- รากฐาน
- ความหลากหลายของสี
- เทคนิค
- วัสดุ
- May Grünwaldย้อมสารละลายเข้มข้น
- Giemsa คราบเข้มข้น
- การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ที่ pH 7.2
- ขั้นตอนการย้อมสีเลือดหรือไขกระดูก
- โหมดคลาสสิก
- โหมดด่วน
- เทคนิคการระบายสีรอยเปื้อนของน้ำอสุจิ
- ข้อมูลจำเพาะที่สำคัญ
- การประยุกต์ใช้งาน
- เซลล์วิทยาช่องคลอด
- ตัวอย่างอสุจิ
- อ้างอิง
พฤษภาคมGrünwald-Giemsaหรือ Pappenheim คราบเป็นเทคนิคการย้อมสีที่ผสมค่า Giemsa และพฤษภาคมGrünwaldน้ำยา ใช้สำหรับการสร้างความแตกต่างของเซลล์เม็ดเลือดปกติและผิดปกติในเลือดส่วนปลายและรอยเปื้อนไขกระดูกเช่นเดียวกับการย้อมสีของส่วนเนื้อเยื่อและตัวอย่างทางเซลล์วิทยา
รีเอเจนต์ทั้งสอง -Giemsa และ May Grünwald-ได้มาจากการย้อมสีแบบ Romanowsky ซึ่งเป็นเทคนิคที่ใช้การผสมระหว่างสีที่เป็นกรดและสีพื้นฐาน
รอยเปื้อนแสดงนิวโทรฟิลที่แบ่งส่วนและไมล์ไซต์ในกรณีของมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดไมอีลอยด์เรื้อรังซึ่งย้อมด้วยคราบ May Grünwald Giemsa ดร. รามอนไซมอน - โลเปซ (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) ผ่าน Wikipedia.org
Giemsa ได้ปรับปรุงเทคนิคโดยการทำให้ส่วนผสมของ eosin, methylene blue และอนุพันธ์คงที่ด้วยกลีเซอรอล May Grünwaldใช้ eosin และ methylene blue แทนโดยใช้เมทานอลเป็นตัวทำละลาย การผสมผสานเชิงกลยุทธ์นี้ให้ผลลัพธ์ที่ยอดเยี่ยม
แม้ว่าในแง่ของการสังเกตสัณฐานวิทยาของเซลล์จะทำหน้าที่ในลักษณะเดียวกันกับคราบ Giemsa และ Wright แต่เทคนิคนี้ช่วยปรับปรุงก่อนหน้านี้โดยการปรับแต่งการย้อมสีของปรสิตที่เป็นสาเหตุของโรคมาลาเรียโรค Chagas โรค leishmaniasis และ Trichomoniasis
นอกจากนี้ยังได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเป็นเทคนิคที่มีประโยชน์มากสำหรับการศึกษาทางเซลล์วิทยาของน้ำอสุจิ มันมีความโดดเด่นไม่เพียง แต่แสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของอสุจิเท่านั้น แต่ยังช่วยให้สามารถสร้างความแตกต่างของเม็ดเลือดขาวเซลล์เยื่อบุผิวและเซลล์สร้างอสุจิได้อย่างมีประสิทธิภาพ
รากฐาน
เทคนิคดังกล่าวเป็นไปตามรากฐานของคราบ Romanowsky ซึ่งสีย้อมที่เป็นกรดมีความสัมพันธ์ที่เลือกได้สำหรับส่วนประกอบพื้นฐานของเซลล์และส่วนประกอบที่เป็นกรดจะดึงดูดคราบพื้นฐาน
อธิบายในอีกทางหนึ่งว่าโครงสร้างของเซลล์และสีย้อมมีประจุไฟฟ้าบวกหรือลบ เช่นเดียวกับค่าใช้จ่ายที่ขับไล่และดึงดูดประจุที่แตกต่างกัน
ตัวอย่างเช่นสีย้อมพื้นฐานเช่นเมทิลีนบลูจะมีประจุบวกและดึงดูดให้โครงสร้างที่มีประจุลบ นั่นคือเหตุผลที่สีย้อมนี้ย้อมนิวเคลียสที่อุดมไปด้วย DNA และ RNA ที่มีกลุ่มฟอสเฟตที่มีประจุลบ
แกรนูลของเบโซฟิลที่แบ่งส่วนและไซโทพลาสของเซลล์เม็ดเลือดขาวโมโนนิวเคลียร์ที่มี RNA จะถูกย้อมด้วย
ในทำนองเดียวกันสีย้อมกรดมีประจุลบดังนั้นจึงจับกับโครงสร้างที่มีประจุบวกเช่นเม็ดเลือดแดงและแกรนูลของอีโอซิโนฟิลแบบแบ่งส่วน สำหรับแกรนูลของนิวโทรฟิลที่แบ่งส่วนสิ่งเหล่านี้จะแก้ไขสีย้อมทั้งสอง
ความหลากหลายของสี
ในเทคนิคนี้การรวมกันของปฏิกิริยาระหว่างสีย้อมออร์โธสีและสีเมทาโครมาติกจะอยู่ร่วมกัน Orthochromatics (eosin และ methylene blue) จับกับโครงสร้างเซลล์ที่เกี่ยวข้องและให้สีที่คงที่ซึ่งไม่แตกต่างกัน
ในทางกลับกัน metachromats (อนุพันธ์ของ methylene blue azure A และ azure B) จะเปลี่ยนสีเดิมเมื่อติดกับโครงสร้างเฉพาะและอาจมีเฉดสีที่หลากหลาย
ในที่สุดขั้นตอนที่การแก้ปัญหา May Grünwaldต้องใช้น้ำเนื่องจากหากไม่มีสิ่งนี้สีย้อมจะซึมเข้าไปในโครงสร้าง แต่จะไม่แก้ไข เพื่อให้สิ่งนี้เกิดขึ้นสีย้อมจะต้องกลายเป็นขั้วหรือไอออไนซ์จึงจะสามารถตกตะกอนและจับกับโครงสร้างที่เกี่ยวข้องได้
เทคนิค
วัสดุ
- สไลด์สไลด์
- สะพานแห่งการระบายสี
- โซลูชัน May-Grünwald
- Giemsa คราบ
- น้ำกลั่น.
May Grünwaldย้อมสารละลายเข้มข้น
ต้องชั่ง eosin-methylene blue 0.25 กรัม (คราบตาม May Grünwald) และละลายในเมทานอล 100 มล. จากนั้นผสมส่วนผสมเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและพักไว้ 24 ชั่วโมง เมื่อหมดเวลาก็กรอง
ในการใช้เทคนิคนี้สีย้อม May Grünwaldต้องเจือจางดังนี้สำหรับสีย้อมเจือจาง 200 มล. วัดสารละลายเข้มข้น 30 มล. เติมสารละลายบัฟเฟอร์ 20 มล. และน้ำกลั่น 150 มล. ปรับ pH7.2-7.3 . หลังจากนั้นจะผสมและกรอง
Giemsa คราบเข้มข้น
ต้องชั่งสีฟ้า azure-eosin-methylene blue 0.5 กรัมละลายในเมทานอล 50 มล. และกลีเซอรีน 50 มล.
ในการดำเนินการเทคนิคนี้ให้เจือจาง 1:10 ด้วยสารละลายบัฟเฟอร์และปล่อยให้พัก 10 นาที สามารถกรองได้หากจำเป็น
การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ที่ pH 7.2
ควรชั่งน้ำหนัก:
- โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 40 มก. (KH2PO4)
- di-sodium hydrogen phosphate 12-hydrate (Na2HPO4) 151 มก.
สารประกอบทั้งสองละลายในน้ำ 100 มล.
ขั้นตอนการย้อมสีเลือดหรือไขกระดูก
มีสองโหมด: คลาสสิกและเร็ว
โหมดคลาสสิก
- ปิดรอยเปื้อนเป็นเวลา 2 ถึง 3 นาทีด้วยสารละลาย May-Grünwaldที่เจือจาง
- ล้างด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์เพื่อขจัดสารละลายก่อนหน้านี้
- คลุมด้วยน้ำยาล้างบัฟเฟอร์เดียวกันทิ้งไว้ 1 นาที แนวคิดก็คือสีย้อมก่อนหน้านี้ได้รับการแก้ไขให้กับโครงสร้างและในเวลาเดียวกันเซลล์จะได้รับความชุ่มชื้น
- เติมทิงเจอร์ Giemsa เจือจาง 12 หยดลงในน้ำบัฟเฟอร์แล้วเป่าให้เข้ากันและทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน พักไว้ 15 ถึง 20 นาที
- ล้างรอยเปื้อนด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์แล้วผึ่งลมให้แห้ง
- โฟกัสและดูเซลล์เม็ดเลือดที่เปื้อนภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงโดยใช้วัตถุประสงค์ 40X หากจำเป็นสามารถใช้ 100X ได้
โหมดด่วน
- ปิดรอยเปื้อนด้วยคราบ May Grünwaldเจือจางเป็นเวลา 1 นาที
- ล้างด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์
- ปิดฝาด้วยน้ำบัฟเฟอร์แล้วพักไว้ 1 นาที
- เติมคราบ Giemsa ที่เจือจางแล้วทิ้งไว้ 5 นาที
- ล้างด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์และปล่อยให้อากาศแห้ง
เทคนิคที่อธิบายไว้นี้เป็นแนวทางปฏิบัติ แต่ควรคำนึงถึงว่าขั้นตอนและเวลาในการย้อมสีแตกต่างกันไปตาม บริษัท การค้าที่จัดจำหน่ายน้ำยา ขอแนะนำให้ทำตามขั้นตอนที่ระบุไว้อย่างเคร่งครัดในบ้านพาณิชย์แต่ละหลัง
เทคนิคการระบายสีรอยเปื้อนของน้ำอสุจิ
1- ปิดรอยเปื้อนด้วยชั้นบาง ๆ ของสารละลาย May Grünwaldเป็นเวลา 4 นาที
2- นำสีออกแล้วล้างด้วยน้ำกลั่น
3- วางชั้นของ Giemsa ที่เจือจาง (1:10) ในน้ำกลั่นเป็นเวลา 15 นาที
4- นำสีย้อมออกแล้วล้างด้วยน้ำกลั่น
5- ปล่อยให้แห้งและสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์
คาดสีด้วยคราบ May Grünwald Giemsa
ข้อมูลจำเพาะที่สำคัญ
เทคนิคนี้กำหนดให้รีเอเจนต์และน้ำยาซักผ้าต้องปรับ pH เป็น 7.2 -7.3 เพื่อให้ความใกล้เคียงของสีย้อมสำหรับโครงสร้างเซลล์ไม่ผิดเพี้ยนและสีสุดท้ายที่คาดไว้จะไม่แตกต่างกัน
การประยุกต์ใช้งาน
เทคนิคนี้ใช้โดยห้องปฏิบัติการทางคลินิกเพื่อย้อมคราบเลือดส่วนปลายและรอยเปื้อนไขกระดูกส่วนของเนื้อเยื่อและเซลล์วิทยา
ในสาขาโลหิตวิทยาเทคนิคนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งในการศึกษาความผิดปกติของเซลล์ทั้งในด้านรูปร่างขนาดและจำนวน เป็นเครื่องมือที่มีค่ามากสำหรับการวินิจฉัยโรคบางชนิดเช่นมะเร็งเม็ดเลือดขาวและดอกไม้ทะเล
นอกจากนี้ยังมีประโยชน์ที่โดดเด่นเมื่อมองหาปรสิตในบริเวณโลหิตวิทยา (Plasmodium sp และ Trypanosoma cruzi) หรือพื้นที่ทางเนื้อเยื่อวิทยา (Leishmanias sp)
เซลล์วิทยาช่องคลอด
เกี่ยวกับเซลล์วิทยาช่องคลอดเทคนิคนี้มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการสังเกต Trichomonas vaginalis นี่เป็นการค้นพบที่สำคัญเนื่องจากการปรากฏตัวของมันจำลองมะเร็งในภาพแหล่งกำเนิดซึ่งจะหายไปในภายหลังเมื่อปรสิตถูกกำจัด
ตัวอย่างอสุจิ
เป็นเครื่องมือที่เหมาะสำหรับการศึกษาตัวอย่างอสุจิเนื่องจากให้ข้อมูลที่มีประโยชน์เกี่ยวกับคุณภาพของตัวอสุจิ
ข้อมูลที่นำเสนอต้องเกี่ยวข้องกับจำนวนและสัณฐานวิทยาเป็นหลักเช่นเดียวกับเซลล์ที่มีร่วมกันซึ่งอาจมีอยู่และมีความสำคัญอย่างยิ่งเช่นเซลล์สืบพันธุ์เม็ดเลือดขาวและเซลล์เยื่อบุผิว
ด้วยการวิเคราะห์นี้สามารถอธิบายความผิดปกติที่พบในตัวอสุจิที่ศีรษะลำคอส่วนกลางและชิ้นส่วนหลัก
นอกจากนี้ยังสามารถช่วยในการแสดงกรณีของ hemospermia (การปรากฏตัวของเม็ดเลือดแดงในน้ำอสุจิ) และมะเร็งเม็ดเลือดขาวหรือ piospermia (จำนวนเม็ดเลือดขาวที่เพิ่มขึ้นในน้ำอสุจิ)
อ้างอิง
- Costamagna S, Prado M. การตรวจสอบความถูกต้องของการทดสอบสดพฤษภาคมGrünwald-Giemsa และคราบ Gram และอาหารเลี้ยงเชื้อสำหรับการวินิจฉัย Trichomonas vaginalis พาราซิทอล. พ.ศ. 2544; 25 (1-2): 60-64. มีจำหน่ายใน: scielo
- ห้องปฏิบัติการ Merck KGaA พฤษภาคมGrünwald eosin methylene blue สำหรับกล้องจุลทรรศน์
- "คราบ May-Grünwald-Giemsa" Wikipedia สารานุกรมเสรี 15 พ.ย. 2018, 14:37 น. UTC. 8 ม.ค. 2019, 04:29 น.: en.wikipedia.org
- ห้องปฏิบัติการเคมีแก้ว Panreac รีเอเจนต์สำหรับเทคนิคทางเนื้อเยื่อโลหิตวิทยาและจุลชีววิทยา มีจำหน่ายที่: glasschemicals.com
- Retamales E, Manzo V. คำแนะนำสำหรับการย้อมสีเลือดเพื่ออ่านค่า hemogram ห้องปฏิบัติการชีวการแพทย์แห่งชาติและอ้างอิง สถาบันสาธารณสุขแห่งชิลี.
- Sarabia L. Spermiogram ตามเกณฑ์ของ WHO โปรแกรมกายวิภาคศาสตร์และชีววิทยาพัฒนาการ. คณะแพทยศาสตร์. มหาวิทยาลัยชิลี. มีจำหน่ายที่: pp.centramerica.com