- รากฐาน
- การตีความ
- - การทดสอบการตกตะกอนของหลอด
- วัสดุ
- เทคนิค
- การตีความ
- - การทดสอบ Coagulase โดยใช้ไฟบริโนเจน
- ใช้
- ระบบประกันคุณภาพ
- ข้อ จำกัด
- อ้างอิง
การทดสอบโคอะกูเลสเป็นเทคนิคในห้องปฏิบัติการที่ใช้เพื่อเปิดเผยการมีอยู่ของโคอะกูเลสของเอนไซม์ เอนไซม์นี้มีคุณสมบัติในการแข็งตัวของพลาสมา Loeb ในปี 1903 เป็นคนแรกที่อธิบายถึงเอนไซม์นี้
การทดสอบนี้ดำเนินการกับ cocci Gram-positive, catalase-positive ซึ่งช่วยให้สามารถแยกแยะสายพันธุ์ Staphylococcus aureus ออกจากเชื้อ Staphylococci ที่เหลือเนื่องจากเป็นจุลินทรีย์เพียงชนิดเดียวที่มีความสำคัญทางคลินิกที่ผลิตได้
ภาพทั้งสองแสดงการทดสอบ Coagulase ในเชิงบวก ที่มา: ภาพซ้าย: Philippinjl. ภาพขวา: ภาพถ่ายโดยผู้เขียน MSc. Marielsa Gil.
ในแง่นี้สมาชิกของครอบครัว Staphylococaceae ที่ทดสอบค่าลบมักเรียกว่า coagulase negative Staphylococcus
มีบางสายพันธุ์นอกเหนือจาก S. aureus ที่สามารถสร้าง coagulase ได้เช่น Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius และ S. delphini
อย่างไรก็ตามสามอันดับแรกมีความสำคัญทางคลินิกในระดับสัตวแพทย์และแทบจะไม่พบว่าเป็นสาเหตุของการติดเชื้อในมนุษย์ในขณะที่ S. delphini พบในสภาพแวดล้อมทางทะเลเท่านั้น
นอกจากนี้ยังแยกความแตกต่างได้ง่ายเนื่องจาก S. hyicus และ S. intermedius ไม่หมัก mannitol และ S. schleiferi spp coagulans ไม่ได้หมักมอลโตสหรือทรีฮาโลสในขณะที่ S. aureus จะหมักคาร์โบไฮเดรตเหล่านี้
การปรากฏตัวของเอนไซม์ coagulase เชื่อมโยงกับความรุนแรงของสายพันธุ์ อย่างไรก็ตามทฤษฎีนี้ได้ถูกแยกออกจากกันเนื่องจากมีการสังเกตสายพันธุ์ coagulase-negative ที่รุนแรงอื่น ๆ ที่สามารถก่อให้เกิดการติดเชื้อที่สำคัญได้
รากฐาน
การตีความ
Agglutination ภายใน 5-20 วินาที (การทดสอบที่แข็งแกร่งในเชิงบวก)
การรวมตัวกันแบบแปรผันเกิดขึ้นระหว่าง 20 วินาทีถึงหนึ่งนาที (การทดสอบเชิงบวกล่าช้า)
การเกาะกลุ่มกันในระดับหนึ่งหลังจากผ่านไปหนึ่งนาที (หลักฐานที่น่าสงสัย) ขอแนะนำให้ทำการทดสอบซ้ำหรือยืนยันด้วยวิธีหลอด
ไม่มีการรวมตัวกัน (การทดสอบเชิงลบ)
ผลลัพธ์ด้วย SSF จะต้องให้ค่าลบเสมอหากให้ผลบวกโดยอัตโนมัติผลการทดสอบจะเป็นโมฆะ
- การทดสอบการตกตะกอนของหลอด
วัสดุ
- หลอดทดลองฆ่าเชื้อ
- พลาสม่า
-Bath of Mary ที่ 37 ° C
เทคนิค
ปิเปต 0.5 มล. ของพลาสมาลงในหลอดทดลอง 12 x 75 ด้วยปิเปตที่ปราศจากเชื้อใส่ห่วงทองคำขาวกับโคโลนีบริสุทธิ์ 2 ถึง 4 โคโลนีเพื่อศึกษาจากการเพาะเลี้ยงที่เป็นของแข็งเป็นเวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมงและละลายในพลาสมา ผสมอย่างระมัดระวังและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 4 ชั่วโมง
ตรวจสอบหลอดในชั่วโมงแรกโดยไม่ต้องเขย่าเพียงแค่เอียงเบา ๆ หากยังไม่เห็นก้อนสามารถสังเกตต่อไปได้ทุกๆ 30 นาทีจนกว่าจะครบ 4 ชั่วโมง หากผ่านไป 4 ชั่วโมงแล้วยังคงเป็นลบสามารถทิ้งไว้ได้นานถึง 24 ชั่วโมง แต่ในอุณหภูมิห้อง สังเกตและรายงานผล
จากประสบการณ์นักจุลชีววิทยาบางคนแนะนำให้ใช้สารแขวนลอยแบคทีเรีย 500 µl จากการเพาะเลี้ยง 18 ชั่วโมงในของเหลวเพื่อทำการทดสอบ
ดูเหมือนว่าจะให้ผลลัพธ์ที่รวดเร็วและเชื่อถือได้มากกว่าเมื่อทำการผสมโคโลนีจากสารทึบรังสีโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้ามีการใช้พลาสมาของมนุษย์ที่ได้รับจากธนาคารเลือด
การใช้สายพันธุ์จากน้ำซุปช่วยเจือจางการมีอยู่ของแอนติบอดีต่อต้านเชื้อ Staphylococcal ของมนุษย์ในพลาสมาที่สามารถยับยั้งการทำงานของ coagulase
การตีความ
หากเห็นก้อนที่ล้อมรอบของเหลวทั้งหมด (การแข็งตัวสมบูรณ์) หรือก้อนที่ไม่มีอะไรอยู่ในของเหลวที่เหลือ (การแข็งตัวบางส่วน) ควรได้รับการพิจารณาว่าเป็นการทดสอบในเชิงบวก
หากไม่มีก้อนเกิดขึ้นนั่นคือสารแขวนลอยยังคงเป็นเนื้อเดียวกันการทดสอบจะเป็นลบ
- การทดสอบ Coagulase โดยใช้ไฟบริโนเจน
Fibrinogen ใช้เช่นเดียวกับพลาสมาและใช้สำหรับการทดสอบทั้งแบบสไลด์และหลอด ดำเนินการตามที่อธิบายไว้สำหรับพลาสมาและตีความในลักษณะเดียวกัน
ใช้
ใช้เพื่อแยกความแตกต่างของ Staphylococcus aureus จาก coagulase negative staphylococci
ระบบประกันคุณภาพ
มีวัฒนธรรมใหม่ของสายพันธุ์ S. aureus เพื่อใช้เป็นการควบคุมเชิงบวก นอกจากนี้ยังมีสายพันธุ์ S. epidermidis เป็นตัวควบคุมเชิงลบ
ข้อ จำกัด
- ไม่ควรทิ้งการทดสอบในเชิงบวกไว้ในระยะฟักตัวเป็นเวลา 24 ชั่วโมงเนื่องจาก S. aureus จะสร้าง fibrinolysin ที่ละลายก้อนได้
- สำหรับการทดสอบที่เชื่อถือได้ควรใช้พลาสมาสดหรือที่สร้างขึ้นใหม่รวมทั้งการใช้เชื้อแบคทีเรียสด (18 ถึง 24 ชั่วโมง) เป็นสิ่งสำคัญ สิ่งนี้หลีกเลี่ยงผลลบที่ผิดพลาด
- การทดสอบจะต้องดำเนินการร่วมกับการควบคุมเชิงลบและเชิงบวก
- สื่อทึบบางชนิดอาจรบกวนการทดสอบการแข็งตัวของเลือด ไม่แนะนำให้ใช้โคโลนีจากวุ้นแมนนิทอลที่มีรสเค็ม
- หากใช้พลาสม่าซิเตรตแนะนำให้ใส่เฮปาริน 5 หน่วยต่อหนึ่งมิลลิลิตรของพลาสมาเพื่อหลีกเลี่ยงผลบวกปลอม เนื่องจากจุลินทรีย์บางชนิดที่ไม่ใช่ S. aureus สามารถสลายซิเตรตและทำให้พลาสมาจับตัวเป็นก้อน ในกรณีนี้ขอแนะนำให้ทำการทดสอบ Gram และ catalase
- เป็นสิ่งสำคัญในการทดสอบหลอดเพื่อตรวจสอบปฏิกิริยาทุก ๆ 30 นาทีเนื่องจากมี S. aureus สายพันธุ์ที่ผลิตไฟบริโนลิซินความเข้มข้นสูงและจะเจือจางก้อนที่เกิดขึ้นใหม่อย่างรวดเร็ว หลีกเลี่ยงเชิงลบที่ผิดพลาด
- เมื่อตรวจสอบการทดสอบหลีกเลี่ยงการเขย่าท่ออย่างกะทันหันสิ่งนี้สามารถทำลายจุดเริ่มต้นของการก่อตัวของก้อนที่จะไม่ถูกเรียกคืนในภายหลังทำให้เกิดผลลบที่ผิดพลาด
อ้างอิง
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา 5th ed. กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด กองบรรณาธิการ Panamericana SA Argentina
- Mac Faddin J. (2003). การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก 3rd ed. กองบรรณาธิการ Panamericana บัวโนสไอเรส. อาร์เจนตินา.
- ห้องปฏิบัติการ Pro-Lab กระต่ายจับตัวเป็นก้อนในพลาสมา มีจำหน่ายที่: pro-lab.com
- “ โคอากูเลส” Wikipedia สารานุกรมเสรี 12 ก.พ. 2019 04:23 UTC. 22 เม.ย. 2019, 15:50 น. wikipedia.org.