ห้อง NEUBAUER: ประวัติลักษณะการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

ห้อง Neubauer , hematometer หรือ hemocytometer เป็นเครื่องมือที่ใช้ในห้องปฏิบัติการที่ประกอบด้วยแผ่นกระจกหนาพิเศษ กล้องนี้ใช้ในการตรวจนับเซลล์บางชนิดเช่นเม็ดเลือดแดงเม็ดเลือดขาวและเกล็ดเลือดแม้ว่าจะสามารถใช้ในการนับสปอร์อสุจิปรสิต ฯลฯ

นำเสนอลักษณะพิเศษบางอย่างเนื่องจากประกอบด้วย 3 โซนโซนกลางสำหรับการนับและโซนรองรับ 2 โซน แต่ละห้องมีโซนการนับหรือกากบาทสองโซนที่ด้านบนและด้านล่าง

ห้อง Neubauer ที่มา: SantiBadia. รูปภาพที่แก้ไข

สิ่งเหล่านี้มีหลายหน่วยงานในรูปแบบกริด พื้นที่นับคือสี่เหลี่ยมขนาดกลางที่พบที่มุมทั้ง 4 ของกรอสทั้งสองบวกกับสี่เหลี่ยมจัตุรัสกลาง

การประกอบกล้องจะต้องทำด้วยความระมัดระวังเป็นอย่างยิ่งเนื่องจากรายละเอียดใด ๆ มีผลต่อจำนวนเซลล์ มีข้อผิดพลาดมากมายที่สามารถเกิดขึ้นได้ แต่หากมีข้อผิดพลาดเกิดขึ้นกล้องจะต้องถอดประกอบทำความสะอาดและประกอบกลับเข้าไปใหม่ ข้อผิดพลาดหลักมีดังต่อไปนี้:

ล้นห้องหรือการเติมต่ำลงปล่อยให้ห้องแห้งพยายามขจัดของเหลวส่วนเกินออกด้วยผ้าก๊อซเอียงห้องเมื่อขนส่งเติมห้องที่สกปรกหรือเปียกไม่ผสมเจือจางหรือหลุมตัวอย่าง ฯลฯ ข้อผิดพลาดทั้งหมดนี้จะทำให้ได้ค่าที่ไม่เป็นจริง

ประวัติศาสตร์

ห้อง Neubauer เป็นเครื่องมือที่มีความแม่นยำและกระบวนการผลิตผ่านการควบคุมคุณภาพอย่างเข้มงวด ถูกสร้างขึ้นสำหรับการนับอนุภาคหรือองค์ประกอบที่เกิดขึ้นอย่างแม่นยำต่อมม. ³เช่นเซลล์ในของเหลวต่างๆ ภาพกราฟิกที่ละเอียดอ่อนแกะสลักด้วยดินสอเพชร

ลักษณะห้อง Neubauer

ห้องทั้งหมดมีขนาดเท่าสไลด์ปกติเพื่อให้สามารถวางบนเวทีกล้องจุลทรรศน์ได้

ห้องประกอบด้วยพื้นผิวรูปสี่เหลี่ยมผืนผ้ากลางสามพื้น (a, b, c) ในโซน“ b” คือโซน R หรือโซนการนับหรือที่เรียกว่าร่างแห 1 อันที่ด้านข้างของกล้องโดยคั่นด้วยโซน "d"

แผนภาพกราฟิกของ Neubauer Chamber ที่มา: คู่มือปฏิบัติงานโลหิตวิทยา. School of Bioanalysis ของ University of Carabobo ประเทศเวเนซุเอลา

แต่ละ Graticule คือพื้นที่ขัดเงาที่มีการแกะสลักพื้นที่นับ มันประกอบด้วยตารางที่มีพื้นที่ผิวของ 9 มม²และภายในแบ่งออกเป็น 9 สแควร์มีพื้นที่ผิวของ1 มิลลิเมตร²แต่ละ สี่เหลี่ยมมุมทั้งสี่แบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ 16 ช่อง (พื้นที่ 0.0625 มม. ² )

เส้นกริดเหล่านี้ถูกสร้างขึ้นโดยชุดของเส้นมิลลิเมตรที่ตัดกันซึ่งเป็นเส้นตารางที่สมบูรณ์แบบที่คั่นด้วยการวัดที่ระบุไว้ เส้นเหล่านี้ได้รับการสลักด้วยปลายเพชร

ปรับปรุง Neubauer reticulum ที่มา: คู่มือปฏิบัติทางโลหิตวิทยาของ School of Bioanalysis ของ University of Carabobo เวเนซุเอลา

ทั้งสี่ด้านสอดคล้องกับพื้นที่นับ ที่ด้านข้างหรือมุมเหล่านี้จะนับเซลล์ส่วนใหญ่ (เม็ดเลือดแดงและเม็ดเลือดขาว) ในขณะที่เกล็ดเลือดจะถูกนับในบริเวณส่วนกลาง

เขตภาคกลางมีหน่วยงานมากขึ้นก็จะประกอบไปด้วย 1 มม²ตารางแบ่งออกเป็น 25 ช่องสี่เหลี่ยมที่มีพื้นที่ผิวของ 0.04 มม²แต่ละ เหล่านี้จะมีการแบ่งออกเป็น 16 กริดที่มีพื้นที่ 0.0025 มม2

คำอธิบายของ Neubauer reticulum ที่ปรับปรุงใหม่ a) สี่เหลี่ยมจัตุรัสของมุม b) จัตุรัสกลาง c) กำลังสองของจัตุรัสกลาง ที่มา: คู่มือปฏิบัติทางโลหิตวิทยาของ School of Bioanalysis ของ University of Carabobo เวเนซุเอลา

โซน“ a” และ“ c” ทำหน้าที่รองรับการวางวัตถุปิดพิเศษที่เรียกว่าฝาปิด hematometric slide หรือ hematimeter cover

ความสูงระหว่างฟอยล์และพื้นผิวการนับคือ 0.1 มม. การวัดพื้นที่ของกล่องนับรวมทั้งความสูงของห้องและการเจือจางของตัวอย่างเป็นข้อมูลที่จำเป็นในการคำนวณขั้นสุดท้าย

การประยุกต์ใช้งาน

ใช้สำหรับการนับเซลล์ มีประโยชน์อย่างยิ่งในด้านโลหิตวิทยาเนื่องจากช่วยให้สามารถนับชุดเซลล์เม็ดเลือด 3 ชุดได้ เช่นเซลล์เม็ดเลือดแดงเม็ดเลือดขาวและเกล็ดเลือด

อย่างไรก็ตามสามารถใช้ในพื้นที่อื่น ๆ ได้เช่นเพื่อตรวจนับอสุจิสปอร์แบคทีเรียหรือสิ่งของอื่น ๆ ที่มีความสำคัญขึ้นอยู่กับชนิดของตัวอย่าง

วิธีใช้?

การเตรียมตัวอย่าง

ในการนับเซลล์โดยทั่วไปจะเริ่มจากการเจือจางก่อนหน้านี้ ตัวอย่าง: ในการนับเม็ดเลือดขาวให้เตรียมการเจือจาง 1:20 ด้วยของเหลวของเติร์ก การเจือจางจะถูกผสมให้เข้ากันก่อนที่จะใส่ปิเปตและติดตั้งห้อง Neubauer

มีหลายครั้งที่การเจือจาง 1:20 ไม่เพียงพอที่จะนับ ตัวอย่างเช่นในผู้ป่วยที่เป็นมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเรื้อรังบางประเภท ในกรณีเหล่านี้ควรทำการเจือจางที่สูงขึ้นเช่น 1: 100

ในทางกลับกันถ้าจำนวนนับต่ำมากเช่นเดียวกับในเม็ดเลือดขาวชนิดรุนแรงการเจือจางที่น้อยลงสามารถทำให้ตัวอย่างเข้มข้นได้ ตัวอย่าง: คุณสามารถเจือจาง 1:10

การเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นมีผลต่อการคำนวณ

การติดตั้งห้อง Neubauer

ห้อง Neubauer ถูกประกอบขึ้นโดยการวางสไลด์ hematometric ไว้ที่ส่วนกลาง ทั้งต้องสะอาดและแห้งมาก ในการวางแผ่นลาเมลลานั้นจะถูกถ่ายโดยขอบและค่อยๆวางลงบนกล้อง

เติมโดยวางปลายของปิเปตอัตโนมัติ Thoma หรือปิเปตที่มุม 35 °ที่ขอบของพื้นที่บรรทุก ของเหลวจะถูกระบายออกอย่างราบรื่นและพื้นที่บรรทุกเต็มไปด้วย capillarity ทำจากทั้งสองด้านเพื่อโหลดกากบาททั้งสอง

เรติเคิลไม่ควรมีมากเกินไปและไม่ควรปฏิเสธของเหลว โหลดต้องเป๊ะ สิ่งสำคัญคือการเติมจะต้องทำให้เป็นเนื้อเดียวกันนั่นคือไม่ควรมีฟองอากาศ

เมื่อประกอบห้องแล้วให้พักไว้ 2 นาทีเพื่อให้เซลล์ตกตะกอนไปที่ด้านล่างและการมองเห็นและการนับจะง่ายขึ้น

หลังจากช่วงเวลาพักมันจะถูกติดตั้งบนเวทีของกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงเพื่อสังเกตการณ์ อันดับแรกจะเน้นด้วยวัตถุประสงค์ 10X และถ้าจำเป็นให้ไปที่ 40X

เพื่อปรับปรุงการมองเห็นการส่องผ่านของแสงจากกล้องจุลทรรศน์จะลดลง ในการทำเช่นนี้คอนเดนเซอร์จะลดลงและไดอะแฟรมปิดเล็กน้อย

นับ

สำหรับการนับเม็ดเลือดขาวหรือเม็ดเลือดขาวจะต้องนับพื้นผิวทั้งหมดของสี่เหลี่ยมมุมฉากทั้งสี่มุมและสี่เหลี่ยมจัตุรัสกลางของร่างแหแต่ละอัน

การนับเริ่มต้นในช่องสี่เหลี่ยมที่มุมบนซ้าย คุณเริ่มจากสี่เหลี่ยมจัตุรัสแรกของแถวแรกนั่นคือจากซ้ายไปขวาจนไปถึงจุดสุดตรงกันข้าม

จากนั้นคุณลงไปและมองย้อนกลับไปจากขวาไปซ้ายจนกว่าคุณจะไปถึงอีกด้านหนึ่งเซลล์ในแต่ละตารางจะถูกนับในรูปแบบซิกแซก ตารางมัธยฐาน 16 ตารางจะถูกนับ

เพื่อหลีกเลี่ยงการนับเซลล์สองครั้งมีกฎเกี่ยวกับเซลล์ที่อยู่บนเส้นเขตแดนของแต่ละตาราง เซลล์ในบรรทัดด้านซ้ายและด้านบนจะถูกนับและเซลล์ทางด้านขวาและด้านล่างจะถูกละเว้น

ต้องมีตัวนับเซลล์ด้วยตนเองเพื่อให้ผู้ปฏิบัติงานกดปุ่มอุปกรณ์หลาย ๆ ครั้งตามที่มีการสังเกตเซลล์ ด้วยการใช้ตัวนับผู้ปฏิบัติงานสามารถนับได้โดยไม่ต้องมองขึ้นจากช่องขนาดเล็ก ในตอนท้ายของการนับคุณจะเห็นจำนวนเซลล์ทั้งหมดที่นับ

การคำนวณ

การคำนวณสามารถทำได้หลายวิธี สามารถนับ Graticule เดียวหรือสามารถนับได้ทั้งสองอย่างและทั้งสองอย่างเป็นค่าเฉลี่ย ในทั้งสองสถานการณ์เซลล์นับจะต้องคูณด้วยปัจจัยซึ่งในกรณีนี้จะเป็น 40 จึงนับรวมต่อมม³ จะได้รับ

แต่ถ้านับกริดทั้งสองและไม่ได้นำค่าเฉลี่ยมาคูณด้วยปัจจัยที่ต่างกันในกรณีนี้ด้วย 20

- ปัจจัยการคูณ

นี่คือวิธีคำนวณตัวคูณการคูณ

ข้อมูลต่างๆจะถูกนำมาพิจารณาในการคำนวณรวมถึงไทเทอร์การเจือจางความสูงของห้องและพื้นที่ที่นับ

เจือจาง

การเจือจางมาตรฐานที่ใช้คือ 1:20 สำหรับจำนวนเม็ดเลือดขาว

ความสูงของห้อง

ความสูงระหว่างห้องและแผ่นเซลล์เม็ดเลือดคือ 0.1 มม.

พื้นที่นับ

ถ้า 5 สี่เหลี่ยมของ 1mm ²พื้นที่ที่มีการนับก็หมายความว่าพื้นที่นับรวมเป็น 5mm 2 ข้อมูลนี้ต้องคูณด้วยความสูงของห้องเพื่อให้ได้ปริมาตรทั้งหมดที่นับได้ นั่นคือ 5mm ² x 0.1mm = 0.5mm ³ .

สูตรและการคำนวณ

ด้วยข้อมูลที่เรามีกล่าวว่า:

ถ้าใน 0.5 มม. ³ - มีจำนวนเซลล์นับ

ใน 1 มม. ³ - จะมี - X n °ของเซลล์

X no. ของเซลล์ = (จำนวนเซลล์ที่นับ x 1) / 0.5 mm ³

แต่ต้องคำนึงถึงการเจือจางด้วย ดังนั้นสูตรจึงเป็นดังนี้:

(จำนวนเซลล์ที่นับ x 1) x 20 / 0.5 มม. ³

สุดท้ายเพื่อสรุปจำนวนของเซลล์นับสามารถคูณด้วย 40 ดังนั้นค่าของเม็ดเลือดขาวต่อมม³ จะได้รับ

หากทั้งสองเรติเคิลที่มีการนับข้อมูลสำหรับพื้นที่นับที่มีการเปลี่ยนแปลงซึ่งในกรณีนี้จะเป็น 10 สี่เหลี่ยม, ที่อยู่, 10 มม2 และปริมาตรที่นับรวม 1 mm3 สูตรจะเป็น:

(จำนวนเซลล์ที่นับ x 1) x 20/1 มม. ³

ดังนั้นในกรณีนี้ตัวคูณจะเป็น 20

ข้อผิดพลาด

- หากใส่กล้องถ่ายเกินหรือเกินของเหลวความสูงของกล้องจะแตกต่างกันไป ส่งผลให้จำนวนนับสูงกว่าของจริง หากคุณพยายามขจัดส่วนเกินออกด้วยผ้ากอซหรือผ้าฝ้ายนี่เป็นความผิดพลาดอย่างมาก การกระทำนี้จะทำให้เซลล์มีสมาธิเพิ่มจำนวน

- หากโหลดไม่ดีจำนวนจะต่ำกว่าของจริง

- หากติดตั้งกล้องไว้และปล่อยให้แห้งจะไม่สามารถนับได้อีกต่อไปเนื่องจากจะให้ผลลัพธ์ที่ผิดพลาด

- หากการเจือจางตัวอย่างไม่ได้รับการผสมให้เข้ากันก่อนที่จะบรรจุในห้องอาจมีความเสี่ยงที่จะเกิดข้อผิดพลาดในการอ่านเนื่องจากเซลล์จะไม่กระจายเป็นเนื้อเดียวกัน ดังนั้นจะมีความเข้มข้นของเซลล์ต่ำกว่าหรือสูงกว่าขึ้นอยู่กับว่าตัวอย่างถูกนำมาจากพื้นผิวของของเหลวหรือจากด้านล่างของท่อตามลำดับ

- การปรากฏตัวของฟองช่วยลดปริมาณของเหลวที่ต้องเข้าสู่ร่างแหรบกวนการมองเห็นและการกระจายของเซลล์ที่ถูกต้อง ทั้งหมดนี้ส่งผลอย่างมากต่อผลลัพธ์

- ในระหว่างการนับอย่ามองขึ้นจากกล้องจุลทรรศน์จนกว่าสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่แต่ละอันจะเสร็จสมบูรณ์เพื่อหลีกเลี่ยงการหลงทาง

- สาเหตุหนึ่งที่ทำให้เกิดข้อผิดพลาดคือการเอียงกล้องหลังจากติดตั้ง ด้วยเหตุนี้จึงต้องยกระยะของกล้องจุลทรรศน์อย่างระมัดระวัง

คำแนะนำ

หากคุณตรวจพบความผิดปกติในช่องบรรจุไม่ว่าด้วยเหตุผลใดก็ตามขอแนะนำให้คุณถอดส่วนเตรียมนั้นทำความสะอาดห้องและประกอบใหม่ตั้งแต่เริ่มต้น

ใช้ความระมัดระวังเป็นอย่างยิ่งเมื่อทำความสะอาดกล้องเพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้เส้นขนตามขวางขีดข่วน ในทางกลับกันโปรดทราบว่าสไลด์ฮีมาโตเมตริกมีความละเอียดอ่อนและเปราะบาง การจัดการที่ไม่เหมาะสมสามารถทำลายได้

ก่อนที่คุณจะเริ่มนับให้แน่ใจว่าเซลล์มีการกระจายอย่างดี การกระจายของเซลล์ที่ไม่สม่ำเสมอเกิดขึ้นจากการผสมตัวอย่างไม่ดีหรือการเจือจาง หากเกิดเหตุการณ์นี้จะต้องทำซ้ำการประกอบ

วิธีหนึ่งที่จะทราบได้ว่าเซลล์มีการกระจายตัวดีหรือไม่คือการเปรียบเทียบจำนวนของสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดใหญ่แต่ละอันจำนวนเซลล์ที่นับโดยแต่ละสแควร์ไม่ควรมีความแตกต่างกันมากจนเกินไป

- หากจำนวนเม็ดเลือดขาวสูงกว่า 50,000 มม. ³ขอแนะนำให้ทำการนับซ้ำโดยทำให้เจือจางมากขึ้น

- หากคุณเปลี่ยนการเจือจางคุณต้องคำนวณปัจจัยการคูณใหม่เนื่องจากสิ่งนี้มีผลต่อสูตร

อ้างอิง

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. การเปรียบเทียบความเข้มข้นของอสุจิโดยใช้ห้องของ Makler และห้องของ Neubauer Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. มีจำหน่ายใน: scielo
2. ห้อง Neubauer (2018, 27 มีนาคม). Wikipedia สารานุกรมเสรี วันที่ปรึกษา: 04:10, 23 มิถุนายน 2019 จาก es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. การประยุกต์ใช้วิธีการนับทางเลือกในห้อง Neubauer เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของ Trichomonas vaginalis รายได้ Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. มีจำหน่ายที่: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. การวิเคราะห์ Spermogram รายได้เวเนซ Endocrinol Metab 2007 5 (2): 19-20. มีจำหน่ายใน: ve.scielo
5. คู่มือปฏิบัติทางโลหิตวิทยาของ School of Bioanalysis ของ University of Carabobo เวเนซุเอลา. 1998