วุ้น EMBเป็นเลือกกลางและค่าใช้สำหรับแยกวัฒนธรรมที่แข็งแกร่งของแกรมเชิงลบแบคทีเรียโดยเฉพาะอย่างยิ่ง Enterobacteriaceae และแบคทีเรียแกรมลบอื่น ๆ ต้องการมาก เป็นที่รู้จักกันในชื่อย่อ EAM ซึ่งย่อมาจาก eosin-methylene blue
สื่อนี้สร้างขึ้นโดย Holt-Harris และ Teague ในปีพ. ศ. 2459 ประกอบด้วยเปปโตนแลคโตสซูโครสไดโปแทสเซียมฟอสเฟตวุ้นอีโอซินเมทิลีนบลูและน้ำ คล้ายกับ MacConkey Agar มากโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อใช้ Modified EMB Agar ของ Levine ซึ่งไม่มีซูโครส
ความมันวาวของ Escherichia coli บนวุ้น EMB ที่มา: Carmen Moreno Gonzálezจาก Wikimedia Commons
ในความเป็นจริงห้องปฏิบัติการแต่ละห้องจะตัดสินใจว่าจะทำงานร่วมกับห้องใดห้องหนึ่งเนื่องจากห้องปฏิบัติการเหล่านี้มีหน้าที่เหมือนกันแม้ว่าในทางชีวเคมีจะแตกต่างกัน
มันยังมีข้อเสียเปรียบเช่นเดียวกับวุ้น MacConkey แบบคลาสสิกในแง่ของการจับกลุ่มการผลิตโดยสกุล Proteus ดังนั้นเพื่อหลีกเลี่ยงปรากฏการณ์นี้ความเข้มข้นของวุ้นสามารถเพิ่มขึ้นได้ถึง 5%
รากฐาน
Selective
วุ้น EMB ได้รับการคัดเลือกอย่างละเอียดเนื่องจากมีสีย้อมอนิลีน (eosin และ methylene blue) ซึ่งทำหน้าที่เป็นสารยับยั้งป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่และแท่งแกรมลบที่จุกจิก
อย่างไรก็ตามวุ้นนี้มีข้อเสียตรงที่แบคทีเรียแกรมบวกบางชนิดสามารถต้านทานการมีอยู่ของสารยับยั้งและเติบโตเป็นอาณานิคม punctate ที่ไม่มีสีขนาดเล็กเช่น Enterococcus faecalis และ Staphylococcus บางชนิด
ยีสต์บางชนิดสามารถเจริญเติบโตได้เช่น Candida albicans complex ซึ่งจะให้โคโลนีสีชมพูขนาดเล็กมาก Chlamydospores สามารถพัฒนาจากยีสต์นี้ได้หากตัวอย่างมีเมล็ดลึก
ที่แตกต่างกัน
ในทางกลับกันวุ้น EMB ยังเป็นตัวกลางที่แตกต่างกันเนื่องจากสีย้อมเหล่านี้รวมกัน (eosin และ methylene blue) มีคุณสมบัติในการตกตะกอนที่ pH ที่เป็นกรดดังนั้นจึงทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้การผลิต
ดังนั้นแบคทีเรียที่หมักแลคโตสหรือซูโครสที่อ่อนแอจะสร้างอาณานิคมสีม่วงภายใน 24 ถึง 48 ชั่วโมง ตัวอย่างเช่นสกุล Klebsiella, Enterobacter และ Serratia
แบคทีเรียเหล่านั้นที่หมักแลคโตสอย่างรุนแรงเช่น Escherichia coli หรือซูโครสเช่น Yersinia enterocolitica หรือ Proteus penneri ก่อตัวเป็นตะกอนสีเขียว - ดำทำให้มีลักษณะเป็นโลหะมันวาวในสายพันธุ์เหล่านี้
ควรสังเกตว่าถ้าใช้ EMB levine medium (ไม่มีซูโครส) Yersinia enterocolitica และ Proteus penneri จะสร้างโคโลนีที่ชัดเจน
แบคทีเรียที่ไม่ได้หมักแลคโตสหรือซูโครสจะได้รับการหล่อเลี้ยงจากการมีอยู่ของเปปโตนซึ่งให้กรดอะมิโนและไนโตรเจนที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียและสร้างอาณานิคมที่ชัดเจน ตัวอย่างเช่นสกุล Salmonella และ Shigella เป็นต้น
ในทำนองเดียวกันสิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าสกุล Acinetobacter สามารถนำเสนออาณานิคมสีฟ้าลาเวนเดอร์ได้แม้ว่าจะไม่ใช่ตัวหมักแลคโตสหรือซูโครส แต่มีคุณสมบัติในการตรึงเมทิลีนบลูไว้ในผนังเซลล์ สิ่งนี้สามารถเกิดขึ้นได้กับแบคทีเรียออกซิเดชั่นอื่น ๆ
การจัดเตรียม
ตัวกลางที่ขาดน้ำดั้งเดิมคือสีเบจอ่อน
ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อนี้ต้องชั่งน้ำหนักและแขวนอาหารกลางที่ขาดน้ำ 36 กรัมในขวดที่มีน้ำกลั่นหนึ่งลิตร
หลังจากปล่อยให้ส่วนผสมพักเป็นเวลา 5 นาทีแล้วให้นำขวดไปยังแหล่งความร้อนโดยผสมแรง ๆ และตลอดเวลาจนเดือดและละลายหมด
ต่อจากนั้นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ละลายแล้วจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อโดยใช้หม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
เมื่อหมดเวลาจะถูกนำออกจากหม้อนึ่งและปล่อยให้ยืนสั้น ๆ จากนั้นยังคงอุ่น (45-50 ° C) วุ้น 15-20 มล. จะถูกเสิร์ฟในจานเลี้ยงเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อ สื่อควรเป็นสีน้ำเงินกระดาษลิตมัส
หลังจากเสิร์ฟจานให้เปิดฝาทิ้งไว้เล็กน้อยจนวุ้นเย็นลงเล็กน้อย จากนั้นพวกมันจะถูกปกคลุมและอนุญาตให้แข็งตัวได้อย่างสมบูรณ์ จากนั้นจะจัดเรียงในที่จับจานแบบกลับด้านและเก็บไว้ในตู้เย็น (8 ° C) จนกว่าจะใช้
ขั้นตอนนี้ควรทำในเครื่องดูดควันแบบลามินาร์หรือหน้าเตา Bunsen เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน
สิ่งสำคัญคือต้องจำไว้ว่าโรงเรือนการค้าแต่ละแห่งจะระบุจำนวนที่จะชั่งเพื่อเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ
pH สุดท้ายของตัวกลางต้องเป็น 7.2 ± 0.2
การประยุกต์ใช้งาน
สื่อนี้ใช้ในการหว่านปัสสาวะและอุจจาระหรือสิ่งส่งตรวจทางคลินิกทุกประเภทโดยเฉพาะอย่างยิ่งหากสงสัยว่ามีแบคทีเรียแกรมลบที่ไม่จุกจิกเช่นบาซิลลีที่อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae ซึ่งเจริญเติบโตได้ดีในอาหารชนิดนี้
แบคทีเรีย Enteropathogenic ของสกุล Shigella และ Salmonella มีความโดดเด่นด้วยอาณานิคมสีเหลืองอำพันที่ไม่มีสีหรือเล็กน้อย
บาซิลลัสที่ไม่ใช่แลคโตสหมักอื่น ๆ เช่น Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter และอื่น ๆ ก็เติบโตเช่นกัน
ในทำนองเดียวกันสื่อนี้มีประโยชน์อย่างมากในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหารและน้ำเนื่องจากเหมาะอย่างยิ่งสำหรับขั้นตอนการยืนยันที่สมบูรณ์ของการกำหนดโคลิฟอร์มนั่นคือเพื่อยืนยันการมีอยู่ของ E. coli จากน้ำซุป EC ที่ขุ่นจาก ของเทคนิคตัวเลขที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด (MPN)
ระบบประกันคุณภาพ
ในการตรวจสอบว่าอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมสดทำงานได้ดีสามารถปลูกสายพันธุ์ควบคุมเพื่อสังเกตลักษณะของโคโลนีและตรวจสอบว่าให้ตามที่คาดไว้
สำหรับสิ่งนี้สามารถใช้สายพันธุ์ ATCC หรือเชื้อ E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa และแบคทีเรียแกรมบวกบางชนิดเช่น S. aureus
อีโคไลคาดว่าจะสร้างโคโลนีสีน้ำเงิน - ดำที่พัฒนามาอย่างดีพร้อมกับความมันวาวของโลหะสีเขียว ในขณะที่ Enterobacter aerogenes และ Klebsiella sp ควรให้อาณานิคมของเมือกสีน้ำเงิน - ดำที่พัฒนามาอย่างดี
ในทางกลับกัน Salmonella typhimurium และ Shigella flexneri จะต้องพัฒนาอาณานิคมขนาดใหญ่ไม่มีสีหรือมีสีเหลืองอำพันเล็กน้อย
ในที่สุดสกุล Pseudomonas aeruginosa ก็เติบโตเป็นอาณานิคมที่ไม่มีสีที่มีขนาดไม่สม่ำเสมอในขณะที่แบคทีเรียแกรมบวกควรถูกยับยั้งโดยสิ้นเชิงหรือเติบโตอย่างเบาบางโดยมีอาณานิคมขนาดเล็กมาก
ความคิดสุดท้าย
บางครั้งการฆ่าเชื้อทำให้เมทิลีนบลูลดลงแสดงสีส้มปานกลาง เพื่อให้เมทิลีนบลูออกซิไดซ์และกู้คืนสีม่วงต้องผสมอย่างเบามือจนกว่าสีจะหายดี
นอกจากนี้หลังจากการฆ่าเชื้อแล้วสีย้อมอาจตกตะกอนดังนั้นจึงควรผสมให้เข้ากันก่อนเสิร์ฟอาหาร Petri
อ้างอิง
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B และVelázquez O. 2009. เทคนิคการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหาร. 2nd ed. คณะเคมี UNAM. เม็กซิโก
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. ลักษณะและการแพร่กระจายของสายพันธุ์ Escherichia coli ที่อาจทำให้เกิดโรคที่แยกได้จากไก่เนื้อจากฟาร์มสัตว์ปีกในเปรู Rev. สืบสวน สัตว์แพทย์ เปรู 2555 23 (2): 209-219. มีจำหน่ายที่: scielo.org
- Laboratorios Conda SA Eosin และ Methylene Blue Agar 2553. มีจำหน่ายที่: condalab.com
- Britannia Laboratories Levine EMB (พร้อม Eosin และ Methylene Blue) ปี 2554 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
- BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), ดัดแปลง 2556 ดูได้ที่: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินาบรรณาธิการ Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA