วุ้น cetrimideหรือ cetrimide เป็นสื่อวัฒนธรรมที่เป็นของแข็งเลือกที่ออกแบบมาสำหรับการแยกเชื้อ Pseudomonas aeruginosa มันขึ้นอยู่กับการแสดงการผลิตของเม็ดสีลักษณะเฉพาะของสายพันธุ์นี้และทำจากการดัดแปลงของ Tech agar ที่สร้างโดย King, Ward และ Raney
สูตรดั้งเดิมประกอบด้วยเกลือของแมกนีเซียมคลอไรด์โพแทสเซียมซัลเฟตการย่อยเจลาตินในตับอ่อนและวุ้น - วุ้น การปรับเปลี่ยนสูตรประกอบด้วยการเติม cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) และกลีเซอรอล
วุ้น Cetrimide ที่เพาะด้วย Pseudomonas aeruginosa ที่มา: ไบโอเทคไมเคิลจากวิกิมีเดียคอมมอนส์
Cetrimide agar มีประโยชน์สำหรับการศึกษาทางจุลชีววิทยาของตัวอย่างที่สงสัยว่ามี Pseudomonas aeruginosa ควรสังเกตว่าแบคทีเรียชนิดนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งเนื่องจากแม้ว่าจะเป็นส่วนหนึ่งของจุลินทรีย์ในสิ่งแวดล้อมปกติ แต่ก็มักมีพฤติกรรมเป็นเชื้อโรคฉวยโอกาส
ด้วยเหตุนี้หนึ่งในปัญหาที่พบบ่อยที่สุดที่เกิดจากเชื้อโรคนี้คือการติดเชื้อในโรงพยาบาลนั่นคือสิ่งที่เกิดขึ้นในสภาพแวดล้อมของโรงพยาบาลทำร้ายผู้ป่วยที่มีระบบภูมิคุ้มกันที่หดหู่
ในทางกลับกันเนื่องจากความใกล้ชิดที่จุลินทรีย์นี้มีกับความชื้นเป้าหมายที่เสี่ยงต่อการปนเปื้อนมากที่สุด ได้แก่ อุปกรณ์ช่วยหายใจยาพ่นฝอยละอองแหล่งน้ำเครื่องปรับอากาศน้ำยาฆ่าเชื้อสารละลายสบู่สารละลายฉีดแผลเปิด , สายสวน, ท่อปัสสาวะและอื่น ๆ
ในแง่นี้ cetrimide agar จึงมีประโยชน์ในการควบคุมและเพาะเลี้ยงทางจุลชีววิทยากับองค์ประกอบที่กล่าวถึงก่อนหน้านี้
รากฐาน
Cetrimide agar ขึ้นอยู่กับความสามารถของตัวกลางในการส่งเสริมการเจริญเติบโตของ P. aeruginosa กระตุ้นการสร้างเม็ดสีและยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์อื่น ๆ
คุณสมบัติเหล่านี้เกิดจากการทำงานของแต่ละส่วนประกอบ เจลาตินเปปโตนในปัจจุบันทำหน้าที่เป็นแหล่งไนโตรเจนวิตามินและแร่ธาตุ กลีเซอรอลหรือกลีเซอรีนทำงานเป็นแหล่งคาร์บอน
ในส่วนของมันนั้น cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) เป็นสารที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียอื่นที่ไม่ใช่ P. aeruginosa รวมถึงสิ่งมีชีวิตชนิดอื่นที่อยู่ในสกุลเดียวกัน
การยับยั้งเกิดขึ้นเนื่องจาก cetramide ทำหน้าที่เป็นผงซักฟอกประจุบวกจัดการเพื่อทำให้เยื่อหุ้มพลาสมาของแบคทีเรียส่วนใหญ่ไม่เสถียรยกเว้น P. aeruginosa และอื่น ๆ บางส่วนที่สามารถอยู่รอดได้
ในทางกลับกันประกอบด้วยแมกนีเซียมคลอไรด์และโพแทสเซียมซัลเฟต สารประกอบเหล่านี้กระตุ้นการแสดงออกของฟีโนไทป์ที่เกี่ยวข้องกับความสามารถของ Pseudomonas aeruginosa ในการสร้างเม็ดสีต่างๆ ได้แก่ pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin และ fluorescein สุดท้ายประกอบด้วย agar-agar ซึ่งทำให้มีความสม่ำเสมอที่มั่นคง
การตีความ
การตีความการเจริญเติบโตที่ได้รับจากวุ้นนี้มีดังต่อไปนี้:
การสังเกตโคโลนีกลมเรียบที่มีขอบปกติด้วยการผลิตสีฟ้าเขียวเขียวน้ำตาลหรือแดงรวมทั้งการปล่อยกลิ่นผลไม้ (aminoacetophenone) เป็นผลจากการสันนิษฐานว่ามีแบคทีเรียนี้อยู่ในตัวอย่างดังกล่าว
ในทางกลับกันการสังเกตเม็ดสีเขียวอมเหลืองบนโคโลนีนั้นบ่งบอกถึง P. aeruginosa เมื่อจานสัมผัสกับแสงอัลตราไวโอเลต
การเรืองแสงของอาณานิคม P. aeruginosa บนวุ้น cetrimide ภายใต้แสงอัลตราไวโอเลต
ควรสังเกตว่าแต่ละสีที่สังเกตได้เกิดจากการผลิตเม็ดสีเฉพาะ เม็ดสีเขียวอมฟ้าสอดคล้องกับการผลิตของไพโอไซยานินสีเขียวกับไพโอเวอร์ดินสีแดงถึงไพโอรูบินสีน้ำตาลถึงไพโอเมลานีนและการเรืองแสงสีเหลืองอมเขียวภายใต้แสงยูวีไปจนถึงฟลูออเรซิน
การจัดเตรียม
ชั่งของกลางที่ขาดน้ำออก 43 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่น เติมกลีเซอรอล 10 มล. นำส่วนผสมไปยังแหล่งความร้อน ปล่อยให้เดือดสักครู่จนละลายหมด
นึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ปล่อยให้ยืนเสิร์ฟในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อเมื่ออุณหภูมิประมาณ 50 ° C
อนุญาตให้แข็งตัวกลับด้านสั่งซื้อใน plaqueros และเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ ควรนำแผ่นวุ้น Cetrimide ออกจากตู้เย็นก่อนเพาะเมล็ดและปล่อยให้อยู่ในอุณหภูมิห้อง
pH สุดท้ายของตัวกลางควรเป็น 7.2 ± 0.2
สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจและสารเตรียมเป็นสีขาวขุ่น
การประยุกต์ใช้งาน
ตัวอย่างทุกชนิดที่สงสัยว่ามีเชื้อ Pseudomonas aeruginosa สามารถหว่านลงในวุ้น cetrimide ได้ ดังนั้นจึงมีประโยชน์ในทุกด้านของจุลชีววิทยา (สิ่งแวดล้อมอุตสาหกรรมคลินิกน้ำและอาหาร)
การวิเคราะห์สภาพแวดล้อมในโรงพยาบาลมีความสำคัญอย่างยิ่งและสามารถใช้มาตรการแก้ไขได้เนื่องจากจุลินทรีย์นี้เข้าถึงผู้ป่วยผ่านอุปกรณ์ที่ปนเปื้อนยาสารละลายและวัสดุสิ้นเปลืองที่ผู้ป่วยใช้
ด้วยวิธีนี้จุลินทรีย์สามารถติดเชื้อในระบบทางเดินหายใจส่วนล่างทางเดินปัสสาวะและบาดแผลของผู้ป่วยที่ได้รับภูมิคุ้มกัน
จำนวนอาณานิคมของ P. aeruginosa สามารถทำได้ในการทดสอบขีด จำกัด จุลินทรีย์
หว่าน
Cetrimide agar สามารถใช้เป็นวัฒนธรรมหลักได้ จานถูกฉีดวัคซีนที่ขอบด้านใดด้านหนึ่งและจากนั้นจะกระจายไปยังส่วนที่เหลือของจานโดยอ่อนเพลีย ตัวอย่างของเหลวสามารถหยอดเมล็ดด้วยไม้พาย drigalski
แผ่นเปลือกโลกได้รับการบ่มแบบแอโรบิคที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในการฟักตัว
ข้อ จำกัด
- ร้อยละเล็กน้อยของสายพันธุ์ Pseudomonas aeruginosas ไม่สร้าง pyocyanin ดังนั้นจึงสามารถตีความผลลบเท็จได้
- Pseudomonas บางชนิดที่มีความสำคัญทางคลินิกถูกยับยั้งในสื่อนี้
- แม้จะสังเกตลักษณะที่อธิบายไว้สำหรับ Pseudomonas aeruginosa แต่ก็ต้องได้รับการยืนยันด้วยการทดสอบระบุตัวตนเพิ่มเติม การทดสอบที่ไม่ควรพลาดคือการทดสอบออกซิเดสจะต้องให้ผลบวก
Enterobacteriaceae บางชนิดสามารถเจริญเติบโตได้ในตัวกลางนี้และพัฒนาเป็นเม็ดสีเหลือง แต่แตกต่างจาก Pseudomonas aeruginosa ตรงที่เมื่อจานถูกแสงอัลตราไวโอเลตจะไม่มีการเรืองแสง
- Serratia marcescens สามารถพัฒนาและสร้างเม็ดสีสีชมพู
- หากแผ่นที่เพาะด้วยวุ้นซีทริไมด์ถูกสัมผัสเป็นเวลาหนึ่งที่อุณหภูมิห้องสายพันธุ์ P. aeruginosa อาจสูญเสียการเรืองแสงที่สังเกตได้ภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตอย่างไรก็ตามคุณสมบัติจะกลับคืนมาได้หากนำไปบ่มอีกครั้งที่อุณหภูมิ 37 ° C
ระบบประกันคุณภาพ
สามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมเช่น: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 และ Staphylococcus aureus ATCC 25923 สามารถใช้เพื่อวิเคราะห์การทำงานที่เหมาะสมของวุ้น cetrimide
ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือ:
- การเจริญเติบโตที่ดีของ P. aeruginosa มีเม็ดสีเขียวอมฟ้าและฟลูออเรซินบวก
- S. maltophilia และ S. aureus จะถูกยับยั้งได้บางส่วน
- คาดว่า Escherichia coli จะถูกยับยั้งอย่างสมบูรณ์
อ้างอิง
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Phenotypic และลักษณะทางซีรั่มของเชื้อทางคลินิกของ Pseudomonas aeruginosa VacciMonitor 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. ฐานวุ้น Cetrimide 2014 ดูได้ที่: condalab.com
- Britannia Laboratories วุ้น Cetrimide 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- BD Laboratories BD Pseudosel agar (วุ้น Cetrimide) 2556 ดูได้ที่: bd.com
- ห้องปฏิบัติการ Francisco Soria Melguizo, CA Cetrimide agar 2552 ดูได้ที่: http://f-soria.es