การย้อมสีเชิงลบ: เหตุผลเทคนิคข้อดีและข้อเสีย - ชีววิทยา - 2026

การย้อมสีลบเป็นวิธีการของสีพิเศษเพื่อเน้นการมีอยู่ของแคปซูลในจุลินทรีย์บางชนิดส่วนใหญ่เป็น Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae และ Cryptococcus neoformans- จากตัวอย่างทางคลินิกหรือจากการเพาะเลี้ยงบริสุทธิ์

ตัวอย่างโดยตรงที่ใช้ในการย้อมสีลบคือน้ำไขสันหลัง เทคนิคนี้เป็นทางเลือกที่รวดเร็วสำหรับการวินิจฉัยโรคเยื่อหุ้มสมองอักเสบโดยสันนิษฐานโดยเฉพาะอย่างยิ่ง Cryptococcus neoformans

ก. ทาร์ทาร์ฟันที่ย้อมด้วยหมึกอินเดียข. Cryptococcus neoformans var gatti ห่อหุ้มอย่างอ่อน ๆ เมื่อเกิดขึ้นในธรรมชาติโดยใช้ nigrosin C. Cryptococcus neoformans var gatti ที่มีแคปซูลหนาซึ่งพบในรูปแบบกาฝากโดยใช้ไนโกรซิน D. Cryptococcus neoformans ด้วยหมึกอินเดียที่เจือจางเล็กน้อย Gisell Quinde จาก Wikimedia Commons / CDC ผ่าน Wikimedia Commons / Photo Credit: Content Providers (s): CDC / Dr. Leanor Haley ผ่าน Wikimedia Commons

ในทำนองเดียวกันคราบนี้สามารถใช้กับเสมหะและของเหลวที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยทั่วไปเช่นเดียวกับสายพันธุ์ที่ได้จากวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ในวัยเยาว์ เทคนิคนี้ใช้หมึก nigrosine หรืออินเดียในการดำเนินการ ดังนั้นจึงเป็นวิธีการที่ง่ายและประหยัดมากในการนำไปใช้ซึ่งให้ข้อมูลที่มีคุณค่าในการวินิจฉัยที่ดีในเวลาอันสั้น

ในแง่นี้ห้องปฏิบัติการใด ๆ ก็สามารถทำการย้อมสีนี้ได้ แน่นอนว่าห้องปฏิบัติการจะต้องมีบุคลากรที่มีความสามารถในการจำแนกยีสต์ Cryptococcus neoformans ที่แยกหรือเป็นรุ่นและแยกความแตกต่างจากเม็ดเลือดขาวและสิ่งประดิษฐ์ที่ตัวอย่างอาจมีอยู่

รากฐาน

หมึก Nigrosine และอินเดียทำงานในลักษณะเดียวกัน ดังนั้นสารทั้งสองชนิดจึงสามารถใช้แทนกันได้

เทคนิคนี้เรียกว่าการย้อมสีเชิงลบเนื่องจากทำในทางตรงกันข้ามกับเทคนิคการย้อมสีที่เหลือ ในสิ่งนี้สิ่งที่ยังคงไม่มีสีคือโครงสร้างที่กำลังถูกค้นหาหรือที่ใคร ๆ ก็ปรารถนาจะเห็น นั่นคือจุลินทรีย์

ดังนั้นการย้อมสีจึงขึ้นอยู่กับการทำให้ด้านล่างของรอยเปื้อนเป็นสีเข้ม ในสถานการณ์นี้โครงสร้างที่หุ้มจะโดดเด่นด้วยสีอ่อนหรือไม่มีสี

โดยทั่วไปแล้วยีสต์จะไม่ละลายน้ำล้อมรอบด้วยรัศมีใสที่สอดคล้องกับแคปซูล สิ่งนี้เกิดขึ้นเนื่องจากหมึกและไนโกรซินของอินเดียเป็นสารที่ไม่สามารถซึมผ่านโพลีแซคคาไรด์ที่เป็นแคปซูลของจุลินทรีย์ที่มีชีวิตได้

เป็นที่น่าสังเกตว่าโครงสร้างอื่น ๆ ที่อาจมีอยู่ในตัวอย่างโดยตรงเช่นเม็ดเลือดขาวหรือเม็ดเลือดแดงจะไม่เจาะเข้าไปเช่นกัน

อย่างไรก็ตามหากจุลินทรีย์ตายสีย้อมสามารถแทรกซึมเข้าไปข้างในได้ดังนั้นการย้อมสีนี้จึงมีประโยชน์ในการประเมินความมีชีวิตของจุลินทรีย์ด้วย

เทคนิค

วัสดุ

ไนโกรซีน

Nigrosine มีชื่อเป็นสีดำ เป็นสารสังเคราะห์ที่ได้จากการให้ความร้อนกับส่วนผสมของสารประกอบอินทรีย์เช่นไนโตรเบนซีนอะนิลีนและอะนิลีนไฮโดรคลอไรท์ - โดยใช้ตัวเร่งปฏิกิริยา (เหล็กหรือทองแดง) ในปฏิกิริยาดังกล่าว

หมึกจีน

หมึกจีนเป็นสารที่ชาวเอเชียใช้เป็นหลักในการเขียนงานศิลปะและภาพวาดสีเดียว เป็นที่นิยมมากในวัฒนธรรมจีน

ได้มาจากหมึกของปลาหมึกผสมกับถ่านป่นผลิตภัณฑ์จากการเผาต้นไม้ที่มีเรซินต่ำ

นอกจากนี้ยังสามารถเตรียมได้จากเขม่าจากการเผาไฮโดรคาร์บอน (น้ำมันพืช) ร่วมกับเจลาตินโปรตีนที่ให้ความสม่ำเสมอที่เหมาะสมเพื่อหลีกเลี่ยงการตกตะกอนของอนุภาคคาร์บอน

ข้อมูลจำเพาะสำหรับการสุ่มตัวอย่าง

- ไม่ต้องอดอาหาร

- ตัวอย่างน้ำไขสันหลังเสมหะหรือของเหลวที่ปราศจากเชื้อต้องมีปริมาตรอย่างน้อย 1 มล. และต้องเคลื่อนย้ายไปยังห้องปฏิบัติการที่อุณหภูมิห้องทันที

- น้ำไขสันหลังและตัวอย่างของเหลวที่ปราศจากเชื้อต้องนำโดยแพทย์เฉพาะทาง

- นอกจากนี้ยังสามารถเป็นวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของสายพันธุ์ที่น่าสงสัยซึ่งเชื่อมโยงกับเชื้อโรคดังกล่าวข้างต้น

การดำเนินการของเทคนิคกับตัวอย่างโดยตรง

- ตัวอย่างจะต้องถูกปั่นเหวี่ยงจากนั้นสารเหนือตะกอนจะถูกกำจัดและนำตะกอนออกไป

- หยดวัสดุที่หมุนเหวี่ยง (ตะกอน) และหยดหมึกอินเดียหรือนิโกรซีนลงบนสไลด์ที่สะอาด

- ควรผสมให้เข้ากันดีและปิดทับด้วยแผ่นปิดเพื่อให้หยดกระจายเป็นฟิล์มบาง ๆ โดยไม่ทับขอบ

- ต่อจากนั้นการเตรียมจะติดตั้งบนกล้องจุลทรรศน์

- หากการเตรียมเข้มเกินไปสามารถเจือจางด้วยน้ำได้

การดำเนินการของเทคนิคด้วยสายพันธุ์จากการเพาะเลี้ยง

- ส่วนเล็ก ๆ ของวัฒนธรรมหนุ่มสาวถูกนำไปด้วยเข็มเพาะเมล็ดและละลายในหยดหมึกอินเดียที่วางไว้ก่อนหน้านี้บนสไลด์ที่สะอาด

- มีฝาปิดอยู่ด้านบน

- สังเกตได้ในกล้องจุลทรรศน์ที่ 10X และ 40X

คุณยังสามารถละลายส่วนหนึ่งของอาณานิคมในน้ำกลั่นจากนั้นหยดและผสมกับหมึกอินเดีย ด้วยวิธีนี้การเตรียมจะไม่หนามากนักทำให้สามารถสังเกตโครงสร้างแยกกันได้ หากมีฝูงชนจะสังเกตได้ไม่ดี

วิธีการอื่นมีดังต่อไปนี้:

- วางวัฒนธรรมช่วงล่างที่ปลายด้านหนึ่งของสไลด์

- วางนิโกรซีนหยดที่ปลายด้านเดียวกันแล้วผสม

- ด้วยความช่วยเหลือของสไลด์อื่นให้กระจายตัวอย่างเหมือนกับการทำสเมียร์ทางโลหิตวิทยา

- ปล่อยให้แห้งแล้วสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์

การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์

ก่อนอื่นคุณต้องโฟกัสโดยมีวัตถุประสงค์ 10X เพื่อให้มีมุมมองที่กว้างของสนาม ต่อจากนั้นควรหาที่ว่างชัดเจน หากมีให้โฟกัส 40X เพื่อดูรายละเอียด

ความได้เปรียบ

- มันง่ายต่อการดำเนินการ

- เป็นเทคนิคที่ไม่แพง

- วิธีนี้ไม่ต้องการให้สเมียร์ได้รับความร้อนหรือสารเคมี ดังนั้นจึงสังเกตเห็นจุลินทรีย์โดยไม่มีการบิดเบือน

- การเตรียมสดไม่จำเป็นต้องทำให้แห้งจึงสามารถสังเกตเห็นได้ทันทีสร้างผลลัพธ์ได้อย่างรวดเร็ว

ข้อเสีย

เมื่อประกอบแล้วต้องสังเกตการเตรียมการใหม่ทันที หากปล่อยให้แห้งจะไม่สามารถสังเกตเห็นได้อีกต่อไปและต้องติดตั้งใหม่

การย้อมเนื้อเยื่อด้วยหมึกอินเดีย

ฟังก์ชั่นอื่นที่หมึกอินเดียสามารถตอบสนองได้คือในห้องปฏิบัติการพยาธิวิทยา ใช้กับตัวอย่างเนื้อเยื่อที่ผ่าตัดเพื่อทำเครื่องหมายระยะขอบของเนื้องอก

เนื้อเยื่อที่ทำเครื่องหมายถูกพ่นด้วยกรดอะซิติก สิ่งนี้ทำหน้าที่เป็นตัวแทนและป้องกันไม่ให้หมึกรั่วไหลออกมาเมื่อเนื้อเยื่อต้องผ่านกระบวนการตามปกติสำหรับการเตรียมชิ้นเนื้อ

ขั้นตอนนี้ประกอบด้วยการอาบน้ำเนื้อเยื่อในแอลกอฮอล์และไซลีนจากนั้นแช่ในขี้ผึ้งพาราฟิน เครื่องหมายนี้จะแนะนำพยาธิแพทย์ในการสังเกตเนื้อเยื่อเพื่อระบุว่าขอบของการผ่าตัดแก้ไขหรือจุดสนใจอื่น ๆ อยู่ที่ใด

อ้างอิง

1. « Nigrosina » Wikipedia สารานุกรมเสรี 11 ก.ค. 2560, 22:46 น. UTC. 6 ม.ค. 2019, 16:56 น.: en.wikipedia.org
2. "หมึกจีน". Wikipedia สารานุกรมเสรี 1 ต.ค. 2018, 03:08 UTC. 6 ม.ค. 2019, 18:20 น.: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J และผู้ทำงานร่วมกัน (2549). บุคลากรด้านแรงงานของชุมชนอิสระของ Extremadura วาระเฉพาะเล่ม 4. บรรณาธิการ MAD. เซบียา - สเปน, pp 211-212
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) ผู้เชี่ยวชาญห้องปฏิบัติการช่างเทคนิคบริการสุขภาพกาลิเซีย (SERGAS) วาระเรื่องเฉพาะปริมาณ 2. กองบรรณาธิการ MAD. เซบียา - สเปน, หน้า 79-80
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA