การย้อมสีแคปซูล: เหตุผลและเทคนิค - ชีววิทยา - 2026

แคปซูลย้อมสีเป็นเทคนิคการย้อมสีที่แตกต่างกันซึ่งมีคุณสมบัติของโครงสร้างความเครียด polysaccharide รอบแบคทีเรียบางชนิดและยีสต์ที่เรียกว่าแคปซูล ใช้ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกเพื่อช่วยในการวินิจฉัยโรคบางอย่างที่เกิดจากจุลินทรีย์ที่มีฝาปิด

นอกจากนี้ยังใช้ในห้องปฏิบัติการการสอนสำหรับการสาธิตโครงสร้างทางสัณฐานวิทยานี้ให้กับนักเรียนที่ประกอบอาชีพด้านวิทยาศาสตร์สุขภาพเช่นการแพทย์การวิเคราะห์ทางชีวภาพการพยาบาลหรือเทคโนโลยีทางเซลล์วิทยาเป็นต้น

Klebsiella pneumoniae เปรอะเปื้อนด้วยคราบแคปซูล วิธีการหมึกอินเดียด้วย Safranin ที่มา: А.А.В

มีเทคนิคง่ายๆหลายประการในการแสดงให้เห็นถึงการมีอยู่ของแคปซูลในจุลินทรีย์ที่มีอยู่ ได้แก่ คราบลบคราบแอนโธนีและตัวแปรที่รวมสองอย่างก่อนหน้านี้

การย้อมสีเชิงลบส่วนใหญ่จะใช้ในตัวอย่าง CSF เมื่อสงสัยว่ามียีสต์ Cryptococcus neoformans ยีสต์นี้เป็นสาเหตุของเยื่อหุ้มสมองอักเสบที่พบบ่อย

เทคนิคนี้ใช้หมึกนิโกรซินหรืออินเดียและอาศัยการสร้างความแตกต่างระหว่างพื้นหลังของการเตรียมและแคปซูลที่ไม่สามารถยอมรับได้ของจุลินทรีย์ พื้นหลังเปลี่ยนเป็นสีเข้มและแคปซูลไม่มีสี ด้วยวิธีนี้โครงสร้างนี้จะถูกเปิดเผย

เกี่ยวกับเทคนิค Anthony อาจกล่าวได้ว่าส่วนใหญ่ใช้ในห้องปฏิบัติการสอนเพื่อแสดงโครงสร้างโพลีแซคคาไรด์ในแบคทีเรียเช่น Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae และ Neisseria meningitidis

การใช้เทคนิคนี้เพื่อวัตถุประสงค์ในการวินิจฉัยนั้นหายากมากเนื่องจากมีการทดสอบตามปกติอื่น ๆ ที่อนุญาตให้ระบุจุลินทรีย์เหล่านี้ได้

รากฐาน

แคปซูลเป็นโครงสร้างที่แข็งแรงของธรรมชาติโพลีแซคคาไรด์ สิ่งนี้ช่วยปกป้องจุลินทรีย์จาก phagocytosis ดังนั้นจึงเป็นโครงสร้างที่เจาะยาก

นั่นคือเหตุผลที่คราบแคปซูลขึ้นอยู่กับความเปรียบต่าง สีย้อมติดด้านล่างของสารเตรียมในขณะที่แคปซูลยังคงไม่มีสี

ดังนั้นด้วยเทคนิคเหล่านี้แคปซูลจึงสามารถจดจำได้ง่าย หากจุลินทรีย์ไม่มีแคปซูลจะไม่สามารถแยกแยะได้ด้วยสีประเภทนี้เพราะทุกอย่างจะถูกย้อมเป็นสีเดียวกัน

เทคนิคทั้งหมดที่ใช้ในการทำสีแคปซูลมีเหตุผลเหมือนกันแม้จะใช้สีย้อมและขั้นตอนที่แตกต่างกัน

เทคนิคที่ตราไว้หุ้นละ

-Anthony คราบ

คราบของแอนโธนี่ใช้คริสตัลไวโอเลตเป็นคราบ สิ่งนี้จะทำให้ตัวแบคทีเรียเปื้อนและพื้นหลังเป็นสีม่วง

ในทางกลับกันใช้คอปเปอร์ซัลเฟต 20% สิ่งนี้ทำหน้าที่เป็นน้ำยาซักผ้านั่นคือจะกำจัดผลึกสีม่วงส่วนเกินออกจากการเตรียมทำให้แคปซูลใส แต่ไม่มีตัวแบคทีเรียหรือพื้นหลังที่สูญเสียสี

วัสดุ

- นมสีรุ้ง

- สไลด์

- คริสตัลสีม่วง 1%

- คอปเปอร์ซัลเฟต 20%

- กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

- แช่น้ำมัน

กระบวนการ

เทคนิคนี้ประกอบด้วย:

1. เพาะเชื้อจุลินทรีย์ในน้ำนมสีรุ้งเป็นเวลา 36 ชั่วโมง
2. วางวัฒนธรรมหยดที่ปลายสไลด์และข้างๆวางแก้วไวโอเล็ตหยดผสมและเกลี่ยด้วยปลายสไลด์อีกอัน
3. ผึ่งลมให้แห้งอย่าตั้งไว้ในความร้อน
4. ล้างด้วยสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 20% ปล่อยให้อากาศแห้ง
5. สังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อการแช่ ค้นหาจุดสิ้นสุดของการแพร่กระจาย

สิ่งสำคัญคืออย่าใช้ความร้อนเพื่อแก้ไขหรือทำให้แห้งเพราะจะทำให้แคปซูลเสียหาย อย่าล้างด้วยน้ำ

การตีความ

นมสีรุ้งเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ยอดเยี่ยมเนื่องจากให้สารอาหารที่จำเป็นสำหรับจุลินทรีย์ในการพัฒนาแคปซูลที่โดดเด่น

ในทางกลับกันนมสีรุ้งจะสร้างก้นที่หนาและกะทัดรัดซึ่งจะย้อมเป็นสีม่วงพร้อมกับตัวแบคทีเรีย แต่แคปซูลที่ล้อมรอบจุลินทรีย์จะยังคงไม่มีสี ดังนั้นจึงสังเกตเห็นรัศมีที่ชัดเจนรอบตัวแบคทีเรีย

การแสดงภาพกราฟิกเกี่ยวกับการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ของรอยเปื้อน Klebsiella pneumoniae ที่เปื้อนด้วยคราบของ Anthony ที่มา: จัดทำโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil.

ความได้เปรียบ

เป็นเทคนิคง่ายๆในการดำเนินการ ไม่ต้องการการแก้ไข

นอกจากนี้ควรสังเกตว่าสามารถใช้อาหารเลี้ยงเชื้ออื่น ๆ ได้ แต่ควรใช้อาหารเลี้ยงลูกด้วยนมเนื่องจากมีข้อได้เปรียบในการให้แคปซูลที่โดดเด่นกว่า

ข้อเสีย

เป็นเทคนิคที่ใช้แรงงานมากกว่าการย้อมสีลบเล็กน้อยและการสร้างภาพต้องรอให้การเตรียมแห้งสนิท

- การย้อมสีแบบลบ

วัสดุ

- สไลด์สไลด์

- อาหารเลี้ยงเชื้อด้วยจุลินทรีย์

- หมึกจีนหรือนิโครซีน

- กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง

- น้ำเกลือทางสรีรวิทยา

กระบวนการ

หยดน้ำเกลือทางสรีรวิทยาลงบนฝาปิดและละลายส่วนเล็ก ๆ ของเชื้อจุลินทรีย์ สิ่งสำคัญคือต้องเตรียมไม่หนาเกินไป จากนั้นหยดหมึกจีนหรือนิโครซีนแล้วผสม

จากนั้นวางแผ่นปิดคลุมไว้บนส่วนเตรียมโดยไม่ให้ของเหลวล้น สังเกตได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์โดยโฟกัสไปที่วัตถุประสงค์ 10X ก่อนแล้วจึงย้ายไปที่ 40X

เทคนิคนี้สามารถใช้กับตัวอย่าง CSF ได้โดยตรง นั่นคือแทนที่จะวางเชื้อจุลินทรีย์หยดหนึ่งหยดน้ำไขสันหลังจะถูกวางลง

ความได้เปรียบ

เป็นวิธีการง่ายๆในการดำเนินการและราคาไม่แพงในเวลาเดียวกัน ไม่จำเป็นต้องมีการตรึงหรือทำให้แห้งของการเตรียม

ข้อเสีย

ข้อเสียคือต้องสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์ก่อนที่สารเตรียมจะแห้งเนื่องจากหากสิ่งนี้เกิดขึ้นจุลินทรีย์จะหดตัวซึ่งจะทำให้การมองเห็นเป็นเรื่องยาก

ในทางกลับกันผลบวกปลอมอาจเกิดขึ้นได้หากนักวิเคราะห์ไม่มีประสบการณ์เนื่องจากเม็ดเลือดขาวมักสับสนกับยีสต์

การสังเกตยีสต์แคปซูลด้วยหมึกจีนหรือเทคนิคนิโกรซินควรได้รับการพิจารณาโดยสันนิษฐานว่าเป็น Cryptococcus neoformans จนกว่าจะแสดงให้เห็นด้วยวัฒนธรรม

เนื่องจากมียีสต์อื่น ๆ ที่อาจเป็นสาเหตุของเยื่อหุ้มสมองอักเสบและไม่ใช่แค่ Cryptococcus neoformans เช่น Candida และ Rhodotorula รวมถึง Cryptococcus สายพันธุ์อื่น ๆ

การตีความ

หากมีจุลินทรีย์ที่ถูกแคปซูลจะสังเกตเห็นพื้นหลังสีเข้มโดยมีร่างโปร่งใสลอยอยู่ในของเหลวโดยเน้นที่แคปซูล

Cryptococcus neoformans แคปซูลย้อมด้วยหมึกจีน ที่มา: เครดิตรูปภาพ: Content Providers (s): CDC / Dr. Leanor haley

- เทคนิคหมึกอินเดีย

เทคนิคนี้สามารถทำได้ด้วยไนโกรซีน เป็นการผสมผสานระหว่างเทคนิคที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ เทคนิคนี้ใช้คริสตัลไวโอเลตและหมึกอินเดียหรือนิโครซีน

ร่างกายของแบคทีเรียเปลี่ยนเป็นสีม่วงจากคริสตัลไวโอเลตเนื่องจากมีประจุไฟฟ้าเป็นลบในขณะที่นิโกรซินทำสีที่ด้านล่างของสเมียร์ หากแบคทีเรียมีแคปซูลจะปรากฏเป็นรัศมีโปร่งใสรอบ ๆ จุลินทรีย์

คริสตัลไวโอเลตสามารถถูกแทนที่ได้ด้วยสีเหล่านี้: ซาฟรานิน, ฟูชซินพื้นฐานหรือเมทิลีนบลู

วัสดุ

- แก้วสีม่วง

- ไนโกรซีนหรือหมึกอินเดีย

- สไลด์สไลด์

- กล้องจุลทรรศน์

กระบวนการ

- เพาะเชื้อจุลินทรีย์ในอาหารเลี้ยงเชื้อ

- วางวัฒนธรรมหยดลงที่ส่วนท้ายของสไลด์และถัดจากนั้นวางหยดหมึกคริสตัลอินเดียหรือนิโกรซีนผสมและเกลี่ยด้วยปลายสไลด์อีกอัน

- ผึ่งลมให้แห้งอย่าให้ร้อน

- ปิดทับด้วยสารละลายคริสตัลไวโอเล็ตเป็นเวลา 1 นาทีล้างด้วยน้ำกลั่น แต่ให้ละเอียดมาก (เจ็ตอ่อน) ปล่อยให้แห้งในที่โล่ง

- สังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อการแช่ ค้นหาจุดสิ้นสุดของการแพร่กระจาย

การตีความ

จะเห็นตัวแบคทีเรียสีม่วงและพื้นหลังสีเข้ม หากมีแคปซูลจะไม่มีสีรอบ ๆ แบคทีเรีย

อ้างอิง

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. เทคนิคพื้นฐานทางจุลชีววิทยา. การสังเกตแบคทีเรีย Reduca (ชีววิทยา) ชุดจุลชีววิทยา พ.ศ. 2553; 3 (5): 15-38. ง
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. คราบพื้นฐานในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. มีจำหน่ายที่: medigraphic.com
3. Gil M. การย้อมสีเชิงลบ: เหตุผลเทคนิคข้อดีและข้อเสีย Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 เอ็ด อาร์เจนตินา. กองบรรณาธิการ Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule Stain: หลักการขั้นตอนและผลลัพธ์. 2019. คู่มือจุลชีววิทยาทางการแพทย์. มีจำหน่ายใน: microbeonline.com