- รากฐาน
- พื้นฐานการทดสอบ Voges-Proskauer
- พื้นฐานการเปิดเผยและการตีความหลักฐาน
- การจัดเตรียม
- MR / VP ขนาดกลาง
- Voges น้ำยา
- น้ำยา Voges B
- ขั้นตอนการทดสอบ Voges-Proskauer
- ทดสอบการพัฒนา
- ใช้
- ระบบประกันคุณภาพ
- อ้างอิง
การทดสอบVoges-Proskauerเป็นการทดสอบทางชีวเคมีที่ใช้เพื่อช่วยในการระบุแบคทีเรียที่อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการแยกสายพันธุ์ Escherichia coli จาก Klebsiella และ Enterobacter เป็นต้น
การทดสอบจะดำเนินการในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวที่เรียกว่า Methyl Red - Voges Proskauer ซึ่งรู้จักกันดีในชื่อย่อ RM / VP สารนี้ประกอบด้วยโพลีเปปโตนบัฟเฟอร์กลูโคสไดโปตัสเซียมฟอสเฟตและน้ำกลั่น
Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) สื่อการค้า / VP ทดสอบเป็นบวกและลบตามลำดับ ที่มา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15 จาก Wikimedia Commons
สื่อ RM / VP ในปัจจุบันเป็นการดัดแปลงสื่อ Clark and Lubs ซึ่งเดิมมีความเข้มข้นของเปปโตนและกลูโคสที่ต่ำกว่า ดังนั้นจึงมีการผลิตไฮโดรเจนไอออนน้อยลงซึ่งจำเป็นสำหรับปฏิกิริยา Voges-Proskauer ในเชิงบวก
การทดสอบขึ้นอยู่กับความสามารถของจุลินทรีย์ในการใช้กลูโคสผ่านเส้นทางบิวทิลีน - ไกลคอลและสร้างผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายที่เป็นกลางเรียกว่าอะซิโทอินต่อหน้าออกซิเจนและ pH ที่เป็นด่าง
ในสื่อ RM / VP นอกจากจะสามารถเปิดเผยการทดสอบ Voges-Proskauer แล้วยังสามารถเปิดเผยการทดสอบเมธิลเรดได้อีกด้วย
รากฐาน
พื้นฐานการทดสอบ Voges-Proskauer
pluripeptones ที่มีอยู่ในสื่อให้ความต้องการทางโภชนาการที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย ในส่วนของกลูโคสเป็นสารประกอบหลัก แบคทีเรียหลายชนิดมีความสามารถในการเผาผลาญกลูโคสและสร้างกรดไพรูวิก
กรดไพรูวิกเป็นจุดกึ่งกลางในการเผาผลาญกลูโคสและจากที่นั่นจุลินทรีย์แต่ละชนิดสามารถใช้เส้นทางที่แตกต่างกัน บางชนิดจะสร้างกรดผสมเช่นกรดแลคติกกรดอะซิติกกรดฟอร์มิกและกรดซัคซินิกและอื่น ๆ จะสร้างผลิตภัณฑ์ที่เป็นกลางเช่น 2,3-butanediol
การทดสอบ Voges-Proskauer แสดงให้เห็นถึงความสามารถของจุลินทรีย์ในการสร้าง acetyl methyl carbinol (acetoin) ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ระดับกลางของ 2,3-butanediol ภายใต้สภาวะแอโรบิค
Acetoin จะลดลงและกลายเป็น 2,3-butanediol แต่ปฏิกิริยานี้สามารถย้อนกลับได้ดังนั้นหาก 2,3-butanediol ถูกออกซิไดซ์ acetoin จะเกิดขึ้น ดังนั้นออกซิเจนจึงมีความจำเป็น
Dipotassium phosphate เป็นบัฟเฟอร์ที่บัฟเฟอร์ของผสมที่ pH 6.9 ± 0.2
พื้นฐานการเปิดเผยและการตีความหลักฐาน
เพื่อแสดงให้เห็นถึงปฏิกิริยาการพัฒนาต้องดำเนินการโดยใช้รีเอเจนต์สองตัว (รีเอเจนต์ Barrit) ซึ่งเรียกว่า Voges A และ Voges B.
Voges A เป็นสารละลายα-naphthol 5% และ Voges B เป็นสารเตรียมโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 40% ถ้าไม่มีโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์สามารถแทนที่ด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ 40%
Α-Naphthol เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาที่จะเพิ่มความเข้มของสีปฏิกิริยาทำให้การทดสอบไวขึ้น ต้องเติมα-naphthol ก่อนเสมอโดยเขย่าท่อเพื่อให้ตัวกลางสัมผัสกับออกซิเจน ด้วยวิธีนี้ acetoin จะถูกออกซิไดซ์เป็น diacetyl และ 2,3-butanediol จะถูกออกซิไดซ์เพื่อสร้าง acetoin ส่งผ่านสิ่งนี้ไปยัง diacetyl
นี่คือวิธีที่α-naphthol จับกับ diacetyl ซึ่งจะเข้าร่วมกับนิวเคลียส guanidine ที่มีอยู่ในอาร์จินีนของกรดอะมิโนซึ่งต่อมามาจาก pluripeptones
โพแทสเซียมหรือโซเดียมไฮดรอกไซด์มีหน้าที่ในการดูดซับ CO 2และทำปฏิกิริยากับเปปโตน ปฏิกิริยานี้ทำให้เกิดเป็นสีชมพูปลาแซลมอนเห็นได้ชัดเจนหลังจากเขย่าท่อได้เป็นอย่างดี
ต้องผสม diacetyl, peptone และα-naphthol ในปริมาณที่ถูกต้องเพื่อให้สีเกิดขึ้นทันที หากไม่เกิดขึ้นหลอดจะได้รับอนุญาตให้พักเป็นเวลา 15 นาทีก่อนที่จะตีความ
การทดสอบมักจะเป็นบวกหลังจากผ่านไป 2 ถึง 5 นาทีเมื่อเห็นสีชมพูจาง ๆ หากปล่อยทิ้งไว้เป็นเวลา 30 นาทีถึง 1 ชั่วโมงความเข้มของสีจะสูงสุด (สีแดงเข้ม)
การทดสอบเชิงลบจะปรากฏขึ้นเมื่อน้ำซุปเปลี่ยนเป็นสีเหลือง หลังจากผ่านไป 1 ชั่วโมงหากการทดสอบเป็นลบอาจเกิดสีทองแดงอันเป็นผลมาจากปฏิกิริยาของโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์กับα-naphthol
การจัดเตรียม
MR / VP ขนาดกลาง
ชั่งน้ำหนักอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำ 17 กรัมและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ปล่อยให้ยืนเป็นเวลา 5 นาที ตั้งไฟให้เดือดให้ละลายหมด เสิร์ฟ 3 ถึง 4 มล. ในหลอดและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
อาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำจะมีสีเบจและอาหารที่เตรียมไว้จะเป็นสีเหลืองอำพัน
pH สุดท้ายของตัวกลางคือ 6.9 ± 0.2
Voges น้ำยา
ชั่งα-naphthol 5 กรัมและละลายในเอทิลแอลกอฮอล์ 50 มล. (สัมบูรณ์) จากนั้นเติมเอทิลแอลกอฮอล์ต่อไปจนครบ 100 มล.
น้ำยา Voges B
ชั่งโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ 40 กรัมแล้วละลายในน้ำกลั่น 50 มล. ในบีกเกอร์ ต้องวางแก้วในอ่างน้ำเย็นเพื่อควบคุมอุณหภูมิเนื่องจากเมื่อสารเตรียมละลายอุณหภูมิจะสูงขึ้นอย่างรวดเร็ว
หลังจากสารละลายเย็นแล้วจะถูกถ่ายโอนไปยังขวดวัดปริมาตรและเติมน้ำกลั่นได้ถึง 100 มล.
ขั้นตอนการทดสอบ Voges-Proskauer
เพื่อทำการทดสอบ Voges-Proskauer น้ำซุป RM / VP จะถูกฉีดวัคซีนด้วยจุลินทรีย์ที่อยู่ระหว่างการศึกษาจากการเพาะเลี้ยงบริสุทธิ์เป็นเวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมง
หัวเชื้อไม่ควรมีความหนาแน่นมาก มันถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงแม้ว่าบางครั้งจำเป็นต้องใช้การฟักตัวเป็นเวลาหลายวันก็ตาม Cowan และ Steel มีความเห็นว่า 5 วันเป็นเวลาฟักตัวขั้นต่ำที่จำเป็นในการตรวจหาสายพันธุ์ Voges-Proskauer (VP) ที่เป็นบวกทั้งหมดของตระกูล Enterobacteriaceae
ทดสอบการพัฒนา
แยกส่วนผสม 1 มล. ลงในหลอดและพัฒนาดังนี้: ใส่น้ำยา Voges A 12 หยด (0.6 มล.) และ Voges B 4 หยด (0.2 มล.) ผสมให้เข้ากันและปล่อยให้ตกตะกอน เป็นเวลา 5-10 นาทีก่อนที่จะตีความ อย่างไรก็ตามหากการทดสอบยังคงเป็นลบให้ปล่อยให้นั่งและสังเกตหลอดหลังจาก 30 นาทีถึง 1 ชั่วโมง
การปรากฏตัวของสีแดงอมชมพูแสดงว่าปฏิกิริยาของ Voges-Proskauer เป็นบวก หากตัวกลางยังคงเป็นสีเหลืองปฏิกิริยาจะเป็นลบ
การเพิ่มนักพัฒนาตามลำดับและปริมาณที่ระบุเป็นสิ่งสำคัญเพื่อหลีกเลี่ยงผลลบที่ผิดพลาด
ใช้
การทดสอบ Voges-Proskauer มีประโยชน์ในการแยกความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ของ E. coli ที่เป็น VP negative ของจำพวก Klebsiella, Enterobacter, Serratia และอื่น ๆ ที่เป็น VP positive
ที่มา: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
ระบบประกันคุณภาพ
สามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมเพื่อทดสอบคุณภาพของตัวกลางที่เตรียมไว้ ได้แก่ Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium และ Enterobacter cloacae ATCC 13047
ผลที่คาดว่าจะได้รับคือปฏิกิริยา Voges-Proskauer ในเชิงบวกสำหรับ K. pneumoniae และ E. cloacae เท่านั้น ส่วนที่เหลือให้ปฏิกิริยาเชิงลบ
อ้างอิง
- Britannia Laboratories MR-VP ปานกลาง 2558 ดูได้ที่: www.britanialab.com
- ห้องปฏิบัติการไมโครกิต. M-Ident Voges Proskauer 2014. Available: http://www.medioscultivo.com
- Mac Faddin J. (2003). การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก 3rd ed. กองบรรณาธิการ Panamericana บัวโนสไอเรส. อาร์เจนตินา.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina