การย้อมสี KINYOUN: เหตุผลและเทคนิค - ชีววิทยา - 2026

การย้อมสี Kinyounเป็นเทคนิคการย้อมสีที่ใช้ในการย้อมเชื้อแบคทีเรียและปรสิตที่ทนกรดแอลกอฮอล์ เกิดจากการดัดแปลงสีของ Ziehl-Neelsen เทคนิคทั้งสองได้รับการตีความในลักษณะเดียวกัน แต่แตกต่างกันในสององค์ประกอบ: ในการเตรียมน้ำยาหลักและในเทคนิค Kinyoun ไม่ใช้ความร้อน

ด้วยเหตุนี้จึงเรียกอีกอย่างว่า Ziehl-Neelsen ที่ผ่านการดัดแปลงเย็นหรือ Kinyoun cold stain มีการระบุไว้สำหรับการย้อมสีของ Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, mycobacteria ผิดปกติ, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris และ Cyclosporas cayetanensis

Cryptosporidium parvum ย้อมด้วย Kinyoun stain พันลพอนุสรณ์พรเพิ่มจากวิกิมีเดียคอมมอนส์

เป็นที่น่าสังเกตว่า Nocardia เปื้อนอย่างอ่อนด้วยเทคนิคนี้เนื่องจากมีความต้านทานกรด - แอลกอฮอล์บางส่วนดังนั้นสำหรับสกุลนี้จึงมีการปรับเปลี่ยนวิธีการ

ในทางกลับกันเทคนิค Kinyoun แบบเย็นได้ถูกรวมเข้ากับเทคนิคไตรโครเมี่ยมที่แก้ไขโดย Didier สำหรับการตรวจหา coccidia (Cryptosporidium parvum และ Isospora belli) และสปอร์ไมโครสปอริเดีย (Enterocytozoon bieneusi และ Encephalitozoon ลำไส้)

รากฐาน

น้ำยาย้อมสีหลักคือคาร์โบฟุคซินหรือคาร์โบลฟูซินซึ่งมีคุณสมบัติในการจับกับกรดคาร์โบลิกที่มีอยู่ภายในผนังเซลล์ข้าวเหนียวที่มีไขมันสูง (กรดไมโคลิก) ของมัยโคแบคทีเรียและปรสิตบางชนิด

พันธะนี้ไม่ถูกต่อต้านโดยกรดฟอกขาว ดังนั้นจุลินทรีย์จึงถูกกำหนดให้เป็นกรดเร็ว

ซึ่งแตกต่างจากเทคนิค Ziehl-Neelsen ซึ่งแก้ไขสีย้อมด้วยความร้อน - ในเทคนิค Kinyoun ขั้นตอนนี้ไม่จำเป็นเนื่องจากสารละลายคาร์โบลิกฟูซินที่เตรียมไว้สำหรับเทคนิคนี้มีฟีนอลที่มีความเข้มข้นสูง

ฟีนอลจะละลายวัสดุลิพิดที่ผนังเซลล์ทำให้สีย้อมคาร์โบลฟุคซินเข้า หลังจากสีย้อมซึมเข้าไปแล้วก็ยังคงอยู่แม้จะล้างด้วยกรดแอลกอฮอล์แล้วก็ตาม

ด้วยวิธีนี้จุลินทรีย์ที่เร็วเป็นกรดจะมีสีแดงลักษณะเฉพาะในขณะที่ทุกสิ่งที่ไม่เร็วเป็นกรดจะเปลี่ยนสีและมีคราบสีน้ำเงิน

เทคนิค

วัสดุ

- แก้ไข carbol fuchsin

- แอลกอฮอล์ - กรด

- เมทิลีนบลู

การเตรียม Kinyoun carbol fuchsin

- Fuchsin พื้นฐาน: 4 gr.

- ฟีนอล: 8 มล.

- แอลกอฮอล์ (95%): 20 มล.

- น้ำกลั่น 100 มล.

Fuchsin พื้นฐานควรละลายอย่างช้าๆในแอลกอฮอล์ผสมอย่างต่อเนื่อง ต่อจากนั้นฟีนอลที่ตกผลึกจะถูกละลายในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 56 ° C เมื่อละลายแล้ว 8 มล. จะถูกเติมลงในสารละลายฟูซินที่เตรียมไว้ด้านบน

การเตรียมกรด - แอลกอฮอล์

- กรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น: 3 มล.

- เอทานอล (95%): 97 มล.

ต้องมีการวัดรวมและผสม

การเตรียมสีย้อมเมทิลีนบลูคอนทราสต์

- เมทิลีนบลู: 0.3 ก.

- น้ำกลั่น 100 มล.

มันชั่งและละลาย

เทคนิคการย้อมสี Kinyoun

1- เตรียมสเมียร์โดยตรงจากตัวอย่างซึ่งอาจเป็นเสมหะของเหลวในปอดตะกอนปัสสาวะน้ำไขสันหลังหรืออุจจาระเป็นต้น หรือจากสารแขวนลอยจุลินทรีย์ที่ได้จากโคโลนีบริสุทธิ์ที่พัฒนาในอาหารเลี้ยงเชื้อหลัก

2- แก้ไขรอยเปื้อนด้วยความร้อน

3- วางสเมียร์บนสะพานย้อมสีแล้วปิดทับด้วยน้ำยา Kinyoun carbol fuchsin ที่เตรียมไว้ พักไว้ 3 ถึง 5 นาที

4- ล้างด้วยน้ำกลั่น

5- ฟอกด้วยแอลกอฮอล์ที่เป็นกรดเป็นเวลา 3 นาทีแล้วล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น

6- ฟอกอีกครั้งด้วยกรดแอลกอฮอล์เป็นเวลา 1 หรือ 2 นาทีจนกว่าจะไม่มีสีออกมาอีก

7- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้สะเด็ดน้ำวางสไลด์ในแนวตั้ง

8- ปิดฝาด้วยเมทิลีนบลูและทิ้งไว้ 4 นาที

9- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้อากาศแห้ง

10- ตรวจสอบที่ 40X แล้วที่ 100X

ในการปรับปรุงและเร่งการย้อมสีของจุลินทรีย์ที่มีฤทธิ์เป็นกรดให้เพิ่มสารช่วยทำให้เปียก 1 หยด (เช่น Tergitol No. 7) กับ Kinyoun Carbol Fuchsin 30 ถึง 40 มล.

ห้องปฏิบัติการบางแห่งเปลี่ยนสีย้อมสีเมทิลีนบลูคอนทราสต์เป็นสีเขียวสดใสหรือกรดปิกริก อันแรกให้สีเขียวกับพื้นหลังและอันที่สองสร้างสีเหลือง

เทคนิคพิเศษ Kinyoun สำหรับ Nocardias

เพื่อปรับปรุงการย้อมสีของแบคทีเรียในสกุล Nocardia จะใช้การปรับเปลี่ยนของ Kinyoun stain เทคนิคมีดังนี้:

1- ปิดรอยเปื้อนด้วย Kinyoun carbol fuchsin เป็นเวลา 3 นาที

2- ล้างด้วยน้ำกลั่น

3- เปลี่ยนสีสั้น ๆ ด้วยแอลกอฮอล์ที่เป็นกรดเตรียมไว้ที่ 3% จนกว่าจะไม่มีสีอีกต่อไป

4- ล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น

5- ปิดฝาด้วยเมทิลีนบลูและปล่อยทิ้งไว้ 30 วินาที

6- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้อากาศแห้ง

เทคนิคคาร์โบลฟูซินและไตรโครเมี่ยมแบบผสมผสานที่แก้ไขโดย Didier

เทคนิคนี้แนะนำสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอุจจาระสำหรับสปอร์ coccidia และ Microsporidium ในเวลาเดียวกัน ขั้นตอนในการปฏิบัติตามมีดังนี้:

1- ปิดรอยเปื้อนด้วย Kinyoun carbol fuchsin เป็นเวลา 10 นาที

2- นำสีออกแล้วล้างด้วยน้ำกลั่น

3- Bleach เป็นเวลา 30 วินาทีด้วยแอลกอฮอล์กรดไฮโดรคลอริก

4- ล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น

5- ปิดรอยเปื้อนด้วยสารละลายไตรโครเมี่ยมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 ° C

6- ล้างด้วยน้ำกลั่น

7- Bleach เป็นเวลา 10 วินาทีด้วยแอลกอฮอล์กรดอะซิติก

8- ล้างรอยเปื้อนเป็นเวลา 30 วินาทีโดยใช้เอทานอล 95%

ระบบประกันคุณภาพ

ในการควบคุมเชิงบวกจะมีการเตรียมรอยเปื้อนด้วยเชื้อ Mycobacterium tuberculosis และย้อมสีด้วยน้ำยาที่เตรียมไว้เพื่อตรวจสอบว่าแบคทีเรียมีสีที่เหมาะสม (สีแดง - บานเย็น)

นอกจากนี้ยังสามารถใช้การควบคุมเชิงลบโดยการเตรียมสเมียร์ด้วยสายพันธุ์อื่นที่ไม่ใช่กรดแอลกอฮอลอย่างรวดเร็วดังนั้นการตรวจสอบว่าตัวอย่างทั้งหมดใช้สีที่ตัดกัน

เทคนิค Kinyoun เมื่อเทียบกับเทคนิค Ziehl-Neelsen

เทคนิค Kinyoun นั้นง่ายกว่าเนื่องจากช่วยลดขั้นตอนการทำความร้อน แต่ข้อได้เปรียบหลักคือหลีกเลี่ยงการปล่อยไอระเหยเป็นพิษสูงและก่อให้เกิดมะเร็งในระยะยาว ดังนั้นคราบคินยูนจึงปลอดภัยกว่าสำหรับการย้อมสีบุคลากร

สิ่งสำคัญคือต้องคำนึงถึงว่าต้องใช้ความระมัดระวังไม่ให้รีเอเจนต์สัมผัสกับผิวหนังโดยตรงเนื่องจากมีฤทธิ์กัดกร่อนและสารฟอกขาวติดไฟได้

สำหรับข้อเสียการสเมียร์เชิงลบไม่จำเป็นต้องบ่งบอกว่าไม่มีสิ่งมีชีวิต นอกจากนี้การปรากฏตัวของเศษเซลล์อาจทำให้เกิดผลบวกที่ผิดพลาดซึ่งนำไปสู่ความสับสนในการวินิจฉัย

การอ้างอิง

1. เคมีคลินิกประยุกต์. (2016) BK Kinyoun Kit มีจำหน่ายที่: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel Kinyoun stain และ Coccidia 2 ตัวใน HIV วารสารการแพทย์นพ. ปี 2011 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินาบรรณาธิการ Panamericana SA
5. ผู้ร่วมให้ข้อมูล Wikipedia “ คินยูนคราบ” Wikipedia สารานุกรมเสรี Wikipedia, สารานุกรมเสรี, 8 ก.พ. 2018 เว็บ. 5 ม.ค. 2019
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. การใช้เทคนิคการย้อมสีสำหรับการวินิจฉัย Coccidia และ Microsporidia พร้อมกัน สถาบันสุขอนามัยแห่งมหาวิทยาลัยสาธารณรัฐ มอนเตวิเดโอ อุรุกวัย. มีจำหน่ายที่: Hygiene.edu.uy