CZAPEK AGAR: เหตุผลการเตรียมการใช้งานและข้อ จำกัด - ชีววิทยา - 2025

Czapek (CZA) เป็นสื่อที่เป็นของแข็งเลือกออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียและเชื้อรา saprophytic มันถูกสร้างขึ้นโดยนักพฤกษศาสตร์ฟรีดริชโยฮันน์ฟรานซ์เชซาเปกชาวโปแลนด์และอาเธอร์เวย์แลนด์ด็อกซ์นักเคมีชาวอเมริกัน ด้วยเหตุนี้วุ้นนี้จึงเรียกอีกอย่างว่า Czapek-Dox medium

ตัวกลางเดิมเป็นของเหลว แต่ต่อมามีการเติมวุ้นเพื่อให้เป็นตัวกลางที่เป็นของแข็ง Czapek medium ประกอบด้วยโซเดียมไนเตรตไบโพแทสเซียมฟอสเฟตแมกนีเซียมซัลเฟตโพแทสเซียมคลอไรด์เฟอร์รัสซัลเฟตซูโครสวุ้นและน้ำกลั่น

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus ที่มา: A. Medmyco / B. ภาพ: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

pH ของ Czapek agar คือ 7.3 แต่มีตัวแปรที่เติมกรดแลคติก 10% โดย pH ยังคงอยู่ที่ 3.5 สื่อกรดนี้ใช้สำหรับการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ที่เป็นกรด

ในทางกลับกันอาคารพาณิชย์บางแห่งได้ปรับเปลี่ยนองค์ประกอบของ Czapek agar โดยการเปลี่ยนแมกนีเซียมซัลเฟตและไบโพแทสเซียมฟอสเฟตด้วยกลีเซอโรฟอสเฟต การปรับเปลี่ยนนี้จะป้องกันการตกตะกอนของแมกนีเซียมฟอสเฟตที่สังเกตได้จากสูตรดั้งเดิม ในทำนองเดียวกันยังมีอีกตัวแปรหนึ่งที่เพิ่มสารสกัดจากยีสต์

ในที่สุด Czapek agar ได้รับการแนะนำโดย American Public Health Association APHA สำหรับการศึกษา Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp และ Penicillium sp สายพันธุ์เหล่านี้มีลักษณะเป็นจุลินทรีย์สิ่งแวดล้อมและเชื้อโรคฉวยโอกาส

รากฐาน

สื่อนี้มีซูโครส คาร์โบไฮเดรตนี้ทำหน้าที่เป็นแหล่งคาร์บอนในขณะที่โซเดียมไนเตรตเป็นแหล่งไนโตรเจน แต่แตกต่างจากสื่ออื่น ๆ ไนโตรเจนที่ให้เป็นอนินทรีย์

ด้วยเหตุนี้สารอาหาร Czapek จึงถูกพิจารณาว่าเป็นสารคัดสรรเนื่องจากมีเพียงจุลินทรีย์ที่สามารถใช้สารประกอบอนินทรีย์เป็นแหล่งไนโตรเจนเพียงแหล่งเดียวเท่านั้นที่สามารถเจริญเติบโตได้

ในฐานะที่เป็นสารควบคุมของออสโมลาริตีของตัวกลางคือไบโพแทสเซียมฟอสเฟต ในส่วนของพวกมันแมกนีเซียมซัลเฟตโพแทสเซียมคลอไรด์และเฟอร์รัสซัลเฟตเป็นแร่ธาตุที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ saprophytic (ที่มีชีวิตอิสระ) สูตรนี้เป็นการตกตะกอนของแมกนีเซียมฟอสเฟต

ในที่สุด agar-agar คือสารประกอบที่ให้ความสม่ำเสมอของของแข็งกับตัวกลางและน้ำเป็นตัวทำละลายสำหรับส่วนประกอบทั้งหมด

ด้วยสูตรวุ้น Czapek ที่ปรับเปลี่ยนแล้วจะไม่มีการก่อตัวของตะกอนและช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการเจริญเติบโตของเชื้อราบางชนิด

ความเป็นกรดที่สูงมากของ Acid Czapek Agar ทำให้เป็นอาหารที่มีการคัดเลือกมากขึ้นทำให้สามารถเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่เป็นกรดซึ่งสามารถใช้ไนโตรเจนอนินทรีย์ได้ ในขณะเดียวกัน Czapek-yeast agar ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของเห็ดบางชนิด

การจัดเตรียม

Czapek-Dox ขนาดกลาง

ชั่งอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำออก 49 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่น ใช้ความร้อนจนเดือด เขย่าส่วนผสมบ่อย ๆ จนละลายหมด

-Czapek วุ้นเวดจ์

กระจายส่วนผสมที่ละลายแล้วลงในหลอดและนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที เมื่อนำออกจากหม้อนึ่งให้ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันก่อนวางท่อและปล่อยให้แข็งตัว

-Czapek แผ่นวุ้น

นึ่งส่วนผสมที่ละลายแล้วที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาทีแล้วทิ้งไว้ให้เย็นถึง 50 ° C ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันแล้วเท 20 มล. ลงในจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อ ปล่อยให้แข็งตัวกลับด้านและเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้

pH ควรอยู่ที่ 7.3 ± 0.2 สีของตัวกลางที่ขาดน้ำเป็นสีขาวและตัวกลางที่เตรียมไว้เป็นสีเหลืองอำพันอ่อนมีเมฆเล็กน้อยเนื่องจากมีตะกอนตกตะกอน

Czapek ปานกลางที่ pH เป็นกรด

เตรียมตามที่อธิบายไว้แล้ว แต่เติมกรดแลคติก 10% ที่ผ่านการฆ่าเชื้อ 10 มล. สำหรับอาหารแต่ละลิตรที่เตรียมไว้ สื่อ Czapek ที่ปรับเปลี่ยนควรอยู่ที่ pH 3.5 ± 0.2

ดัดแปลงสื่อ Czapek

ชั่งของกลางที่ขาดน้ำ 45.4 กรัมแล้วละลายในน้ำ 1 ลิตร ส่วนที่เหลือของการเตรียมการจะเหมือนกับที่อธิบายไว้ข้างต้น สีของตัวกลางที่ขาดน้ำเป็นสีขาวและตัวกลางที่เตรียมไว้จะเป็นสีขาว pH สุดท้ายของตัวกลางคือ 6.8 ± 0.2

Czapek- ยีสต์ปานกลาง

เรียกอีกอย่างว่า Czapek Yeast Extract Agar (CYA) ประกอบด้วยองค์ประกอบของวุ้น Czapek แบบคลาสสิกและสารสกัดจากยีสต์

ใช้

สื่อ Czapek ใช้ในการค้นหาจุลินทรีย์ saprophytic ในตัวอย่างของดินผักธัญพืชอากาศแมลงและอื่น ๆ

Czapek agar ที่ pH เป็นกรดใช้สำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่เป็นกรดในขณะที่ Czapek agar ที่ผ่านการดัดแปลงนั้นมีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการสร้าง chlamydospores ในกลุ่ม Candida albicans complex

ในที่สุด Czapek-yeast agar ก็มีประโยชน์อย่างมากสำหรับการแยกเชื้อ Aspergillus และ Penicillium

หว่าน

-Czapek วุ้น

ในการค้นหา Actinomycetes ในดินให้ดำเนินการดังต่อไปนี้: ตัวอย่างได้รับการบำบัดด้วยน้ำฟีนอลเป็นเวลา 30 นาทีจากนั้นจึงหว่านสารแขวนลอย 1 มล. ลงใน Czapek agar ฟักตัวที่ 28 ° C เป็นเวลา 5 ถึง 7 วัน

สำหรับตัวอย่างผักเมล็ดพืชและแมลงจะวางไว้บนวุ้นโดยตรง คุณยังสามารถเจือจางและเพาะเมล็ด 0.1 มล. บนผิววุ้นได้

- วุ้น Czapek ดัดแปลง

สำหรับการเพาะเมล็ดจะใช้ห่วงตรงหรือเข็มชุบด้วยไม้กวาดและวุ้นจะถูกฉีดวัคซีนโดยเจาะรูจนกว่าจะสัมผัสกับฐานของจาน ฟักตัวเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 28 ° C และตรวจดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์ด้านบนและด้านล่างของแผ่นเปลือกโลกเพื่อดูว่าหนองในเทียมก่อตัวขึ้นหรือไม่

อุณหภูมิและเวลาในการบ่ม

อุณหภูมิและเวลาในการฟักไข่จะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดของจุลินทรีย์ที่จะแยก โดยทั่วไปแผ่นจะถูกบ่มเป็นเวลาหนึ่งถึงสองสัปดาห์ในช่วงอุณหภูมิ 20 ถึง 25 ° C

อย่างไรก็ตามมีเงื่อนไขเฉพาะสำหรับบางสายพันธุ์ ตัวอย่างเช่น Aspergillus สกุลส่วนใหญ่เติบโตได้ดีที่สุดที่อุณหภูมิ 30 ° C; อย่างไรก็ตาม A. fumigatus เติบโตที่ 50 ° C

เกี่ยวกับเวลาฟักตัวหนึ่งหรือสองสัปดาห์เป็นเรื่องปกติอย่างไรก็ตาม Candida albicans สามารถพัฒนาได้ใน 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 25 ° C

ลักษณะของอาณานิคมบางส่วนบนสื่อนี้

-Penicillium atrovenetum

พัฒนาใน 12 วันของการฟักไข่ที่ 27 ° C อาณานิคมของพวกมันมีขนาดเล็ก (25 มม.)

อาณานิคมมีลักษณะที่นุ่มนวลโดยมีขอบสีขาวและมีสีเขียวอมฟ้าตรงกลางซึ่งจะเปลี่ยนเป็นสีเทาเมื่ออายุมากขึ้น ด้านหลังของโคโลนีเป็นสีส้มทำให้ตรงกลางมีสีเดียวกันเนื่องจากการผลิตเม็ดสี

- แอสเปอร์จิลลัสไนเจอร์

พัฒนาด้วยไมซีเลียมสีขาวถึงเหลืองและสปอร์สีดำ

-Candida albicans

โคโลนีสีเบจสีครีมจะพัฒนาขึ้น ในวุ้น Czapek ที่ได้รับการแก้ไขจะสร้าง chlamydospores

-Aspergillus parasiticus

ไมซีเลียมสีเขียวเข้มจะพัฒนาใน 7 วันที่ 25 ° C

ระบบประกันคุณภาพ

ในการประเมินคุณภาพของอาหารเลี้ยงเชื้อสามารถปลูกสายพันธุ์ควบคุมที่ผ่านการรับรองได้เช่น Aspergillus niger MKTA 16404 Candida albicans MKTA 10231

Aspergillus niger พัฒนาไมซีเลียมสีขาวถึงเหลืองและสปอร์สีดำในเวลาประมาณ 5 วันในขณะที่ Candida albicans จะมีการเติบโตที่น่าพอใจใน 24 ชั่วโมงของการฟักตัวที่ 25 ° C; อาณานิคมมีสีครีม

ข้อ จำกัด

การศึกษาบางชิ้นเปิดเผยว่าสำหรับการฟื้นตัวของ Actinomycetes วุ้นที่ให้ผลผลิตดีที่สุดคือวุ้นเดกซ์โตรสมันฝรั่งโดยที่ Czapek agar อยู่ในอันดับที่สอง แต่สำหรับการฟื้นตัวของ Aspergillus และ Penicillium นั้น Czapek agar เป็นวุ้นที่ให้อัตราการฟื้นตัวสูงสุด

อ้างอิง

1. Dávila M และคณะ แอคติโนมัยซีสที่เป็นปฏิปักษ์กับเชื้อราไฟโตพาโธจีนิกที่มีความสำคัญทางการเกษตร รายได้เม็กซ์ วิทยาศาสตร์. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. มีจำหน่ายที่: scielo.org
2. Luna M, Lozada Y, ข้าวสาลีÁ. การแยกสายพันธุ์ของ Aspergillus niger การผลิต ochratoxin A ในกาแฟเขียวที่เก็บไว้ (Coffea arabica) รายได้เม็กซ์ ไมค์ 2010 32: 63-68. มีจำหน่ายที่. scielo.org
3. ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia Czapek ขนาดกลาง Wikipedia สารานุกรมเสรี 13 มกราคม 2019 20:30 UTC ดูได้ที่: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. ดัดแปลง Czapek-Dox Agar มีจำหน่ายที่: condalab.com
5. Microkit อาหารเลี้ยงเชื้อ. Czapek-Dox Agar Diosponible ใน: Medioscultivo.com