วุ้น Biggyเป็นเลือกสื่อที่เป็นของแข็งและวัฒนธรรมที่แตกต่างกัน ได้รับการออกแบบมาเพื่อแยกและช่วยในการระบุสายพันธุ์ Candida หลัก ชื่อ BIGGY มาจากตัวย่อในภาษาอังกฤษ Bismuth Glucose Glycine Yeast
สูตรดั้งเดิมถูกสร้างขึ้นโดย Nickerson ซึ่งเป็นสาเหตุที่สื่อนี้เรียกว่า Nickerson agar ปัจจุบันประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์ไกลซีนเดกซ์โทรสแอมโมเนียมซิเตรตบิสมัทซิเตรตโซเดียมซัลไฟต์และวุ้น
การแสดงกราฟิกของวุ้น BIGGY ที่มา: Flickr.com
วุ้น BIGGY เป็นสูตรสำหรับความแตกต่างของสายพันธุ์ Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei และ C. kefyr แต่สายพันธุ์อื่น ๆ ก็เจริญเติบโตเช่น Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum และ Saccharomyces cerevisiae
มีความไวและความจำเพาะที่ดีอย่างไรก็ตามเมื่อเปรียบเทียบกับสื่ออื่น ๆ ที่มีฟังก์ชั่นคล้ายกันมันอยู่ในอันดับที่สองซึ่งถูกแซงโดย CHROMagar ด้วยเหตุนี้ห้องปฏิบัติการหลายแห่งจึงชอบอย่างหลังแม้ว่าจะมีราคาแพงกว่ามากก็ตาม
ควรชัดเจนว่าการใช้วุ้น BIGGY รวมถึงวิธีการอื่นที่คล้ายคลึงกันจะช่วยระบุตัวตนที่น่าสันนิษฐานได้อย่างรวดเร็ว แต่ไม่เคยยืนยันได้ ดังนั้นจึงต้องมีวิธีการระบุตัวตนเพิ่มเติม ตัวอย่างเช่นระบบการระบุ Vitek 32 และ API 20
รากฐาน
BiGGY agar ถือเป็นตัวกลางคัดเลือกบางส่วนสำหรับการแยกยีสต์โดยเฉพาะสกุล Candida แม้ว่าสกุลอื่น ๆ สามารถเจริญเติบโตได้
นอกจากนี้ยังเป็นสื่อที่แตกต่างเนื่องจากขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องลักษณะที่แตกต่างกันจะสังเกตได้ในแง่ของลักษณะสีรูปร่างและขนาด ถือเป็นตัวกลางโครโมจินิกเนื่องจากการพัฒนาของสีที่แตกต่างกันในอาณานิคม
สีของอาณานิคมของยีสต์เกิดจากการที่มีบิสมัทซัลไฟต์อยู่ในวุ้น Nickerson ตระหนักว่ายีสต์ในสกุล Candida ทำการลดบิสมัทซัลไฟต์ภายนอกเซลล์โดยเปลี่ยนเป็นบิสมัทซัลไฟด์ (สารสีดำที่ไม่ละลายน้ำ) ส่งผลให้อาณานิคมสีน้ำตาลอ่อนถึงดำ
วุ้นนี้มีสารสกัดจากยีสต์และเดกซ์โทรสซึ่งเป็นแหล่งของสารอาหารพื้นฐานและพลังงานสำหรับการพัฒนายีสต์ Glycine เป็นสารกระตุ้นการเจริญเติบโตของยีสต์ในขณะที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียบางชนิด
ในแง่เดียวกันนี้แอมโมเนียมและบิสมัทซิเตรตรวมทั้งโซเดียมซัลไฟต์ทำหน้าที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย Agar เป็นตัวแทนที่ให้ความสม่ำเสมอของของแข็งปานกลาง
การจัดเตรียม
ชั่งอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำ 45 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร เขย่าส่วนผสมให้ร้อนเดือดประมาณ 1 นาทีจนละลายหมด อาหารเลี้ยงเชื้อนี้ไม่สามารถนึ่งฆ่าเชื้อได้
เมื่อเย็นลงที่ประมาณ 45 ° C ในอ่างน้ำให้เท 20 มล. ลงบนจาน Petri ที่ปราศจากเชื้อ
สีของตัวกลางที่ขาดน้ำคือสีเทาอมเหลืองและเตรียมไว้เป็นเจลสีขาวอมเหลืองซึ่งสามารถสังเกตเห็นการตกตะกอนเล็กน้อย
pH ควรเป็น 6.8 ± 0.2
ควรเก็บสื่อที่เตรียมไว้ในตู้เย็น (4 ° C) และป้องกันไม่ให้ถูกแสง เนื่องจากเป็นสื่อที่ไม่สามารถนึ่งได้จึงควรใช้โดยเร็วที่สุด แนะนำให้ใช้ก่อน 3 วันหลังการเตรียม
ใช้
แผ่นเปลือกโลกจะถูกบ่มที่อุณหภูมิห้อง (25 ° C) เป็นเวลา 24, 48 และ 72 ชั่วโมงและสามารถขยายเวลาฟักตัวได้ถึง 5 วัน
Candida แต่ละสายพันธุ์มีการพัฒนาลักษณะบางอย่างที่ทำให้พวกมันแตกต่างจากพันธุ์อื่น ผู้ผลิตสื่ออธิบายลักษณะต่อไปนี้สำหรับแต่ละสายพันธุ์:
-Candida albicans complex: พัฒนาบนวุ้นนี้เป็นโคโลนีที่เรียบกลมสีน้ำตาลหรือสีดำโดยมีขอบไมซีเลียลเล็กน้อย ยกเว้นว่าสีเข้มจะไม่กระจายไปตรงกลาง
-Candida tropicalis: โคโลนีสว่างขนาดเล็กสีน้ำตาลเข้มมีจุดศูนย์กลางสีดำและขอบไมซีเลียลเล็กน้อย สีเข้มจะกระจายไปทางตรงกลางซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของสายพันธุ์นี้หลังจากฟักตัวเป็นเวลา 72 ชั่วโมง
-Candida krusei พัฒนาอาณานิคมขนาดใหญ่แบนและดูหยาบโดยมีขอบสีน้ำตาลถึงดำ
-Candida parakrusei: อาณานิคมขนาดกลางส่วนใหญ่หยาบแบน สีอาจแตกต่างกันไปตั้งแต่สีน้ำตาลแดงเข้มจนถึงน้ำตาลแดงอ่อน ขอบของอาณานิคมมีไมซีเลียมสีเหลืองกว้างขวาง
-Candida stellatoidea: พัฒนาขนาดกลางอาณานิคมแบนสีน้ำตาลเข้มเกือบดำ การพัฒนา Mycelial นั้นหายากมาก
การศึกษาของYücesoyและ Marol ในปี 2546 แสดงให้เห็นว่าสาร CHROMagar มีความไวและความจำเพาะที่ดีกว่าสำหรับความแตกต่างและการระบุชนิดของ Candida ที่แตกต่างกันมากกว่า BIGGY agar
ระบบประกันคุณภาพ
สำหรับการควบคุมความเป็นหมันแผ่นที่ไม่ได้ใส่ปุ๋ยจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C ในที่มืดเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงคาดว่าจะไม่มีการเจริญเติบโตใด ๆ หรือการเปลี่ยนสี
สายพันธุ์ ATCC ที่แนะนำสำหรับการควบคุมคุณภาพของสื่อ ได้แก่ :
Candida albicans ATCC 60193 complex, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135 โดยทั้งหมดคาดว่าจะมีการเติบโตตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
สามารถใช้สายพันธุ์ต่อไปนี้:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 และ Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 ในสองครั้งแรกคาดว่าจะมีการยับยั้งทั้งหมด แต่ในกรณีที่มีการเจริญเติบโตบางส่วนอาณานิคมจะเป็นสีครีม
ในกรณีของ S. aureus คาดว่าจะถูกยับยั้งได้ทั้งหมด แต่ถ้ามันเติบโตขึ้นบางส่วนอาณานิคมของมันจะเป็นสีขาว
ข้อ จำกัด
แบคทีเรียบางชนิดมีความสามารถในการเจริญเติบโตในอาหารชนิดนี้และยังสามารถเปลี่ยนเป็นสีเข้มจำลองอาณานิคม Candida ได้ แต่เมื่อทาบริเวณนั้นและสังเกตดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์ก็จะถูกทิ้งได้อย่างง่ายดาย
ตาราง: ลักษณะของโคโลนีของยีสต์บางชนิดบนวุ้น BIGGY ตามผลงานของYücesoy M และ Marol S.
ที่มา: Yücesoy M, Marol S. ประสิทธิภาพของ CHROMAGAR candida และ BIGGY agar สำหรับการระบุชนิดของยีสต์ Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003 2 (8): 1-7
อ้างอิง
- Yücesoy M, Marol S. ประสิทธิภาพของ CHROMAGAR candida และ BIGGY agar สำหรับระบุชนิดของยีสต์ Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. เอกสารข้อมูลทางเทคนิควุ้น BIGGY มีจำหน่ายที่: mcdlab.net/
- แล็บนีโอเจน วุ้นบิ๊กกี้. มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. วุ้นบิ๊กกี้ มีจำหน่ายที่: condalab.com
- BD Laboratories BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar) 2554 มีจำหน่ายที่: bd.com