- รากฐาน
- การจัดเตรียม
- การเตรียมวุ้นเอสคูลินน้ำดีแบบโฮมเมด
- การเตรียมน้ำดีเอสคูลินวุ้นจากสื่อการค้า
- การประยุกต์ใช้งาน
- หว่าน
- การตีความ
- ระบบประกันคุณภาพ
- ข้อ จำกัด
- อ้างอิง
น้ำดี esculin วุ้นเป็นเลือกและขนาดกลางค่าวัฒนธรรมที่เป็นของแข็ง ใช้เป็นการตรวจวินิจฉัยเพื่อตรวจสอบความสามารถของจุลินทรีย์บางชนิดในการเจริญเติบโตในอาหารที่มีน้ำดีและยังสลายกลูโคไซด์เอสคูลินให้เป็นเอสคูเลตินและกลูโคส
การทดสอบวินิจฉัยนี้ใช้เพื่อแยกความแตกต่างของสายพันธุ์ของ Streptococcus ที่อยู่ในกลุ่ม D (bile esculin positive) จาก Streptococcus กลุ่มอื่นที่ตอบสนองในทางลบกับการทดสอบนี้
แผ่นวุ้นน้ำดีเอสคูลินที่เพาะด้วยสายพันธุ์ Enterococcus (ทดสอบเป็นบวก) ที่มา: ไม่มีผู้เขียนที่อ่านได้โดยเครื่อง Philippinjl สันนิษฐาน (ตามการร้องเรียนการละเมิดลิขสิทธิ์)
ควรสังเกตว่า Streptococcus บางกลุ่มของกลุ่ม viridans สามารถไฮโดรไลซ์เอสคูลินได้ แต่ไม่สามารถเจริญเติบโตได้เมื่อมีน้ำดีที่ความเข้มข้น 40% ดังนั้นในสื่อนี้ปฏิกิริยาของกลุ่มนี้จึงเป็นลบ
ในทางกลับกันสารเอสคูลินของน้ำดียังมีประโยชน์สำหรับการวินิจฉัยสายพันธุ์ Listeria monocytogenes หรือ Aerococcus sp เนื่องจากจุลินทรีย์เหล่านี้เป็นน้ำดีเอสคูลินที่เป็นบวก
Esculin Bile Agar ประกอบด้วยเปปโตนสารสกัดจากเนื้อวัวน้ำดีเอสคูลินซิเตรตเหล็กวุ้นและน้ำกลั่น อาคารพาณิชย์บางแห่งมีโซเดียมเอไซด์อยู่ในองค์ประกอบของตัวกลาง
คุณสามารถเตรียมตัวกลางในห้องปฏิบัติการได้หากคุณมีสารประกอบทั้งหมดแยกกันหรือเตรียมจากตัวกลางที่ขาดน้ำทางการค้า
รากฐาน
สารเอสคูลินน้ำดีประกอบด้วยเปปโตนและสารสกัดจากเนื้อสัตว์สารประกอบทั้งสองเป็นสารอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์
นอกจากนี้ยังมีเอสคูลิน สารประกอบนี้เป็นไกลโคไซด์ที่เกิดจากการรวมตัวของโมโนแซคคาไรด์ (กลูโคส) อย่างง่ายโดยมีสารประกอบที่เรียกว่า 6,7-dihydroxycoumarin หรือ esculetin (aglucone) ซึ่งเชื่อมโยงกันด้วยพันธะ acetal หรือ glucosidic
การทดสอบขึ้นอยู่กับการแสดงว่าแบคทีเรียสามารถไฮโดรไลซิงเอสคูลินได้หรือไม่ หากสิ่งนี้เกิดขึ้นเอสคูลินจะแตกตัวเป็นเอสคูเลตินและกลูโคส Esculetina ทำปฏิกิริยากับเหล็กที่มีอยู่ในตัวกลางกลายเป็นสารประกอบสีน้ำตาลเข้มเกือบดำ
ซึ่งหมายความว่าเฟอร์ริกซิเตรตทำหน้าที่เป็นตัวพัฒนาปฏิกิริยา ลักษณะนี้ทำให้ Bile Esculin Agar เป็นสื่อที่แตกต่างกัน
ในส่วนของมันน้ำดีเป็นตัวยับยั้งที่ป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิดดังนั้นแบคทีเรียก่อนที่จะแยกเอสคูลินจะต้องสามารถเติบโตได้ในที่ที่มีน้ำดี ดังนั้นจึงถือว่าสื่อนี้เลือกได้
แบคทีเรียที่สามารถพัฒนาได้ในสภาพแวดล้อมนี้ส่วนใหญ่เป็นแบคทีเรียที่อาศัยอยู่ในสภาพแวดล้อมของลำไส้
ในแง่นี้ บริษัท การค้าบางแห่งจึงเพิ่มโซเดียมเอไซด์ลงในตัวกลางเพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมลบในลำไส้เพิ่มการคัดเลือกของตัวกลางสำหรับการเจริญเติบโตของ Streptococcus
ในที่สุดวุ้นจะให้ความสม่ำเสมอของของแข็งกับตัวกลางและน้ำเป็นตัวทำละลายของสารประกอบ
การจัดเตรียม
การเตรียมวุ้นเอสคูลินน้ำดีแบบโฮมเมด
ในการชั่งน้ำหนัก:
เปปโตน 5 กรัม
สารสกัดจากเนื้อสัตว์ 3 กรัม
น้ำดีเนื้อ 40 กรัม
เอสคูลิน 1 กรัม
ซิเตรตเหล็ก 0.5 กรัม
วุ้น 15 กรัม
น้ำกลั่น 1,000 มล
ในกรณีที่เติมโซเดียมเอไซด์จะต้องชั่ง 0.25 กรัม / ลิตรและเติมลงในส่วนผสม
ละลายส่วนประกอบในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรให้ความร้อนจนส่วนผสมละลายหมด แจกจ่าย 5 มล. ลงในหลอดทดลองขนาด 16 x 125 มม. นึ่งที่ 121 ° C แรงดัน 15 ปอนด์เป็นเวลา 15 นาที
นำออกจากหม้อนึ่งแล้วเอียงท่อบนฐานรองรับเพื่อให้วุ้นแข็งตัวในปากขลุ่ยกว้าง
เก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ นำไปไว้ในอุณหภูมิห้องก่อนหว่าน
นอกจากนี้ยังสามารถเตรียมแผ่นวุ้นเอสคูลินน้ำดี ในกรณีนี้ส่วนผสมทั้งหมดจะถูกนึ่งในขวดและต่อมาจึงแจกจ่ายในจานเพาะเชื้อที่ปราศจากเชื้อ ปล่อยให้แข็งตัวแล้วเก็บในตู้เย็น
pH ของตัวกลางต้องเป็น 6.6 ± 0.2
การเตรียมน้ำดีเอสคูลินวุ้นจากสื่อการค้า
ชั่งน้ำหนักตามจำนวนที่ระบุโดยเม็ดมีด สิ่งนี้อาจแตกต่างกันไปในแต่ละบ้านธุรกิจ จากนั้นให้ดำเนินการเช่นเดียวกับขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้น
pH ของตัวกลางควรเป็น 6.6 ± 0.2 สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเบจอ่อนและตัวกลางที่เตรียมไว้เป็นสีเหลืองอำพัน
สารเอสคูลินน้ำดีในเชิงพาณิชย์ ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil.
การประยุกต์ใช้งาน
สารเอสคูลินน้ำดีส่วนใหญ่จะใช้เพื่อแยกความแตกต่างของกลุ่ม D Streptococcus (น้ำดีเอสคูลินเป็นบวก) จากกลุ่ม Streptococcus ที่เหลือ (น้ำดีเอสคูลินลบ)
การรวมการทดสอบการเจริญเติบโตของน้ำซุปไฮเปอร์ซัลกับการทดสอบน้ำดีเอสคูลินสามารถระบุกลุ่ม D Streptococcus พิเศษที่เรียกว่า Enterococcus
Streptococcus กลุ่มพิเศษนี้อยู่ในกลุ่ม D ของสกุลที่กล่าวมาข้างต้นและมีความสามารถในการไฮโดรไลซิสเอสคูลินในที่ที่มีน้ำดีเช่นเดียวกับสมาชิกที่เหลือของกลุ่ม D แต่พวกมันยังสามารถพัฒนาในตัวกลางที่มีการเติมเกลือ (BHI ที่มีคลอไรด์ของ 6.5% โซเดียม) คุณสมบัติที่สร้างความแตกต่าง
ดังนั้น Streptococci ที่ไฮโดรไลซ์เอสคูลินน้ำดี แต่ไม่เติบโตในน้ำซุปที่มีฤทธิ์ลดน้ำตาลจึงเรียกว่าสเตรปโทคอกคัสที่ไม่ใช่เอนเทอโรคอกคัส
หว่าน
เติมเชื้อโดยเฉพาะอย่างยิ่งจากน้ำซุป Todd-Hewitt ที่บริสุทธิ์ตลอด 24 ชั่วโมง
หยด 2 หยดลงบนพื้นผิวของตัวกลางด้วยปิเปตของปาสเตอร์แล้วเกลี่ยให้ทั่วด้วยห่วงทองคำขาว
บ่มที่อุณหภูมิ 35 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงในขณะที่ถึงเวลาฟักตัวสามารถตรวจสอบได้ว่ามีปฏิกิริยาเชิงบวกหรือไม่ หากเมื่อสิ้นสุดเวลาปฏิกิริยายังคงเป็นลบก็สามารถฟักตัวได้นานถึง 72 ชั่วโมง
การตีความ
ปฏิกิริยาเชิงบวก : ลักษณะของสีน้ำตาลเข้มเกือบดำในปากของขลุ่ย (ในกรณีของการทดสอบหลอด) หรือการทำให้วุ้นเป็นสีดำรอบ ๆ อาณานิคม (ในกรณีของการทดสอบแผ่น)
ปฏิกิริยาเชิงลบ : ไม่มีการดำของตัวกลางเกิดขึ้นหรือมีลักษณะเป็นสีดำน้อยกว่าครึ่งหนึ่งของหลอดหลังจากฟักตัว 72 ชั่วโมง ในทางกลับกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียในตัวกลางที่ไม่มีสีดำควรถือเป็นการทดสอบเชิงลบ
ระบบประกันคุณภาพ
ในการประเมินคุณภาพของตัวกลางต้องมีสายพันธุ์ Enterococcus faecalis ATCC 29212 เป็นตัวควบคุมเชิงบวกและสายพันธุ์ Streptococcus ที่ไม่อยู่ในกลุ่ม D เป็นตัวควบคุมเชิงลบ
ข้อ จำกัด
- สื่อที่ไม่มีโซเดียมเอไซด์ช่วยให้การเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมลบในลำไส้ บางคนก็ดำตรงกลางได้
- อาคารพาณิชย์บางแห่งเพิ่มความเข้มข้นของน้ำดีในระดับต่ำ (10%) และด้วยเหตุนี้ Streptococcus บางตัวที่ไม่ได้อยู่ในกลุ่ม D จึงสามารถพัฒนาในเอสคูลินขนาดกลางและไฮโดรไลซ์ซึ่งอาจทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการตีความ
อ้างอิง
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Mac Faddin J. (2003). การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก 3rd ed. กองบรรณาธิการ Panamericana บัวโนสไอเรส. อาร์เจนตินา.
- แล็บ. บริทาเนีย. น้ำดีเอสคูลินกับวุ้นอะไซด์ 2558 ดูได้ที่: britanialab.com
- “ น้ำดีเอสคูลินวุ้น” Wikipedia สารานุกรมเสรี 22 ส.ค. 2560 เวลา 17:30 น. UTC 22 เม.ย. 2019, 17:35 น. es.wikipedia.org
- Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2558 ดูได้ที่: bd.com
- ห้องปฏิบัติการนีโอเจน น้ำดีเอสคูลินวุ้น มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com