- รากฐาน
- การจัดเตรียม
- เวดจ์
- แผ่น
- การเตรียมวุ้นเลือด
- การประยุกต์ใช้งาน
- ใช้โดยไม่ต้องเสริม
- เป็นวุ้นพื้นฐานสำหรับการเตรียมสื่ออื่น ๆ
- อุดม
- Selective
- ระบบประกันคุณภาพ
- อ้างอิง
BHI วุ้นหรือสมองหัวใจ Infusion วุ้นกลางเป็นวัฒนธรรมที่มั่นคงทางอาหาร ในภาษาสเปนเราเรียกมันว่า agar infusion heart เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อแบบไม่คัดเลือกซึ่งหมายความว่าแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบทุกชนิดสามารถพัฒนาได้เช่นเดียวกับเชื้อรายีสต์และเส้นใยบางชนิด
ประกอบด้วยการแช่สมองและหัวใจลูกวัว, ไฮโดรไลเสตเปปติกจากเนื้อเยื่อของสัตว์, ไฮโดรไลเซตของตับอ่อนของเคซีน, โซเดียมคลอไรด์, กลูโคส, ไดโซเดียมฟอสเฟตและวุ้น
แผ่น BHI ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil.
ควรสังเกตว่า BHI agar เป็นหนึ่งในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้บ่อยที่สุดในห้องปฏิบัติการแบคทีเรียวิทยา สามารถใช้ได้โดยไม่มีอาหารเสริมเป็นวัฒนธรรมหลักวัฒนธรรมย่อยของโคโลนีที่ได้รับจากสื่อคัดเลือกอื่น ๆ หรือเพื่อการบำรุงรักษาสายพันธุ์ในห้องปฏิบัติการ
ในทางกลับกันมันเป็นสื่อที่เหมาะที่จะใช้เป็นฐานในการเตรียมอาหารเสริมเช่นวุ้นในเลือดและวุ้นช็อคโกแลต ทั้งสองอย่างนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกจุลินทรีย์ที่มีความต้องการออกจากมุมมองทางโภชนาการ อย่างไรก็ตามควรสังเกตว่าเนื่องจากมีกลูโคสจึงไม่เหมาะสำหรับการสังเกตรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดง
ในทำนองเดียวกัน BHI agar สามารถใช้ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อพิเศษสำหรับการแยกจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคที่ยากต่อการเจริญเติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อที่พบบ่อย ได้แก่ Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae และ Histoplasma capsulatum
ด้วยสารเติมแต่งยาปฏิชีวนะ BHI agar จึงกลายเป็นสื่อคัดเลือกสำหรับการแยกเชื้อรา
รากฐาน
เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีคุณค่าทางโภชนาการเพื่อแยกจุลินทรีย์ที่มีความต้องการในระดับปานกลางและสามารถเพิ่มคุณค่าทางโภชนาการได้ด้วยการเติมเลือดและอาหารเสริมอื่น ๆ
เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อแบบไม่เลือกจึงสามารถเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบส่วนใหญ่รวมทั้งเชื้อราบางชนิด อย่างไรก็ตามสามารถเลือกได้ด้วยการเพิ่มยาปฏิชีวนะ
สารนี้ประกอบด้วยการแช่สมองและหัวใจของลูกวัวไฮโดรไลเซตในเนื้อเยื่อของสัตว์และไฮโดรไลเสตในตับอ่อนของเคซีน สารประกอบเหล่านี้ทั้งหมดทำหน้าที่เป็นแหล่งของวิตามินกรดอะมิโนไนโตรเจนและคาร์บอน
กลูโคสเป็นคาร์โบไฮเดรตที่ให้พลังงานแก่จุลินทรีย์เมื่อหมักแล้ว ในขณะเดียวกันโซเดียมคลอไรด์และไดโซเดียมฟอสเฟตรักษาสมดุลออสโมติกและให้ pH ใกล้เคียงกับความเป็นกลาง สุดท้ายวุ้นจะให้ความสม่ำเสมอของของแข็งปานกลาง
การจัดเตรียม
หนัก 52 กรัมของตัวกลางที่ขาดน้ำและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร นำส่วนผสมไปตั้งในแหล่งความร้อนจนเดือดกวนบ่อย ๆ ในระหว่างกระบวนการละลาย
สามารถเตรียมแผ่นวุ้นหรือเวดจ์ BHI ได้โดยไม่ต้องใช้สารเติมแต่ง
เวดจ์
สำหรับการเตรียมเวดจ์ให้ใช้การเตรียมจนเต็มครึ่งหนึ่งของแต่ละหลอดปิดฝาและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาทีเมื่อทิ้งให้วางบนฐานจนกว่าจะแข็งตัว หลังจากนั้นเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้
BHI เวดจ์สำหรับ bacterioteca ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil.
แผ่น
ส่วนผสมที่ละลายจะถูกนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาทีโดยปล่อยทิ้งไว้ให้เย็นถึง 50 ° C และใส่อาหารเลี้ยงเชื้อ 20 มล. อนุญาตให้แข็งตัวคว่ำและเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ ปล่อยให้จานอยู่ในอุณหภูมิห้องก่อนเพาะเมล็ด
pH ของตัวกลางต้องอยู่ที่ 7.4 ± 0.2
ตัวกลางดิบมีสีเบจและสื่อที่เตรียมไว้คือสีเหลืองอำพันอ่อน
การเตรียมวุ้นเลือด
หลังจากฆ่าเชื้อตัวกลางแล้วให้ทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิประมาณ 45 ถึง 50 ° C จากนั้นเติมเลือด (50 มล.) ผสมอย่างเบามือให้เป็นเนื้อเดียวกันและให้บริการ 20 มล. ในแต่ละจานเพาะเชื้อ หากฟองอากาศก่อตัวขึ้นบนจานควรใช้เปลวไฟที่เบากว่าอย่างรวดเร็วเพื่อกำจัดฟองออก
ในทำนองเดียวกันสามารถเตรียมสื่อพิเศษได้โดยการเติมสารเติมแต่งที่เกี่ยวข้องเมื่อส่วนผสมถึงอุณหภูมิ 45 ถึง 50 ° C
กลางยังคงเป็นสีแดงเชอร์รี่
การประยุกต์ใช้งาน
ใช้โดยไม่ต้องเสริม
วุ้น BHI ที่ไม่มีสารปรุงแต่งมีประโยชน์ในการเพาะเลี้ยงหลักและสำหรับการหว่านจุลินทรีย์สายพันธุ์บริสุทธิ์ที่มีความต้องการต่ำหรือปานกลางเพื่อการระบุตัวตนในภายหลัง
เนื่องจากเป็นตัวกลางที่มีสีอ่อนจึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการสังเกตเม็ดสีและเนื่องจากไม่มีสารรบกวนจึงสามารถทำการทดสอบทางชีวเคมีบางอย่างเช่นออกซิเดสและคาตาเลสหรือการทดสอบทางชีวเคมีอื่น ๆ สามารถติดตั้งจากโคโลนีได้จากสิ่งนี้ วุ้น
ในทำนองเดียวกันเวดจ์วุ้น BHI ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการบำรุงรักษาสายพันธุ์ในช่วงเวลาหนึ่งในห้องปฏิบัติการ (bacterioteca)
แผ่นหรือเวดจ์ที่เพาะโดยพื้นผิวด้วยสายพันธุ์แบคทีเรียจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง ในขณะเดียวกันในเชื้อราอุณหภูมิและเวลาในการฟักตัวจะขึ้นอยู่กับชนิดของเชื้อราที่ต้องการ
เป็นวุ้นพื้นฐานสำหรับการเตรียมสื่ออื่น ๆ
ด้วยฐานนี้สามารถเตรียมสื่อที่สมบูรณ์และเลือกสรรได้
อุดม
หน้าที่หลักคือใช้เป็นพื้นฐานในการเตรียมวุ้นในเลือดเพื่อใช้เป็นประจำในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งฐาน BHI นั้นเอื้อต่อการแยกเชื้อ Streptococcus sp. อย่างไรก็ตามมีข้อเสียคือไม่เหมาะสำหรับการสังเกตรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงเนื่องจากมีกลูโคส
นอกจากนี้ยังใช้ในการเตรียมวุ้นเลือดกระต่ายหรือม้าเพื่อแยกเชื้อ Haemophilus sp เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุดสามารถเพิ่มผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร (IsoVitaleX) ได้
หากตัวอย่างมาจากทางเดินหายใจสามารถเพิ่ม bacitracin ลงในวุ้นเพื่อยับยั้งพืชที่มาพร้อมกับเชื้อและเพิ่มโอกาสในการฟื้นตัวของสายพันธุ์ Haemophilus sp.
หรืออีกวิธีหนึ่งคือสามารถเตรียมวุ้นในเลือด (เนื้อแกะหรือมนุษย์) ที่มีซีสทีนเทลลูไรต์เพื่อแยกเชื้อ Corynebacterium diphtheriae ในทำนองเดียวกันการเตรียมวุ้นเลือดกระต่ายก็มีประโยชน์เช่นกันโดยการเติมซีสตีนและกลูโคสเพื่อแยกเชื้อฟรานซิเซลลาทูลาเรนซิส
แผ่นวุ้นเลือดถูกหว่านด้วยความอ่อนเพลียและถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมงใน microaerophilicity (5-10% CO 2 )
Selective
สารที่มีการเพิ่มยาปฏิชีวนะนี้สามารถแทนที่ Sabouraud agar สำหรับการแยกเชื้อรา
การรวมกันของ BHI agar กับ chloramphenicol - gentamicin หรือ penicillin - streptomycin และ horse blood เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการแยก Histoplasma capsulatum
ขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่จะแยกได้แนะนำให้ใช้การบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C หรือที่อุณหภูมิห้องในแอโรบิค บางครั้งจำเป็นต้องมีการบ่มในทั้งสองช่วงอุณหภูมิโดยใช้ 2 แผ่นสำหรับสิ่งนี้
เชื้อราบางชนิดเช่น Trichophyton mentagrophytes ต้องฟักตัวที่อุณหภูมิห้องนานถึง 7 วัน
ระบบประกันคุณภาพ
จากการเตรียมแต่ละชุดขอแนะนำให้บ่ม 1 แผ่นหรือลิ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและตรวจสอบว่าไม่มีการเจริญเติบโต เป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งในการเตรียมวุ้นเลือดเนื่องจากเป็นอาหารที่ปนเปื้อนได้ง่าย
ในทางกลับกันคุณภาพของสื่อสามารถประเมินได้โดยการฉีดวัคซีนสายพันธุ์มาตรฐานที่รู้จักหรือได้รับการรับรองและสังเกตพัฒนาการของมัน
ในแง่นี้สามารถใช้เพื่อประเมินวุ้น BHI ที่ไม่มีสารเติมแต่งสามารถใช้เชื้อ Escherichia coli ATCC 25922 Staphylococcus aureus ATCC 25923 หรือ Candida albicans ATCC 10231 ได้โดยบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ใน aerobiosis เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง ในทุกกรณีคาดว่าจะมีการเติบโตที่น่าพอใจ
สามารถเพาะสายพันธุ์ของ Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 หรือ Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 เพื่อประเมินแผ่นวุ้นในเลือดได้
สายพันธุ์ของแบคทีเรียจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C ในความเป็น microaerophilicity เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในขณะที่เชื้อราจะถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องในห้องที่มีความชื้นสูงถึง 7 วัน คาดว่าจะมีการเติบโตที่น่าพอใจในทุกกรณี
อ้างอิง
- Britannia Laboratories Brain Heart Infusion Agar 2558. มีจำหน่ายที่: britanialab.com.
- BD Laboratories Brain Heart Infusion (BHI) วุ้น 2556 ดูได้ที่: bd.com
- Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar 2009
- ห้องปฏิบัติการนีโอเจน Brain Heart Infusion Agar มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
- Gil M. Blood agar: รากฐานการใช้และการเตรียม 2018 มีจำหน่ายที่: lifeder.com
- ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia การแช่หัวใจในสมอง Wikipedia สารานุกรมเสรี 19 กันยายน 2018, 03:58 UTC. ดูได้ที่: wikipedia.org เข้าถึง 2 มีนาคม 2019
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina