คราบของไรท์: เหตุผลวัสดุเทคนิคและการใช้งาน - ชีววิทยา - 2026

ไรท์คราบเป็นเทคนิคการย้อมสีที่สร้างขึ้นโดยพยาธิวิทยาอเมริกันเจมส์โฮเมอร์ไรท์ในปี 1902 ขึ้นอยู่กับคราบ Romanowsky เนื่องจากคราบ Romanowsky ไม่เสถียร Wright จึงรวมเอาเมทานอลเป็นตัวทำละลายและสารตรึง

สีนี้เป็นสีหลายสีซึ่งหมายความว่าจะสร้างหลายสีขึ้นอยู่กับโครงสร้างที่ดูดซับสีย้อม เทคนิคการย้อมสีนี้ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อทำการตรวจนับเม็ดเลือดขาวที่แตกต่างกันและเพื่อศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเม็ดเลือดแดงเกล็ดเลือดและเม็ดเลือดขาวในเลือดและไขกระดูก

รอยเปื้อนเลือดต่าง ๆ ที่เปื้อนคราบของไรท์ ก. มะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเฉียบพลันข. พลาสโมเดียมไวแวกซ์ภายในเม็ดเลือดแดง. ค. Plasmodium falciparum, macrogametocyte. ง. ลิมโฟไซต์

การใช้งานมีความสำคัญมากเนื่องจากสามารถมองเห็นความผิดปกติในเซลล์ต่างๆของเลือดช่วยในการวินิจฉัยโรคเช่นมะเร็งเม็ดเลือดขาวหรือการติดเชื้อแบคทีเรียหรือปรสิต

บางทีนี่อาจเป็นแอปพลิเคชั่นทั่วไปที่ใช้เทคนิคนี้อย่างไรก็ตามไม่ใช่แอปพลิเคชันเดียว นอกจากนี้ยังมีประโยชน์ในตัวอย่างอื่น ๆ นอกเหนือจากเลือดและไขกระดูกเช่นน้ำมูกเมือกอุจจาระเสมหะตัวอย่างผิวหนังเป็นต้น

เหตุผลสำหรับคราบของไรท์

คราบของไรท์เกิดจากคราบของ Romanowsky ซึ่งประกอบด้วยสารละลายเมธิลแอลกอฮอล์ของสีย้อมที่เป็นกรด (eosin Y) และสีย้อมพื้นฐาน (เมทิลีนบลู) และผลิตภัณฑ์ออกซิเดชั่น

ส่วนผสมของสีย้อมที่ใช้ในคราบของไรท์ทำให้เกิดผลที่เรียกว่า Romanowsky นั่นคือให้สีม่วงที่สวยงามแก่นิวเคลียสของเม็ดเลือดขาวและเม็ดนิวโทรฟิลิกในขณะที่เม็ดเลือดแดงมีสีชมพู

ส่วนประกอบที่รับผิดชอบในการกำหนดขอบเขตสีทั่วไปของคราบของไรท์คือสีน้ำเงิน B และ eosin Y ผลที่สังเกตได้จะขึ้นอยู่กับการจับสีย้อมกับโครงสร้างทางเคมีและปฏิกิริยาของสีน้ำเงิน B และ eosin Y

โครงสร้างที่เป็นกรดเช่นกรดนิวคลีอิกโปรตีนนิวเคลียร์และไซโทพลาสซึมที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะของเซลล์บางชนิดแก้ไขสีน้ำเงิน B (คราบพื้นฐาน)

ในขณะที่โครงสร้างพื้นฐานเช่นฮีโมโกลบินแกรนูลของอีโอซิโนฟิลแบบแบ่งส่วนรวมถึงโครงสร้างเซลล์อื่น ๆ ผูกอีโอซิน Y (สีย้อมกรด)

ผลการย้อมสีอาจได้รับอิทธิพลจากปัจจัยต่างๆเช่นค่า pH ของสีย้อมไรท์บัฟเฟอร์และน้ำยาล้าง เช่นเดียวกับเวลาในการย้อมสีและการตรึง

ดังนั้นแต่ละขั้นตอนในการเตรียมน้ำยาจึงมีความสำคัญและต้องใส่ใจในทุกรายละเอียด

วัสดุ

ไรท์คราบ. สำหรับ 100 มล. จำเป็นต้องมี:

ชั่งคราบไรท์ออก 0.3 กรัมวัดเมทานอล 97 มล. และกลีเซอรอล 3 มล.

การจัดเตรียม

ในครกให้ใส่สีของไรท์ในปริมาณมากและค่อยๆรวมกลีเซอรอลเข้าด้วยกันจนผงละลายหมด

จากนั้นเพิ่มเมทานอลผสมและเทลงในขวดอำพัน

ก่อนใช้ควรเขย่าสารละลายด้วยการเคลื่อนไหวที่นุ่มนวลและกรอง

สารละลายบัฟเฟอร์บัฟเฟอร์

ในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรจะมีการเติมไดโซเดียมไฮโดรฟอสเฟต3.76 กรัม (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) บวกกับโพแทสเซียมฟอสเฟตไดไฮโดรเจน 2.1 กรัม (KH ₂ PO ₄ )

ผสมให้เข้ากันจนน้ำยาที่รวมอยู่ทั้งหมดละลาย ปรับ pH เป็น 7.2 เทลงในขวดแก้วและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง

วัสดุเพิ่มเติมที่จำเป็นในการทำสี

นอกจากนี้จำเป็นต้องใช้วัสดุอื่น ๆ เพื่อให้สามารถใช้เทคนิคการระบายสีได้เช่นสไลด์วัตถุหรือครอบคลุมวัตถุสะพานระบายสีเสื้อยืดที่มีน้ำหรือบัฟเฟอร์สำหรับซักผ้าตัวจับเวลาเพื่อรักษาเวลาการระบายสีและวัสดุที่ทำให้แห้งบางส่วน (กระดาษดูดซับผ้ากอซหรือผ้าฝ้าย)

ส่วนประกอบของคราบไรท์

เมทานอล

แอลกอฮอล์ (เมทานอล) ทำหน้าที่เป็นตัวตรึงเลือดที่เปื้อนไปที่สไลด์

โดยทั่วไปแล้วจะเป็นสารตกตะกอนลดการคายน้ำและการแก้ไขรีเอเจนต์ ดังนั้นหน้าที่ของมันคือการจับตัวเป็นก้อนโปรตีนและทำให้พวกมันไม่ละลายน้ำ แต่ไม่มีการทำลายมัน

เมทานอลเป็นรีเอเจนต์การตรึงสเมียร์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการทั้งหมดเนื่องจากให้ผลลัพธ์ที่ดีกว่าเอทานอล ความเข้มข้นที่เหมาะคือ 99%

แดมเปอร์

บัฟเฟอร์ (สารละลายบัฟเฟอร์) มีหน้าที่ในการปรับหรือรักษา pH ของสีย้อมเนื่องจาก pH ที่ปรับเป็น 7.2 เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับโครงสร้างของเซลล์เพื่อให้สามารถดูดซับสีย้อมได้อย่างเหมาะสม

ในทางกลับกันขั้นตอนการตรึงเมทานอลจะทำให้เซลล์ขาดน้ำและบัฟเฟอร์จะช่วยเติมน้ำให้เซลล์

อีโอซิน (Y)

Eosin มีความสัมพันธ์ในการสร้างบล็อคเนื่องจากเป็นสีย้อมกรด รู้จักกันดีว่า eosin สองประเภทมีความคล้ายคลึงกันมากจนสามารถใช้ทั้งสองชนิดได้โดยได้ผลลัพธ์ที่เหมือนกัน

หนึ่งเรียกว่า eosin Y, eosin สีเหลืองหรือ tetrabromofluorescein และอีกชนิดหนึ่งเรียกว่า eosin B, erythrosin B สีน้ำเงินหรือ dibromodinitrofluorescein อย่างไรก็ตาม eosin Y เป็นที่นิยมใช้มากที่สุด

คุณสมบัติที่สำคัญที่สุดของสีย้อมนี้คือขั้วลบทำให้ดึงดูดโครงสร้างเซลล์ที่มีประจุบวก

เมทิลีนบลู

มันเป็นสีพื้นฐาน คุณสมบัติหลักของมันคือ metachromasia นั่นคือไม่ใช่ว่าโครงสร้างทั้งหมดจะถูกย้อมด้วยสีเดียวกัน แต่ขึ้นอยู่กับองค์ประกอบทางเคมีของโครงสร้างที่มีการทำสี

บางตัวจะเปลี่ยนเป็นสีอ่อนหรือสีน้ำเงินเข้มและบางส่วนจะเปลี่ยนเป็นสีม่วงเข้มหรือสีม่วงซีด

เทคนิค

1- ทำการกระจายตัวอย่างเพื่อให้ฟิล์มบาง ๆ ยังคงอยู่ไม่ว่าจะอยู่บนสไลด์หรือฝาปิด

2- ปล่อยให้แห้งในอากาศประมาณ 2 ชั่วโมง

3 - วางสเมียร์แห้งบนสะพานย้อมสีหรือถาดย้อมสีโดยให้ส่วนที่กระจายตัวอย่างหงายขึ้น

4- คลุมแผ่นงานโดยหยดคราบไรท์ทีละหยดจนทั่วทั้งแผ่น ทิ้งไว้ 5 - 8 นาที

5- คราบควรปกคลุมสไลด์อย่างสมบูรณ์โดยไม่ให้หกล้นขอบ หากในช่วงเวลาสีเริ่มระเหยให้เพิ่มหยดเพิ่มเติมเล็กน้อย

6- จากนั้นเพิ่มโช้คอัพในปริมาณที่เท่ากันเป่าเล็กน้อยจนความเงางามของโลหะปรากฏขึ้น เวลา 10 ถึง 15 นาที

7- ล้างด้วยน้ำประปาวางสายน้ำเบา ๆ จนแผ่นดูเป็นสีชมพู

8- ด้วยผ้ากอซที่แช่ในแอลกอฮอล์ให้นำสีย้อมที่ติดอยู่ด้านหลังของสไลด์ออก

9- ปล่อยให้สเมียร์แห้งสนิทก่อนใส่น้ำมันแช่เพื่อดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์

ยูทิลิตี้

โลหิตวิทยา

เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการย้อมคราบเลือดส่วนปลายสำหรับการตรวจรอยเปื้อนเลือดหนาและสำหรับการศึกษาเซลล์จากตัวอย่างไขกระดูก

เนื่องจากคุณสมบัติทางเคมีของการรวมกันของสีย้อมนี้จึงสามารถจดจำโครงสร้างของเซลล์ได้ง่ายและสามารถแยกแยะประเภทต่างๆของเซลล์ที่มีอยู่ได้

อาการน้ำมูกไหล

เทคนิคนี้มีประโยชน์มากในการระบุเซลล์ของน้ำมูก (เซลล์เยื่อบุผิว, อีโอซิโนฟิลที่แบ่งส่วน, เซลล์โพลีมอร์โฟนิวคลีอร์) ในการวินิจฉัยโรคจมูกอักเสบจากภูมิแพ้

ปรสิตวิทยา

ในแง่นี้มันมีประโยชน์สำหรับการศึกษา Leishmania sp ภายในฮิสทิโอไซต์ของเนื้อเยื่อเซลล์ใต้ผิวหนังในแผลที่ผิวหนัง ในทำนองเดียวกันจะใช้เพื่อระบุเม็ดเลือดขาวในตัวอย่างอุจจาระ (leukogram อุจจาระ)

ในกรณีนี้แพทย์ควรทราบว่าเม็ดเลือดขาวที่มีอยู่ในอุจจาระเป็น polymorphonuclear หรือ mononuclear การค้นพบนี้ใน leukogram ในอุจจาระจะเป็นแนวทางว่าเป็นการติดเชื้อแบคทีเรียหรือไวรัสตามลำดับ

ในทางกลับกันปรสิตที่หมุนเวียนอยู่ในเลือดสามารถพบได้ภายในเม็ดเลือดแดงหรือในพลาสมา ปรสิตที่ต้องการ ได้แก่ Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii และ filariae และในทางสัตวแพทยศาสตร์จะมีประโยชน์ในการค้นหา Theileria equi และ Babesia caballi ซึ่งเป็นสาเหตุของโรค bebesiosis โดยเฉพาะในม้า

คราบไรท์และคราบ Giemsa ทำให้สามารถแยกความแตกต่างของเฮโมปาราไซต์จากส่วนประกอบของเซลล์ปกติได้ สามารถใช้สเปรดได้สองประเภท:

เกลี่ยบาง ๆ

เลือดกระจายเป็นฟิล์มบาง ๆ บนสไลด์ มันถูกย้อมด้วยคราบของไรท์เผยให้เห็นลักษณะของนิวเคลียสและไซโทพลาซึม

หล่นหนา

วิธีการนี้ใช้เพื่อตรวจสอบการปรากฏตัวของปรสิตในเลือดจำนวนมาก

ในการทำเช่นนี้หยดเลือดจำนวนมากจะถูกวางลงบนสไลด์ เมื่อถึงจุดนั้นจะต้องมีการช็อกไฟฟ้าโดยทำให้วงกลมใหญ่ขึ้นและใหญ่ขึ้นจากตรงกลางออกไปด้านนอกโดยใช้ขอบของสไลด์อื่น

สุดท้ายเพื่อให้สามารถสังเกตเห็นปรสิตในรอยเปื้อนที่หนาได้นั้นเม็ดเลือดแดงจะต้องถูกไลท์ด้วยน้ำ

การติดเชื้อทางเดินหายใจ

ในระดับการหายใจเทคนิคนี้ยังมีประโยชน์เนื่องจากเซลล์ที่มีอยู่ในตัวอย่างเสมหะการล้างหลอดลมหรือหลอดลมเป็นสิ่งสำคัญในการวินิจฉัย

ในทำนองเดียวกันเซลล์ polymorphonuclear และ mononuclear cells สามารถแยกแยะได้ที่นี่

แบคทีเรียวิทยา

การใช้เทคนิคนี้ในแบคทีเรียวิทยามีข้อ จำกัด เนื่องจากไม่ดีสำหรับการย้อมสีแบคทีเรียซึ่งเป็นสาเหตุที่ใช้เทคนิคการย้อมสีพิเศษอื่น ๆ ในการย้อมสี

อย่างไรก็ตามมีการใช้เพื่อค้นหาเซลล์เยื่อบุผิวที่มี Chlamydia trachomatis รวมอยู่ในรอยเปื้อนของเยื่อบุท่อปัสสาวะหรือเยื่อบุโพรงมดลูกแม้ว่าจะต้องยอมรับว่าไม่ใช่วิธีที่ดีที่สุดสำหรับสิ่งนี้

นอกจากนี้ยังสามารถสังเกตเห็นแบคทีเรียที่มีลักษณะคล้ายเกลียวเช่น Borrelia burgdorferi ในเซลล์เม็ดเลือดแดงในผู้ป่วยที่ติดเชื้อเช่นเดียวกับ morulae หรือการรวมตัวของ Ehrlichia sp ในไซโตพลาสซึมของเซลล์เม็ดเลือดขาวโมโนไซต์หรือนิวโทรฟิลในเลือดสเมียร์

Mycology

Histoplasma capsulatum เป็นเชื้อราที่ทำให้เกิดโรคซึ่งมักได้รับการวินิจฉัยโดยการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ของตัวอย่างเนื้อเยื่อต่างๆซึ่งเปื้อนด้วยคราบของไรท์

โครงสร้างของตัวอย่างเลือดสังเกตได้อย่างไรกับคราบของไรท์?

ที่มา: Retamales E, Mazo V. Institute of Public Health, Government of Chile คำแนะนำสำหรับการย้อมคราบเลือดสำหรับการอ่านค่า hemogram

คำแนะนำสำหรับการย้อมสีที่ดี

สไลด์ตัวอย่างเลือดควรผึ่งลมให้แห้งตามธรรมชาติ ควรทารอยเปื้อนให้บางที่สุดเพื่อให้สีย้อมติดได้ดีขึ้นและหลีกเลี่ยงการย้อมสีมากเกินไป

สำหรับการย้อมสีที่มีคุณภาพสูงขอแนะนำให้ทำการย้อมภายในสองชั่วโมงหลังจากเตรียมการละเลง ในทางกลับกันตัวอย่างที่ดีที่สุดคือเลือดฝอยที่ไม่มีสารกันเลือดแข็งตัว

อย่างไรก็ตามหากใช้เลือดดำควรใช้เป็นยาต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA ไม่ใช่เฮปารินเนื่องจากสารหลังสามารถทำให้โครงสร้างของเซลล์เสียรูปได้

เพื่อหลีกเลี่ยงการเสื่อมสภาพของสีที่เตรียมไว้ควรเก็บไว้ในที่แห้ง

ในระหว่างขั้นตอนการซักขอแนะนำให้ใช้น้ำที่ปรับค่า pH เป็นกลาง

สุดท้ายขอแนะนำให้ทดสอบวิธีการย้อมสีที่ใช้ในห้องปฏิบัติการเป็นครั้งคราว

ทำได้โดยการย้อมสีตัวอย่างหรือลวดลายเพิ่มเติมเพื่อเป็นการควบคุมคุณภาพ ขั้นตอนนี้มีความสำคัญเนื่องจากต้องแน่ใจว่ามีการเตรียมการย้อมอย่างถูกต้องและเวลาในการย้อมสีได้มาตรฐานที่ดี

หากแผ่นลวดลายมีสีไม่ดีแสดงว่ามีปัญหาที่ต้องแก้ไข

ข้อผิดพลาดทั่วไปในการย้อมสีไรท์

การย้อมสีซีดมาก

รอยเปื้อนที่ซีดมากมักเกิดจากการย้อมสีที่สั้นมากหรือการซักมากเกินไป แก้ไขโดยการยืดระยะเวลาการสัมผัสกับสีย้อมหรือลดเวลาในการซัก

ตกตะกอนของสี

การปรากฏตัวของสีย้อมตกตะกอนในรอยเปื้อนอาจมีสาเหตุหลายประการอย่างไรก็ตามสาเหตุที่พบบ่อยที่สุดคือ: การใช้สีย้อมที่ไม่มีการกรองการย้อมสีบนสะพานการย้อมสีที่ไม่สม่ำเสมอการใช้ผ้าปูที่นอนที่สกปรกด้วยฝุ่นหรือไขมันไม่ได้ล้างให้สะอาด การย้อมสีที่สมบูรณ์

สเมียร์สีแดงหรือน้ำเงินมาก

บัฟเฟอร์มีหน้าที่รับผิดชอบต่อ pH ของสีย้อม สีย้อมที่มีค่า pH ต่ำกว่าที่ระบุไว้ (เป็นกรด) จะส่งผลให้เกิดรอยเปื้อนสีแดงมาก

ถ้า pH ของสีย้อมสูงกว่า (ด่าง) จะได้สเมียร์สีน้ำเงินมาก

โหมดการจัดเก็บ

ควรเก็บน้ำยาไว้ที่อุณหภูมิห้อง

อ้างอิง

1. Gutiérrez V. การศึกษาเปรียบเทียบระหว่างวิธีการย้อมสีไรท์กับการทดสอบ Elisa เพื่อวินิจฉัยโรคเออร์ลิชิโอซิสของสุนัขในเมืองซานเปโดรซูลาประเทศฮอนดูรัส 2551. วิทยานิพนธ์ปริญญาเพื่อรับปริญญาสัตวแพทยศาสตร์. มหาวิทยาลัยซานคาร์ลอสแห่งกัวเตมาลา
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. คราบพื้นฐานในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา การวิจัยในความพิการ. 2014; 3 (1): 10-18.
3. "คราบของไรท์" Wikipedia สารานุกรมเสรี 18 พฤษภาคม 2018, 00:05 UTC. 8 ธ.ค. 2561 20:37 น
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó ความถี่ของ Babesia spp. ในการล่าม้ากอร์โดบา (โคลอมเบีย) รายได้ udcaactual divulg cient 2556; 16 (2): 451-458
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA
6. Retamales E, Mazo V. สถาบันสาธารณสุขของรัฐบาลชิลี คำแนะนำสำหรับการย้อมคราบเลือดสำหรับการอ่านค่า hemogram