- เหตุผลของวุ้น CLED
- เหตุผลสำหรับวุ้นวุ้น (Bevis)
- การประยุกต์ใช้งาน
- ตัวอย่างปัสสาวะ
- การตีความ
- ID
- การจัดเตรียม
- อ้างอิง
วุ้น CLED (Cystine-แลคโตสอิเล็คโทร-บกพร่อง) เป็นค่าอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นของแข็งที่ใช้สำหรับการวินิจฉัยการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ องค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อได้รับการออกแบบมาเพื่อการเจริญเติบโตที่ดีของเชื้อโรคในปัสสาวะและเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการหาปริมาณของหน่วยสร้างอาณานิคม (CFU)
อาหารเลี้ยงเชื้อ CLED เป็นอาหารที่ไม่มีการคัดเลือกเนื่องจากจุลินทรีย์ Gram negative และ Gram positive สามารถเจริญเติบโตได้ แต่นี่ไม่ใช่ปัญหาเนื่องจาก UTI ส่วนใหญ่เกิดจากจุลินทรีย์เพียงชนิดเดียว
วุ้นวุ้น
ในกรณีของการติดเชื้อหลายชนิดสามารถได้รับแบคทีเรียที่แตกต่างกัน 2 หรือ 3 ชนิด แต่พบได้น้อยมากและส่วนใหญ่เป็นตัวอย่างที่ปนเปื้อน
ในบรรดาแบคทีเรียแกรมลบที่สามารถเจริญเติบโตได้ในตัวกลางนี้ ได้แก่ บาซิลลัสที่อยู่ในวงศ์ Enterobacteriaceae และแบคทีเรียในลำไส้อื่น ๆ uropathogens ที่แยกได้บ่อยที่สุดในตัวอย่างปัสสาวะ ได้แก่ Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa และอื่น ๆ
ในทำนองเดียวกันแบคทีเรียแกรมบวกที่สามารถเจริญเติบโตได้ในตัวกลางนี้ ได้แก่ Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp และแม้แต่ยีสต์เช่น Candida albicans complex ก็สามารถเจริญเติบโตได้
อย่างไรก็ตามเนื่องจากองค์ประกอบทางเคมีของตัวกลางจึงไม่อนุญาตให้มีการเจริญเติบโตของเชื้อโรคทางระบบสืบพันธุ์ที่ต้องการเช่น Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis เป็นต้น
เหตุผลของวุ้น CLED
อาหารเลี้ยงเชื้อ CLED มีสารสกัดจากเนื้อสัตว์ไฮโดรไลเสตจากตับอ่อนของเคซีนและไฮโดรไลเซตของเจลาตินเป็นแหล่งพลังงาน พวกเขาให้สารอาหารสำหรับการพัฒนาของแบคทีเรียที่ไม่ต้องการ
นอกจากนี้ยังมีซีสตีนซึ่งเป็นกรดอะมิโนที่ช่วยให้โคลิฟอร์มเจริญเติบโตโดยแยกได้จากขนาดที่เล็ก
ในทำนองเดียวกันมันมีแลคโตสเป็นคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ด้วยเหตุนี้สารนี้จึงแตกต่างกัน ความสามารถในการแยกแยะแบคทีเรียที่หมักจากแบคทีเรียที่ไม่หมักแลคโตส
การหมักแบคทีเรียทำให้ pH ของตัวกลางเปลี่ยนไปโดยการผลิตกรดทำให้เกิดอาณานิคมสีเหลืองในขณะที่แบคทีเรียที่ไม่ผ่านการหมักจะไม่สร้างการเปลี่ยนแปลงในตัวกลางดังนั้นพวกมันจึงรับสีของวุ้นเดิมเป็นสีเขียว
ปฏิกิริยาการหมักจะถูกเปิดเผยเนื่องจากมีตัวบ่งชี้ pH ซึ่งในตัวกลางนี้คือโบรโมไทมอลสีน้ำเงิน
ในทางกลับกันความเข้มข้นของอิเล็กโทรไลต์ต่ำของตัวกลางจะยับยั้งการเจริญเติบโตที่รุกรานโดยทั่วไปของสกุล Proteus เรียกว่าผลจับกลุ่ม สิ่งนี้สร้างความได้เปรียบเหนือสื่ออื่น ๆ เนื่องจากช่วยให้สามารถนับ CFU ได้รวมถึงหากมีสกุล Proteus อยู่ด้วย
อย่างไรก็ตามอิเล็กโทรไลต์ที่มีความเข้มข้นต่ำจะยับยั้งการเจริญเติบโตของบางชนิดของสกุล Shigella ซึ่งเป็นข้อเสียเมื่อเทียบกับสื่ออื่น ๆ
เหตุผลสำหรับวุ้นวุ้น (Bevis)
มีตัวแปรหรือการดัดแปลงของสื่อนี้ที่ผลิตโดย Bevis ซึ่งรวมเอากรดฟุคซิน (ตัวบ่งชี้ของ Andrade) เข้าไว้ในองค์ประกอบดั้งเดิม ทำงานร่วมกับ bromothymol blue เพื่อแยกความแตกต่างของการหมักจากแบคทีเรียที่ไม่ผ่านการหมัก
ความแตกต่างระหว่างสื่อธรรมดาและสื่อดัดแปลงคือสีที่อาณานิคมใช้ ในกรณีของแบคทีเรียที่หมักแลคโตสโคโลนีจะเปลี่ยนเป็นสีส้มอมแดงและมีรัศมีสีชมพูหรือสีแดงในขณะที่ส่วนที่ไม่ได้หมักจะมีสีเทาอมฟ้า
การประยุกต์ใช้งาน
CLED agar ใช้สำหรับเพาะตัวอย่างปัสสาวะเท่านั้น การใช้สื่อนี้มักเกิดขึ้นบ่อยในห้องปฏิบัติการของยุโรปในขณะที่ในอเมริกามีการใช้น้อยกว่า
การเก็บตัวอย่างต้องเป็นไปตามพารามิเตอร์บางอย่างเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ ได้แก่ :
- ไม่ควรรับประทานยาปฏิชีวนะก่อนการสุ่มตัวอย่าง
- ควรรับประทานสิ่งแรกของปัสสาวะในตอนเช้าเนื่องจากมีความเข้มข้นมากกว่าเมื่อไม่สามารถนำตัวอย่างด้วยวิธีการรุกรานได้
- ล้างอวัยวะเพศให้ดีก่อนนำตัวอย่าง
- ทิ้งกระแสแรกของการถ่ายปัสสาวะแล้ววางภาชนะ
- เก็บปัสสาวะ 25 ถึง 30 มล. ในภาชนะปลอดเชื้อที่มีฉลากอย่างดี
- นำไปที่ห้องปฏิบัติการที่ล้อมรอบด้วยน้ำแข็งทันที
- ต้องดำเนินการภายใน 2 ชั่วโมงหลังการออกหรือแช่เย็นที่ 4 ° C เป็นเวลาสูงสุด 24 ชั่วโมง
ตัวอย่างปัสสาวะ
ตัวอย่างปัสสาวะควรเจือจาง 1:50
สำหรับการเจือจางให้ใส่ปัสสาวะของผู้ป่วย 0.5 มล. และเจือจางด้วยสารละลายทางสรีรวิทยาที่ปราศจากเชื้อ 24.5 มล.
วัดปัสสาวะเจือจาง 0.1 มล. และเกลี่ยพื้นผิวด้วยไม้พาย drigalski บนสื่อ CLED นี่เป็นวิธีการเพาะเมล็ดที่ดีที่สุดสำหรับการนับโคโลนี ด้วยเหตุนี้จึงใช้ในตัวอย่างปัสสาวะเนื่องจากผลลัพธ์ต้องแสดงเป็น CFU / ml
ในการหาจำนวนโคโลนีที่ได้รับให้ดำเนินการดังนี้: นับจำนวนโคโลนีบนจานและคูณด้วย 10 แล้วคูณด้วย 50 สิ่งนี้จะให้ปริมาณ CFU / ml ของปัสสาวะ
การตีความ
นับมากกว่า 100,000 CFU / ml- บ่งชี้การติดเชื้อในปัสสาวะ
นับต่ำกว่า 1,000 CFU / ml- - ไม่มีการติดเชื้อ
นับระหว่าง 1,000-10,000 CFU / ml-Doubtful อาจปนเปื้อนสุ่มตัวอย่างซ้ำ
ID
โคโลนีที่ปลูกในวุ้น CLED ควรมีกรัมและขึ้นอยู่กับลักษณะทางสัณฐานวิทยาของจุลินทรีย์การเพาะเลี้ยงย่อยบางอย่างจะดำเนินการ
ตัวอย่างเช่นถ้าเป็นบาซิลลัสแกรมลบก็จะหว่านลงบนวุ้น MacConkey ซึ่งการหมักหรือไม่ได้รับการยืนยันของแลคโตส นอกจากนี้ยังมีการแนบวุ้นสารอาหารเพื่อทำการทดสอบออกซิเดส
ในกรณีที่ Gram พบ Gram positive cocci สามารถเพาะเลี้ยงในวุ้นแมนนิทอลที่มีรสเค็มและในวุ้นที่มีสารอาหารได้ ในช่วงหลังจะทำการทดสอบ catalase ในที่สุดหากสังเกตเห็นยีสต์ก็จะหว่านลงบนวุ้น Sabouraud
ห้องปฏิบัติการหลายแห่งหลีกเลี่ยงการใช้ CLED medium และชอบใช้เฉพาะวุ้นเลือด MacConkey และสารอาหารในการเพาะตัวอย่างปัสสาวะ
การจัดเตรียม
ในขวดที่มีน้ำกลั่น 1 ลิตรละลายผงวุ้น 36.2 กรัม หลังจากยืน 5 นาทีให้อุ่นวุ้นที่ถูกนำกลับมาผสมให้เดือดเป็นเวลา 1 นาที
จากนั้นฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาทีในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อ เมื่อสิ้นสุดเวลาจะถูกนำออกจากหม้อนึ่งและปล่อยให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 45 ° C ต่อจากนั้นให้เสิร์ฟ 15-20 มล. ในจานเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อ
ขั้นตอนการเสิร์ฟจานจะต้องดำเนินการภายในเครื่องดูดควันแบบลามินาร์หรือหน้าเตา Bunsen เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน
จานที่เสิร์ฟจะถูกปล่อยให้แข็งตัวจัดเรียงในชั้นคว่ำและเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) จนกว่าจะใช้
pH สุดท้ายของตัวกลางที่เตรียมไว้ควรเป็น 7.3 ± 0.2
อ้างอิง
- คำแนะนำสำหรับการวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของการติดเชื้อในปัสสาวะ Chil infectol 2001 18 (1): 57-63. มีจำหน่ายที่: scielo.org
- Panchi J. การระบุตัวแทนของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะในผู้ป่วยในที่ได้รับการสวนกระเพาะปัสสาวะ 2559. ผลงานระดับปริญญาตรีเพื่อรับวุฒิปริญญาในห้องปฏิบัติการคลินิก. มหาวิทยาลัยเทคนิค Ambato เอกวาดอร์
- Britannia Laboratories CLED กลาง มีให้ที่: britanialab.com
- Renylab Laboratories คำแนะนำสำหรับการใช้งาน CLED Agar 2013 มีจำหน่ายที่: es.renylab.ind.br.
- ห้องปฏิบัติการเพาะปลูก คู่มือจุลชีววิทยาเบื้องต้น. มีจำหน่ายที่: ictsl.net
- Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. ตัวเลือกวุ้น CLED ในกิจวัตรการเพาะเลี้ยงปัสสาวะ การประเมินผลในอนาคตและเชิงเปรียบเทียบ วินิจฉัยโรคติดเชื้อ Microbiol 1992; 15 (4): 287-90.
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). จุลชีววิทยาคลินิกในทางปฏิบัติ University of Cadiz รุ่นที่ 2. บริการสิ่งพิมพ์ UCA