วุ้น Endoหรือ Endo กลางเป็นสื่อที่เป็นของแข็งแตกต่างและมีระดับของวัฒนธรรมการคัดสรรบาง สูตรดั้งเดิมถูกสร้างขึ้นโดย Endo ในปี 1904 เพื่อแยกความแตกต่างของการหมักแลคโตสจากแบคทีเรียที่ไม่ผ่านการหมัก ในขั้นต้นได้รับการออกแบบมาเพื่อการแยกเชื้อ Salmonella typhi แต่ต่อมาวัตถุประสงค์ของสื่อได้หันไปหาโคลิฟอร์ม
หลักการของ Endo Agar ยังคงอยู่ แต่สูตรของมันมีการเปลี่ยนแปลงนับไม่ถ้วนในช่วงหลายปีที่ผ่านมา ปัจจุบันตัวกลางประกอบด้วยการย่อยในกระเพาะอาหารของเนื้อเยื่อสัตว์แลคโตสไดโปตัสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟตโซเดียมซัลไฟต์ฟูซินพื้นฐานและวุ้น
ตอบ: Virgin Endo Agar B: Endo Agar ที่เพาะไว้ตรงกลางวุ้นคุณจะสังเกตเห็นความแวววาวของโลหะของสายพันธุ์ E. coli ที่มา: A: Strolch1983 / B: LenkaM
การใช้สื่อหลักนั้นเชื่อมโยงกับการแยกและความแตกต่างของแบคทีเรียแกรมลบที่อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae และตระกูลใกล้เคียงอื่น ๆ
เป็นเวลานานแล้วที่มีการใช้ในการตรวจหาโคลิฟอร์มในตัวอย่างน้ำนมและอาหาร แต่ในปัจจุบันการใช้สื่อนี้ถูกแทนที่โดยผู้อื่นที่มีหน้าที่คล้ายกัน อย่างไรก็ตามห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาบางแห่งใช้วุ้นนี้ในการแยกเชื้อ Enterobacteriaceae จากตัวอย่างต้นกำเนิดทางคลินิก
รากฐาน
Endo agar มีเปปโตนที่ทำหน้าที่เป็นแหล่งของกรดอะมิโนไนโตรเจนคาร์บอนและพลังงานซึ่งจำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่ไม่ต้องการ
ในทางกลับกันลักษณะที่เลือกเล็กน้อยของวุ้นนั้นมาจากการเติมโซเดียมซัลไฟต์และฟูซินพื้นฐาน ส่วนประกอบทั้งสองบางส่วนหรือทั้งหมดยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่
อักขระที่แตกต่างกันนั้นได้รับจากการมีอยู่ของคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ซึ่งในกรณีนี้คือแลคโตสและฟูซินพื้นฐานซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ pH
แบคทีเรียแกรมลบที่เติบโตบนวุ้นนี้และสามารถหมักแลคโตสได้จะสร้างอาณานิคมสีชมพูที่แข็งแรง การก่อโรคของ Escherichia coli การก่อตัวของอาณานิคมสีแดงเข้มที่มีความมันวาวของโลหะสีเขียวอมรุ้ง เนื่องจากการผลิตกรดจากการหมักคาร์โบไฮเดรตสูง
ควรสังเกตว่าตัวกลางรอบ ๆ อาณานิคมจะเปลี่ยนเป็นสีชมพูเข้ม ในขณะที่แท่งแกรมลบที่ไม่ผ่านการหมักแลคโตสจะก่อให้เกิดโคโลนีสีชมพูอ่อนคล้ายกับขนาดกลางหรือไม่มีสี
ไดโปแตสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟตจะปรับสมดุล pH ของตัวกลางและวุ้นเป็นส่วนประกอบที่ให้ความสม่ำเสมอของของแข็ง
การจัดเตรียม
วุ้นเอนโด
ชั่งน้ำหนักของตัวกลางที่ขาดน้ำ 41.5 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ใส่ส่วนผสมให้ร้อนด้วยการกวนบ่อย ๆ จนส่วนผสมละลายหมด ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C ที่ความดัน 15 ปอนด์เป็นเวลา 15 นาที
เมื่อนำออกจากหม้อนึ่งให้ปล่อยให้เย็นลงที่อุณหภูมิประมาณ 45-50 ° C เขย่าส่วนผสมให้เป็นเนื้อเดียวกันก่อนเสิร์ฟ เท 20 มล. ลงในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ
ปล่อยให้จานแข็งตัวกลับด้านและเก็บไว้ใน plaquero หรือห่อด้วยกระดาษสีเข้มก่อนเก็บในตู้เย็น เป็นสิ่งสำคัญมากในการป้องกันสื่อที่เตรียมไว้จากแสงโดยตรง แนวทางปฏิบัติที่ดีที่สุดคือเตรียมจำนวนเงินที่แน่นอนที่คุณต้องการ
หากเก็บไว้ในตู้เย็นควรปล่อยให้จานอุ่นก่อนใช้
pH ของตัวกลางควรอยู่ระหว่าง 7.2 ถึง 7.6 และสีของตัวกลางที่เตรียมไว้จะเป็นสีชมพูอ่อน
ตัวแปรวุ้น M-Endo
มี Endo agar (m-Endo) อีกรุ่นหนึ่งที่เป็นไปตามสูตรของ McCarthy, Delaney และ Grasso ซึ่งมีสารประกอบมากกว่าและแตกต่างกันไปในรูปแบบของการเตรียม
ตัวแปรนี้ประกอบด้วย: แลคโตส, ทริปโตส, การย่อยด้วยเอนไซม์ของเคซีน, การย่อยด้วยเอนไซม์ของเนื้อเยื่อสัตว์, โซเดียมคลอไรด์, โพแทสเซียมฟอสเฟต dibasic, โซเดียมซัลไฟต์, สารสกัดจากยีสต์, โพแทสเซียมฟอสเฟตเชิงเดี่ยว, ฟูซินพื้นฐาน, โซเดียมดีออกซีโคเลต, ลอริลซัลเฟต โซเดียมและวุ้น
ในกรณีนี้จะต้องชั่งน้ำหนักตัวกลางที่ขาดน้ำ 51 กรัมและแขวนลอยในน้ำกลั่น 1 ลิตรที่มีเอทานอล 20 มล.
ความร้อนเล็กน้อยในขณะที่กวนจนตัวกลางละลายหมด ไม่ควรทำให้ร้อนเกินไปและไม่ควรนึ่งฆ่าเชื้อ เมื่อส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกันให้เสิร์ฟในจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อและปล่อยให้แข็งตัว
ใช้
ในบางประเทศยังคงใช้ในการนับโคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระในตัวอย่างอาหารและน้ำโดยเฉพาะการมีเชื้อ Escherichia coli เป็นตัวบ่งชี้หลักของการปนเปื้อนในอุจจาระ
M-Endo agar ได้รับการแนะนำโดย American Public Health Association (APHA) สำหรับการตรวจสอบและควบคุมโปรแกรมการฆ่าเชื้อโรคและบำบัดน้ำเสียรวมทั้งในการประเมินคุณภาพน้ำดื่ม
วิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายคือการกรองแบบเมมเบรนหลังจากเติมแต่งตัวอย่างด้วยน้ำซุปลอริลซัลเฟตเป็นเวลา 2 ถึง 4 ชั่วโมง
นอกจากนี้ยังสามารถใช้แทนวุ้น EMB ในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหารและน้ำโดยเทคนิคจำนวนที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด (MPN) โดยเฉพาะในขั้นตอนการยืนยันที่สมบูรณ์เพื่อยืนยันการมีอยู่ของ E. coli จากน้ำซุป EC ที่ขุ่นมัว
ระบบประกันคุณภาพ
มีการหว่านสายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักหรือได้รับการรับรองเพื่อประเมินคุณภาพของกลุ่มวุ้น Endo ที่เตรียมไว้
ในบรรดาสายพันธุ์ที่สามารถนำมาใช้เพื่อจุดประสงค์นี้ ได้แก่ Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, ATCCo Proteus 1115CC700 .
สายพันธุ์นี้ได้รับการเพาะจากความอ่อนเพลียและถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิค
ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือ:
- สำหรับ Escherichia coli: อาณานิคมสีแดงเข้มมีความมันวาวของโลหะ
- สำหรับเชื้อ E. cloacae และ K. pneumoniae โคโลนีควรเป็นมิวคอยด์สีชมพู
- ในกรณีของ S. typhimurium, S. flexneri และ P. mirabilis โคโลนีมักมีสีชมพูซีดหรือไม่มีสี
- ในที่สุด E. faecalis คาดว่าจะถูกยับยั้งบางส่วนดังนั้นการเจริญเติบโตของมันจะต้องไม่ดีโดยมีโคโลนีสีชมพูขนาดเล็กและแข็งแรงมาก
ข้อ จำกัด
-Endo medium มีพลังในการคัดเลือกต่ำดังนั้นจึงเป็นไปได้ว่าจุลินทรีย์แกรมบวกบางชนิดเช่น Staphylococcus, Enterococcus และแม้แต่ยีสต์ก็สามารถเจริญเติบโตได้
- แบคทีเรียชนิดอื่นที่ไม่ได้อยู่ในวงศ์ Enterobacteriaceae สามารถพัฒนาได้ในอาหารชนิดนี้เช่น Pseudomonas sp และ Aeromonas sp ลักษณะเฉพาะของสายพันธุ์เหล่านี้คืออาณานิคมที่ไม่มีสีผิดปกติ
- สื่อที่เตรียมไว้นี้มีความไวต่อแสงมากดังนั้นการเปิดรับแสงเป็นเวลานานจะทำให้ระบบไฟแสดงสถานะเสื่อมสภาพและทำลายสื่ออย่างไม่สามารถกลับคืนมาได้
- ส่วนประกอบของตัวกลางถือเป็นสารก่อมะเร็งดังนั้นควรหลีกเลี่ยงการสัมผัสโดยตรง
- ตัวกลางที่ขาดน้ำจะดูดความชื้นได้มากและต้องเก็บไว้ในภาชนะเดิมที่อุณหภูมิห้องปิดให้สนิทและในสภาพแวดล้อมที่แห้ง
อ้างอิง
- BD Laboratories เอนโดวุ้น. 2556 ดูได้ที่: bd.com
- ห้องปฏิบัติการนีโอเจน เอ็มเอนโดวุ้น. มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
- เอนโดวุ้น. Wikipedia สารานุกรมเสรี 7 ก.ย. 2560, 08:27 น. UTC. 28 ก.พ. 2019 22:55 น. ดูได้ที่: en.wikipedia
- ห้องปฏิบัติการ MercK วุ้นเอนโด. 2019 มีจำหน่ายที่: merckmillipore.com
- ห้องปฏิบัติการเอกสารทางเทคนิค M – Endo Agar LES 2558 ดูได้ที่: liofilchem.net