดย: CDC / Dr. William Kaplan, มารยาท: ห้องสมุดภาพสาธารณสุข

การสร้างสปอร์ของ Candida albicans complex เป็นที่นิยมในสื่อนี้หากเพิ่ม 1% ของ Tween 80 ในระหว่างการเตรียมวุ้น การก่อตัวของหนองในเทียมเป็นลักษณะเฉพาะของสัตว์ชนิดนี้และเป็นเพียงพันธุ์เดียวที่มีผลต่อมนุษย์

มีสายพันธุ์อื่น ๆ ที่ก่อตัวเป็นหนองในเทียม แต่ไม่น่าจะส่งผลกระทบต่อมนุษย์เช่น Candida australis ที่มีอยู่ในมูลนกเพนกวินหรือ C. clausenii ซึ่งเป็น saprophyte ที่ไม่ค่อยพบ ในทำนองเดียวกันโดยเฉพาะอย่างยิ่งสายพันธุ์ C. stellatoidea และ C. tropicalis สามารถสร้างพวกมันได้

ในทางกลับกันการเติมน้ำตาลกลูโคสลงในอาหารข้าวโพดช่วยให้การสร้างเม็ดสีในสายพันธุ์ Trichophytom rubrum

สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่ามีเชื้อราที่ไม่ก่อตัวเป็น hyphae หรือ pseudohyphae ใน cornmeal agar เช่น Cryptococcus neoformans ซึ่งแตกต่างจากสกุลอื่น ๆ

สามารถทำวุ้นข้าวโพดที่บ้านได้ในห้องปฏิบัติการหรือใช้ในเชิงพาณิชย์ก็ได้

รากฐาน

Cornmeal เป็นสารตั้งต้นวุ้นเป็นสารทำให้แข็งตัวและน้ำเป็นตัวทำละลาย

วุ้นข้าวโพดสามารถเสริมด้วย tween 80 (sorbitan monooleate หรือ polysorbate polyester 80) สารประกอบนี้ช่วยลดแรงตึงผิวของตัวกลางเนื่องจากมีพลังในการทำให้เป็นอิมัลชัน

นอกจากนี้ยังสร้างสภาพแวดล้อมที่ไม่เป็นมิตรที่ยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์ที่เกินจริงและกระตุ้นการเจริญเติบโตของ hyphae นอกจากนี้ยังสนับสนุนการผลิตหนองในเทียม หลังพิจารณาโครงสร้างของความต้านทาน โครงสร้างนี้ช่วยในการระบุสายพันธุ์ Candida albicans

ในส่วนของมันกลูโคสในตัวกลางนี้จะเพิ่มความสามารถในการสร้างเม็ดสีของเชื้อราบางชนิด

ควรสังเกตว่าอาหารเม็ดข้าวโพดที่มีน้ำตาลกลูโคสไม่เป็นประโยชน์สำหรับการสาธิต chlamydospores ใน Candida albicans complex

การจัดเตรียม

การเตรียมวุ้นข้าวโพดแบบโฮมเมด

ชั่งแป้งข้าวโพดสีเหลือง 47 กรัมละลายในน้ำกลั่น 500 มล. ความร้อน 60 ºCในขณะที่กวนส่วนผสมเป็นเวลาประมาณ 1 ชั่วโมง จากนั้นกรองด้วยผ้ากอซและผ้าฝ้ายหรืออาจกรองอีกครั้งโดยส่งผ่านกระดาษกรอง Whatman No. 2

เติมน้ำกลั่นในปริมาตร 1,000 มล. ใส่วุ้น 17 กรัมตั้งไฟจนละลาย นึ่งเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ121ºC

เสิร์ฟในจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อ เก็บในตู้เย็น

สีของตัวกลางที่เตรียมไว้จะเป็นสีขาวและมีลักษณะเป็นก้อน

หากคุณต้องการเตรียมแป้งข้าวโพดที่มีน้ำตาลกลูโคสในการเตรียมที่อธิบายไว้ข้างต้นให้เพิ่มกลูโคส 10 กรัม

วุ้นแป้งข้าวโพดเชิงพาณิชย์

หนัก 17 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ส่วนผสมสามารถอุ่นเขย่าเบา ๆ ให้ละลายหมด ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ121ºCที่ 15 ปอนด์เป็นเวลา 15 นาที

เทลงในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ ปล่อยให้แข็งตัว กลับด้านและเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ อุณหภูมิก่อนใช้

pH ควรอยู่ที่ 6.0 ± 0.2 ที่ 25 ºC

วุ้นแป้งข้าวโพดผสมทวี 80

เพื่อให้เป็นไปตามมาตรฐาน ISO 18416 ต้องเตรียมวุ้นข้าวโพดดังนี้:

หนัก 65 กรัมต่อลิตรและเติม Tween 80 10 มล. ต้มต่อไปอีกสักครู่จนละลายระวังอย่าให้ร้อนมากเกินไป ฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ121ºCเป็นเวลา 15 นาที

วุ้นแป้งข้าวโพดผสมน้ำตาลกลูโคส

เพื่อปรับปรุงพลังโคโลนีของโคโลนี Trichophyton rubrum และแยกความแตกต่างจาก T. mentagrophytes สามารถเพิ่มกลูโคส 0.2% ลงในสูตรดั้งเดิมได้ คุณไม่จำเป็นต้องมี Tween 80 เนื่องจากกลูโคสจะยับยั้งการสร้างหนองในเทียม

ใช้

โดยส่วนใหญ่การใช้วุ้นข้าวโพดมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาสายพันธุ์ Candida ซึ่งช่วยในการระบุตัวตนของพวกมันผ่านการสังเกตลักษณะของ chlamydospores ในสายพันธุ์ albicans นั่นคือการใช้วุ้นนี้เป็นวิธีเสริมในการระบุยีสต์เหล่านี้

ทั้งสายพันธุ์ saprophytic และสายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคสามารถพัฒนาบนวุ้นนี้ได้ แต่แต่ละรูปแบบมีลักษณะโครงสร้างเส้นใย ตัวอย่างเช่นสายพันธุ์ของสกุล Torulopsis ไม่สร้างไมซีเลียมและแพร่พันธุ์โดยบลาสโตโคนิเดียเท่านั้น

ในทำนองเดียวกันสายพันธุ์ Trichosporon และ Geotrichum ผลิตอาร์โทรโคนิเดียบนวุ้นข้าวโพดและบางครั้งก็ยากที่จะแยกแยะระหว่างชนิดหนึ่งกับอีกชนิดหนึ่ง

Arthroconidia ของสกุล Geotrichum ผลิตส่วนขยายของ hyphae ที่มีลักษณะคล้ายไม้ฮ็อกกี้

นอกจากนี้การผลิตเม็ดสีโดยใช้วุ้นแป้งข้าวโพดที่เสริมด้วยกลูโคสยังมีประโยชน์ในการระบุ Trichophytom rubrum

หว่าน

โคโลนี Candida ที่น่าสงสัยที่ได้รับในอาหารเลี้ยงเชื้อหลัก - วุ้น Sabouraud - จากตัวอย่างทางคลินิกเครื่องสำอางดินและอื่น ๆ ได้รับการเพาะเลี้ยงย่อยในวุ้นแป้งข้าวโพด ตัวกลางถูกเพาะและบ่มที่ 22 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง ระยะฟักตัวอาจยาวขึ้นได้หากจำเป็น

การสาธิต Chlamydospore

เพื่อจุดประสงค์นี้วุ้นแป้งข้าวโพดที่มี Tween 80 จะต้องฉีดวัคซีนโดยใช้เทคนิค Dalmau วิธีนี้ประกอบด้วยการจับส่วนหนึ่งของอาณานิคมที่สงสัยด้วยที่จับแพลตตินัมและทำการตัดขนานกันสามอันตรงกลางโดยให้ที่จับอยู่ที่45º ควรแยกบาดแผลโดยระยะห่างกัน 1 ซม.

ต่อจากนั้นวัตถุคลุมที่ถูกเผาก่อนหน้านี้จะถูกวางลงบนริ้วที่หว่านไว้ในลักษณะที่คลุมครึ่งหนึ่งและอีกอันจะถูกเปิดออก

บ่มแผ่นเพาะที่อุณหภูมิ 30 ° C เป็นเวลา 48-72 ชั่วโมงจากนั้นตรวจดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์ผ่านใบปิด

การบำรุงรักษาสายพันธุ์ของเชื้อรา

สำหรับการบำรุงรักษาสายพันธุ์แผ่นที่เพาะและปลูกจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็น (4 ถึง 8 ºC) ด้วยวิธีนี้สามารถใช้งานได้หลายสัปดาห์และใช้เพื่อการเรียนการสอนหรือการวิจัย

ระบบประกันคุณภาพ

สำหรับการควบคุมความเป็นหมันแผ่นจะถูกบ่มโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนที่อุณหภูมิห้องคาดว่าจะไม่มีการเติบโตหรือเปลี่ยนสี

สำหรับการควบคุมคุณภาพสามารถหว่านสายพันธุ์ที่รู้จักเช่น Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763

ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือการยับยั้งเชื้อ S. aureus และ E. coli บางส่วน ในขณะที่คาดว่าจะมีการเติบโตที่น่าพอใจในสายพันธุ์ที่เหลือ

Aspergillus niger เติบโตโดยมีอาณานิคมสีดำและมีสปอร์ในเวลาฟักตัวประมาณ 5 วัน

อาณานิคมของยีสต์ Candida albicans ที่มีการผลิตหนองในเทียม

Saccharomyces cerevisiae ผลิตเซลล์ยีสต์ขนาดใหญ่

ข้อ จำกัด

ตะกอนสีเหลืองก่อตัวขึ้นที่ด้านล่างของแผ่นซึ่งไม่ควรสับสนกับอาณานิคม

อ้างอิง

ห้องปฏิบัติการนีโอเจน Corn Meal Agar. มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
Microkit อาหารเลี้ยงเชื้อ. Corn Meal Agar. มีจำหน่ายที่: Medioscultivo.com
Linares M, Solís F. Yeast Identification Guide ดูได้ที่: http: //www.guia.revibero
Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. สาธารณสุข, 2545; 19 (4): 206-208. มีจำหน่ายที่: Scielo.com
Casas-Rincón G. Mycology ทั่วไป 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. เวเนซุเอลาการากัส
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
Castillo E. การศึกษาเปรียบเทียบวิธีการในระดับมหภาคและด้วยกล้องจุลทรรศน์สำหรับการแยกและการรับรู้สกุล Candida Colombian Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. มีจำหน่ายที่: Ciencias.unal.edu.co

วุ้นแป้งข้าวโพด: พื้นหลังการเตรียมและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2025